斯蒂尔综合征的啮齿动物模型制造技术

本公开涉及斯蒂尔综合征的啮齿动物模型。本文公开了经遗传修饰的啮齿动物，其携带在内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，所述突变等同于引起斯蒂尔综合征的人类突变。等同于引起斯蒂尔综合征的人类突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】斯蒂尔综合征的啮齿动物模型


[0001]本公开涉及人类疾病的动物模型。更具体地，本公开涉及斯蒂尔综合征(Steel Syndrome)的啮齿动物模型。本文公开了经遗传修饰的啮齿动物，其在内源性啮齿动物Col27a1基因中携带突变(等同于引起斯蒂尔综合征的人类突变)并且概括了在患有斯蒂尔综合征的人类中观察到的特征。
[0002]序列表以引用的方式并入
[0003]序列表为2019年5月21日创建的名称为35992PCT_10433WO01_SequenceListing、大小为75KB的ASCII文本文件，其经由EFS-Web提交给美国专利及商标局，并且以引用的方式并入本文。

技术介绍

[0004]在整个说明书中引用了各种出版物，包括专利、专利申请、公开的专利申请、登录号、技术文章和学术文章。这些引用的出版物中的每一个出于所有目的均全文以引用方式并入本文件中。
[0005]斯蒂尔综合征(MIM#615155)最早由Steel等人于1993年描述为在波多黎各的23名西班牙裔儿童中观察到骨科综合征(Steel等人,J.Bone Joint Surg.Am.75:259-264,1993)。主要临床特征包括先天性双侧髋和桡头脱位、身材矮小、腕骨联合、脊柱侧弯、足部畸形和轻度畸形特点(mildly dysmorphic features)。
[0006]对STLS患者的临床和遗传评价指出了与其他特征明确的骨骼发育异常和结缔组织障碍不同的独特遗传综合征。鉴定STLS的特征性特点的常见分子病因的尝试一直未成功，直到2015年Gonzaga-Jauregui等人才报道，COL27A1 p.Gly697Arg变体当处于纯合状态时是斯蒂尔综合征的分子原因并表明这种错义变化是波多黎各人血统个体中的首建者变体(Gonzaga-Jauregui等人,Europ.J.Hum.Genet.23:342-346,2015)。随后在包括多族裔人群的大型群组中的研究在另外的个体中鉴定出p.Gly697Arg变体。已经发表了另外的案例，将COL27A1中的新型罕见隐性突变与骨软骨发育异常表型关联起来，所述表型的特征与已报道的波多黎各斯蒂尔综合征患者的特征重叠，而且还具有不能归因于斯蒂尔综合征的附加特征，诸如听力损失和言语延迟(Gariballa等人,Am J Med Genet A.2017；173(5):1257-1263；Kotabagi等人,Clin Genet.2017；92(3):323-326)。

技术实现思路

[0007]本公开涉及斯蒂尔综合征的啮齿动物模型。更具体地，本公开提供了在内源性啮齿动物Col27a1基因中携带突变(等同于导致人类斯蒂尔综合征的人COL27A1基因中的突变)的经遗传修饰的啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)。
[0008]在一些实施方案中，本文公开了经遗传修饰的啮齿动物，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白的氨基酸位置697处的Gly至Arg取代(G697R)的在人COL27A1基因中的突变。
[0009]在一些实施方案中，啮齿动物是小鼠或大鼠。在某些实施方案中，啮齿动物是小鼠，并且内源性小鼠Col27a1基因中的突变导致小鼠Col27a1蛋白中氨基酸位置682处的Gly至Arg取代。在其他实施方案中，啮齿动物是大鼠，并且内源性大鼠Col27a1基因中的突变导致大鼠Col27a1蛋白中氨基酸位置691处的Gly至Arg取代。
[0010]在一些实施方案中，啮齿动物是小鼠。在一些实施方案中，小鼠是C57BL品系的，例如C57BL/A、C57BL/An、C57BL/GrFa、C57BL/KaLwN、C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6ByJ、C57BL/6N、C57BL/6NJ、C57BL/10、C57BL/10ScSn、C57BL/10Cr和C57BL/Ola。在其他实施方案中，小鼠是129品系的，例如129P1、129P2、129P3、129X1、129S1(例如，129S1/SV、129S1/SvIm)、129S2、129S4、129S5、129S9/SvEvH、129/SvJae、129S6(129/SvEvTac)、129S7、129S8、129T1、129T2。在某些实施方案中，小鼠是前述129品系的混合体(即杂交体)，或前述C57BL品系的混合体，或C57BL品系和129品系的混合体。在一些实施方案中，小鼠是C57BL/6N和129S6(129/SvEvTac)的杂交体。
[0011]在一些实施方案中，啮齿动物对于内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变是杂合的。在其他实施方案中，啮齿动物对于内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变是纯合的。
[0012]在一些实施方案中，啮齿动物是对于内源性小鼠Col27a1基因(例如，G682R)中的突变为杂合的C57BL/6N品系的小鼠。在一些实施方案中，啮齿动物是C57BL/6N和129S6(129/SvEvTac)的杂交体的并且对于内源性小鼠Col27a1基因(例如，G682R)是纯合的小鼠。
[0013]本文公开的啮齿动物(特别是对于与人COL27A1蛋白中编码G697R变异的突变等同的突变是纯合的啮齿动物、或对于所述突变是杂合的但不能表达野生型啮齿动物Col27a1蛋白的啮齿动物)表现出与斯蒂尔综合征相关的一种或多种异常。在一些实施方案中，所述异常选自由以下项组成的组：如与野生型啮齿动物相比，在3周龄时在脊柱中的严重胸椎后凸、体长减小、长骨长度降低、骨矿物质含量(BMC)降低、和体重减轻。
[0014]在一些实施方案中，本文公开了分离的啮齿动物细胞或组织，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白中的G697R取代的在人COL27A1基因中的突变。分离的细胞或组织可以是小鼠或大鼠的分离的细胞或组织。
[0015]在一些实施方案中，本文公开了分离的啮齿动物胚胎干细胞，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白中的G697R取代的在人COL27A1基因中的突变。分离的啮齿动物胚胎干细胞可以是小鼠或大鼠胚胎干细胞。
[0016]在一些实施方案中，本文公开了制备Col27a1突变型啮齿动物的方法，所述方法包括修饰啮齿动物基因组使得经修饰的基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白中的G697R取代的在人COL27A1基因中的突变；以及制备包含经修饰的基因组的Col27a1突变型啮齿动物。在一些实施方案中，通过将靶向核酸引入啮齿动物ES细胞的基因组中来修饰啮齿动物基因组，以获得其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变的突变型啮齿动物ES细胞；以及使用(a)的突变型啮齿动物ES细胞来制备Col27a1突变型啮齿动物。本申请的方法可以用于制备突变型小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经遗传修饰的啮齿动物，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白的氨基酸位置697处的Gly至Arg取代(G697R)的在人COL27A1基因中的突变。2.如权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠或大鼠。3.如权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠，并且所述内源性小鼠Col27a1基因中的所述突变导致在小鼠Col27a1蛋白中与所述人COL27A1蛋白的氨基酸位置697相对应的氨基酸位置处的Gly至Arg取代。4.如权利要求3所述的啮齿动物，其中所述小鼠Col27a1蛋白中的氨基酸位置是位置682。5.如权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是大鼠，并且所述内源性大鼠Col27a1基因中的所述突变导致在大鼠Col27a1蛋白中与所述人COL27A1蛋白的氨基酸位置697相对应的氨基酸位置处的Gly至Arg取代。6.如权利要求5所述的啮齿动物，其中所述大鼠Col27a1蛋白中的氨基酸位置是位置691。7.如权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变是纯合的。8.如权利要求7所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物表现出与斯蒂尔综合征相关的一种或多种异常。9.如权利要求8所述的啮齿动物，其中所述异常选自由以下项组成的组：如与野生型啮齿动物相比，在脊柱中严重的胸椎后凸、体长减小、长骨长度降低、骨矿物质含量(BMC)降低、头骨形状异常和体重减轻。10.一种分离的啮齿动物细胞或组织，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白中的G697R取代的在人COL27A1基因中的突变。11.如权利要求10所述的分离的细胞或组织，其中所述啮齿动物是小鼠或大鼠。12.一种分离的啮齿动物胚胎干(ES)细胞，其基因组包含内源性啮齿动物Col27a1基因中的突变，其中所述突变等同于导致在人COL27A1蛋白中的G697R取代的在人COL27A1基因中的突变。13.如权利要求12所述的分离的ES细胞，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：C冈扎加乔雷圭，CJ萧，H尼斯塔拉，KC纳努鲁，
申请(专利权)人：再生元制药公司，
类型：发明
国别省市：