抗CTLA4抗体及其制备和使用方法技术

本文提供了结合人CTLA4的交叉反应性抗体(或其抗原结合片段)、结合人CTLA4的可活化抗体、编码所述抗体的核酸分子、它们的药物组合物以及它们的治疗使用方法(例如用于治疗癌症)。症)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CTLA4抗体及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2018年2月2日提交的国际申请号PCT/CN2018/075064的优先权权益，所述国际申请以引用的方式整体并入本文。
[0003]采用ASCII文本文件进行的序列表提交
[0004]采用ASCII文本文件进行的以下提交的内容以引用的方式整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名称：695402000541SEQLIST.TXT，记录日期：2019年2月1日，大小：102KB)。


[0005]本公开涉及结合人细胞毒性T淋巴细胞蛋白4(CTLA4)的交叉反应性抗体、结合人CTLA4的精准/情形依赖性可活化抗体、编码所述抗体的核酸、它们的药物组合物以及它们的治疗用途。

技术介绍

[0006]CTLA4是免疫球蛋白(Ig)蛋白质超家族的起下调T细胞活化以及维持免疫原性体内平衡的作用的成员。已显示在同种同基因鼠前列腺癌模型中，体内抗体介导的CTLA4阻断使抗癌免疫应答增强(Kwon等(1997)Proc Natl Acad Sci USA，94(15)：8099-103)。此外，显示阻断CTLA4功能会在携带肿瘤的小鼠中，在各种肿瘤生长阶段下，使抗肿瘤T细胞应答增强(Yang等(1997)Cancer Res57(18)：4036-41；Hurwitz等(1998)Proc Natl Acad Sci USA 95(17)：10067-7)。然而，对适于人类使用的基于抗体的治疗剂的开发仍然是困难的，因为从临床前动物模型向人类安全性的转化经常是不良的。因此，存在对在不同物种诸如人和实验动物(例如小鼠、猴、大鼠等)之间具有交叉反应性的抗CTLA4抗体的需要，以并行地能够进行动物模型研究以及提供适合人治疗性候选物。此外，存在对开发仅在某些情形下诸如在富含蛋白酶的肿瘤微环境中具有活性的更安全抗CTLA4抗体的需要。
[0007]本文引用的所有参考资料，包括专利申请、专利公布、非专利文献和UniProtKB/Swiss-Prot/GenBank登录号，都以引用的方式整体并入本文，所述引用的程度就好像已特定地和单独地指出将每个单独的参考资料以引用的方式并入一样。

技术实现思路

[0008]为满足以上需要和其他需要，本文公开了结合人CTLA4的抗体(例如交叉反应性抗体)及其抗原结合片段。本公开的抗CTLA4抗体或其抗原结合片段具有以下功能性质中的至少一者(例如一者、一些或全部)：(a)以500nM或更小的K
D
结合人、食蟹猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4；(b)对人CTLA4具有拮抗活性；(c)在多达100nM的浓度下不结合人PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、TIM3、B7-H3、CD95、CD120a、OX40、CD40、BTLA、VISTA、ICOS和/或B7-H4；(d)与猴、小鼠、大鼠和/或狗CTLA4具有交叉反应性；(e)诱导ADCC效应(例如对Treg)；(f)使人PBMC活化(例如刺激IL-2和/或IFNγ的分泌)；(g)能够抑制肿瘤细胞生长以及建立针对肿瘤细胞的
免疫记忆；(h)对癌症具有治疗作用；和(i)阻断人CTLA4与人CD80和/或人CD86的结合(参见以下实施例1-实施例5)。
[0009]本文公开了当呈活性形式而非呈非活性形式时结合人CTLA4的精准/情形依赖性可活化抗体，即可活化抗体仅在裂解可裂解部分(CM)以移除掩蔽部分(MM)之后结合于CTLA4(具有活性)。在一些实施方案中，本文所述的所发现的掩蔽部分(MM)能够高效掩蔽抗体活性和/或降低或完全抑制抗原结合，同时在一些实施方案中，没有化学不稳定残基甲硫氨酸和/或色氨酸。此外，本文鉴定和描述的可活化抗体在治疗多种癌症类型方面与它们的亲本抗体同样高效，同时在易感动物(NOD小鼠)中具有显著降低的细胞毒性。
[0010]因此，在一个方面，本文提供了一种结合人CTLA4，并且与来自至少一种选自由食蟹猴、小鼠、大鼠和狗组成的组的非人动物的CTLA4多肽具有交叉反应性的抗CTLA4抗体(例如人抗体)。在一些实施方案中，抗体结合食蟹猴CTLA4和小鼠CTLA4。在可与任何先前实施方案组合的一些实施方案中，抗体以约350nM或更小(例如约300nM或更小、约200nM或更小、约100nM或更小、约50nM或更小、或约10nM或更小)的解离常数(K
D
)结合人CTLA4、食蟹猴CTLA4、小鼠CTLA4、大鼠CTLA4和/或狗CTLA4。在一些实施方案中，K
D
通过表面等离子体共振(SPR)测量。在一些实施方案中，抗体与CTLA4的结合诱导针对CTLA4表达性细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)。在一些实施方案中，抗体与CTLA4的结合诱导针对Treg细胞的ADCC。在一些实施方案中，本文所述的抗CTLA4抗体的结合诱导针对CTLA4表达性人细胞或人Treg细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，其中在体外，抗CTL4抗体的ADCC活性高于易普利单抗(ipilimumab)的ADCC活性，并且其中两种抗体均包含野生型人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，本文所述的抗CTLA4抗体的结合诱导针对CTLA4表达性人细胞或人Treg细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，其中在体外，抗CTLA4抗体的ADCC活性是易普利单抗的ADCC活性的两倍或更高，并且其中两种抗体均包含野生型人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，在体外，抗CTL4抗体ADCC活性的EC50是易普利单抗ADCC活性的EC50的50％或更小。用于测量ADCC活性的测定描述于实施例3和实施例15中。在一些实施方案中，在小鼠癌症模型中，相较于PBMC或脾，抗CTLA4抗体选择性地使肿瘤微环境中的Treg细胞消减(例如使肿瘤浸润性淋巴细胞中的Treg细胞的百分比降低)。参见例如实施例18。
[0011]在可与任何先前实施方案组合的一些实施方案中，抗体特异性结合包含在人CTLA4的配体结合位点诸如人CTLA4的CD80和/或CD86结合位点处的氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合与人CTLA4的配体结合位点诸如人CTLA4的CD80和/或CD86结合位点类似的表位。在一些实施方案中，抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO：207。在一些实施方案中，抗体不结合人CTLA4的残基I108，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO：207。在一些实施方案中，抗CTLA4抗体阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合。在一些实施方案中，对于阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合，抗CTLA4抗体具有的IC50高于易普利单抗的IC50。在一些实施方案中，在用CD86或CD80进行板结合，而CTLA4处于溶液中或CTLA4展示在细胞表面上的测定中，对于阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合，抗CT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗CTLA4抗体，其中所述抗体结合人CTLA4，并且与食蟹猴、小鼠、大鼠和狗CTLA4具有交叉反应性。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体以约350nM或更小的解离常数(K
D
)结合人CTLA4、食蟹猴CTLA4、小鼠CTLA4、大鼠CTLA4和狗CTLA4。3.如权利要求2所述的抗体，其中所述K
D
通过表面等离子体共振(SPR)测量。4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗CTLA4抗体的结合诱导针对CTLA4表达性人细胞或人Treg细胞的抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，其中所述抗CTL4抗体的ADCC活性高于易普利单抗的ADCC活性。5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中(a)所述抗体特异性结合包含人CTLA4的氨基酸残基Y105和L106，但不包含残基I108的表位，其中氨基酸残基的编号根据SEQ ID NO：207；和/或(b)在其中当CD80和/或CD86进行板结合时，或当人CTLA4存在于细胞表面上时的测定中，对于阻断CD80和/或CD86与人CTLA4的结合，所述抗CTLA4抗体具有的IC50高于易普利单抗的IC50。6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，a)其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(I)：X1TFSX2YX3IHWV(SEQ ID NO：1)，其中X1是F或Y，X2是D或G，并且X3是A、G或W；式(II)：YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQ ID NO：2)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D或S；和式(III)：FSLSTGGVAVX1WI(SEQ ID NO：3)，其中X1是G或S；其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(IV)：IGX1IX2HSGSTYYSX3SLKSRV(SEQ ID NO：4)，其中X1是D或E，X2是S或Y，并且X3是P或Q；式(V)：IGX1ISPSX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQ ID NO：5)，其中X1是I或W，X2是G或S，X3是G或S，并且X4是K或N；和式(VI)：VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQ ID NO：6)，其中X1是A、G或S，X2是S或Y，X3是G或S，并且X4是S或T；并且其中所述HVR-H3包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(VII)：ARX1X2X3X4FDX5(SEQ ID NO：7)，其中X1是G、R或S，X2是A、I或Y，X3是D、V或Y，X4是A、E或Y，并且X5是I或Y；式(VIII)：ARX1GX2GYFDX3(SEQ ID NO：8)，其中X1是D或L，X2是F或Y，并且X3是V或Y；式(IX)：ARX1X2X3X4AX5X6FDY(SEQ ID NO：9)，其中X1是L或R，X2是I或P，X3是A或Y，X4是S或T，X5是T或Y，并且X6是A或Y；式(X)：ARDX1X2X3GSSGYYX4GFDX5(SEQ ID NO：10)，其中X1是I或V，X2是A或H，X3是P或S，X4是D或Y，并且X5是F或V；并且b)其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中所述HVR-L1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(XI)：RASQX1X2X3SX4LX5(SEQ ID NO：11)，其中X1是G或S，X2是I或V，X3是G或S，X4是S或Y，并且X5是A或N；
式(XII)：RASQX1VX2X3RX4LA(SEQ ID NO：12)，其中X1是S或T，X2是F、R或S，X3是G或S，并且X4是F或Y；和式(XIII)：RASX1SVDFX2GX3 SFLX4(SEQ ID NO：13)，其中X1是E或Q，X2是D、F、H或Y，X3是F、I或K，并且X4是A、D或H；其中所述HVR-L2包含根据式(XIV)：X1ASX2X3X4X5GX6(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，其中X1是A或D，X2是N、S或T，X3是L或R，X4是A、E或Q，X5是S或T，并且X6是I或V；并且其中所述HVR-L3包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(XV)：YCX1X2X3X4X5X6PX7T(SEQ ID NO：15)，其中X1是E、Q或V，X2是H或Q，X3是A、G、H、R或S，X4是D、L、S或Y，X5是E、G、P、Q或S，X6是L、T、V或W，并且X7是F、L、P、W或Y；式(XVI)：YCQQX1X2X3WPPWT(SEQ ID NO：16)，其中X1是S或Y，X2是D或Y，并且X3是Q或Y；和式(XVII)：YCQX1YX2SSPPX3YT(SEQ ID NO：17)，其中X1是H或Q，X2是T或V，并且X3是E或V。7.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述HVR-H1包含选自由SEQ ID NO：18-29组成的组的氨基酸序列，所述HVR-H2包含选自由SEQ ID NO：30-39组成的组的氨基酸序列，所述HVR-H3包含选自由SEQ ID NO：40-52组成的组的氨基酸序列，所述HVR-L1包含选自由SEQ ID NO：53-65组成的组的氨基酸序列，所述HVR-L2包含选自由SEQ ID NO：66-69组成的组的氨基酸序列，并且所述HVR-L3包含选自由SEQ ID NO：70-81组成的组的氨基酸序列。8.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)含有SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：53的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：70的氨基酸序列的HVR-L3；b)含有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：31的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：41的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：54的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：71的氨基酸序列的HVR-L3；c)含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：42的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：55的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：72的氨基酸序列的HVR-L3；d)含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：43的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：56的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：73的氨基酸序列的HVR-L3；e)含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：34的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：44的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的HVR-L3；f)含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：45的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：58的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的HVR-L3；g)含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：46的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：59的氨基酸序列的HVR-L1、
含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：76的氨基酸序列的HVR-L3；h)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：36的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：47的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：60的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：69的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：77的氨基酸序列的HVR-L3；i)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：61的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的HVR-L3；j)含有SEQ ID NO：27的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：32的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：62的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的HVR-L3；k)含有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：50的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：63的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的HVR-L3；1)含有SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：51的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：64的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：67的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：81的氨基酸序列的HVR-L3；或m)含有SEQ ID NO：29的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO：52的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：65的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO：68的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO：77的氨基酸序列的HVR-L3。9.如权利要求7或权利要求8所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO：82-94组成的组的氨基酸序列或与选自由SEQ ID NO：82-94组成的组的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，及/或所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO：95-107组成的组的氨基酸序列或与选自由SEQ ID NO：95-107组成的组的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。10.如权利要求7-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)含有SEQ ID NO：82的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：95的氨基酸序列的轻链可变区；b)含有SEQ ID NO：83的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：96的氨基酸序列的轻链可变区；c)含有SEQ ID NO：84的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的轻链可变区；d)含有SEQ ID NO：85的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：98的氨基酸序列的轻链可变区；e)含有SEQ ID NO：86的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：99的氨基酸序列的轻链可变区；f)含有SEQ ID NO：87的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：100的氨基酸序列的轻链可变区；g)含有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：101的氨基酸序列的轻链可变区；
h)含有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的轻链可变区；i)含有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的轻链可变区；j)含有SEQ ID NO：91的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的轻链可变区；k)含有SEQ ID NO：92的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：105的氨基酸序列的轻链可变区；l)含有SEQ ID NO：93的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：106的氨基酸序列的轻链可变区；或m)含有SEQ ID NO：94的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：107的氨基酸序列的...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗培志，杜方勇，潘忠宗，刘桂中，
申请(专利权)人：天演药业公司，
类型：发明
国别省市：