一种转氨酶UPTA、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种转氨酶UPTA，所述转氨酶UPTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。在合适温度及pH下，本发明专利技术的转氨酶UPTA对HFB1的降解率为100％；本发明专利技术转氨酶UPTA性质优良，该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素FB1对动物及人类健康的危害。对动物及人类健康的危害。对动物及人类健康的危害。

【技术实现步骤摘要】
一种转氨酶UPTA、制备方法和应用


[0001]本专利技术属于农业生物
，尤其是一种转氨酶UPTA、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]伏马毒素是一类由串珠镰刀菌、多育镰刀菌等镰刀菌属在特定条件下产生的次级代谢产物，是一种污染分布较为普遍的真菌毒素，目前已鉴定出28种伏马毒素类似物，被分为A、B、C和P四个系列。其中FB1的污染最广泛，且毒性最强。它会引起马的白质脑软化和猪的肺水肿，也会影响家禽的肝脏和免疫系统。
[0003]消除食品和饲料中伏马毒素污染的缓解策略分为物理方法、化学方法和生物方法。物理方法，包括加工过程处理法、热处理法、辐照处理法和吸附法。然而，这些策略或因为使用仪器昂贵，而且会造成饲料中某些营养成分的损失，因此存在局限性。氨化和碱化是最常见的化学脱毒方法，但由于其潜在的毒性和对原料的口感与营养品质存在负面影响，其应用也受到限制。生物脱毒技术可以在不影响食品和饲料质量的前提下降低霉菌毒素毒性，被认为是一种很有前途的脱毒策略。酶制剂在存贮方面相比于微生物制剂而言具有更高的稳定性，因此，研发降解真菌毒素的酶制剂，可以很好地遏制被污染的粮食作物中的毒素的产生，挽回经济损失。
[0004]通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种转氨酶UPTA、制备方法和应用，该转氨酶UPTA能够降解伏马毒素中的氨基以解除其毒性。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一种转氨酶UPTA，所述转氨酶UPTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。
[0008]如上所述的转氨酶UPTA的制备方法，步骤如下：
[0009]⑴
用包含编码所述转氨酶UPTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
[0010]⑵
培养重组菌株，诱导转氨酶UPTA表达；
[0011]⑶
分离纯化获得的转氨酶UPTA。
[0012]而且，所述步骤
⑴
中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞。
[0013]如上所述的转氨酶UPTA在降解伏马毒素方面中的应用。
[0014]一种编码如上所述的转氨酶UPTA的转氨酶UPTA基因。
[0015]而且，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。
[0016]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组载体。
[0017]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组载体pET28a(+)-UPTA。
[0018]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组菌株。
[0019]而且，所述重组菌株为大肠杆菌。
[0020]本专利技术取得的优点和积极效果为：
[0021]本专利技术转氨酶UPTA可以降解催化水解伏马毒素FB1(HFB1)的氨基，消除伏马毒素的活性。由于氨基是使得伏马毒素具有毒性作用的关键官能团之一，因此去除氨基是解除伏马毒素毒性的关键点。本专利技术的转氨酶UPTA具有降解水解伏马毒素HFB1的活性，可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素对动物及人类健康的危害。
附图说明
[0022]图1为本专利技术中转氨酶UPTA的SDS-PAGE蛋白洗脱图；其中，M：蛋白marker；1:转氨酶UPTA未纯化蛋白；2：转氨酶UPTA纯化蛋白；
[0023]图2为本专利技术中显示转氨酶UPTA的降解效果示意图；其中，(a)为缓冲液与HFB1的混合溶液；(b)为酶液与HFB1的反应；
具体实施方式
[0024]下面详细叙述本专利技术的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0025]本专利技术中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本专利技术中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
[0026]一种转氨酶UPTA，所述转氨酶UPTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。
[0027]如上所述的转氨酶UPTA的制备方法，步骤如下：
[0028]⑴
用包含编码所述转氨酶UPTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
[0029]⑵
培养重组菌株，诱导转氨酶UPTA表达；
[0030]⑶
分离纯化获得的转氨酶UPTA。
[0031]较优地，所述步骤
⑴
中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞，优选为大肠杆菌BL21(DE3)。
[0032]如上所述的转氨酶UPTA在降解伏马毒素方面中的应用。
[0033]一种编码如上所述的转氨酶UPTA的转氨酶UPTA基因。
[0034]较优地，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。
[0035]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组载体。
[0036]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组载体pET28a(+)-UPTA。
[0037]包含如上所述的转氨酶UPTA基因的重组菌株。
[0038]较优地，所述重组菌株为大肠杆菌。
[0039]具体地，所述转氨酶UPTA，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
[0040]SEQ ID NO.1：
[0041]MAWTNKRALELRDRAEQVIPGGMYGHEATTLMPAEFPQFFSRGKGARLWDADDNEYVDFLCAWGPNLLGYGFEPVEAAAAAQQARGDTLTGPSEVMIDLAEAFTGMVSHADWAMFCKNGTDATSMAMVTARAHTGRKTILVARGAYHGAAPWCTPRTAGILPEDRAHVVHYDYNDADSLADAFKAHEGDVAGVFATPFRHEVLADQHDALLEYALAARALCDQTGALLIVDEVRAGFRLARDSSWSTLGVKPDLSTWGKCFANGYPISALLGANVAREAAKQIFVTGSFWFSATPMAAAVETLRQIRETDYLERLIGAGRRFREGLQQQAASHGFGLRQTGPVQMPQILFEDDPDFRIGYGWVSECLKRGVYLSPYHNMFLSSAHSEADIAQTLAATDEAFEALKTRVGRLEPHPALIALMAG
[0042]其中，该酶基因编码423个氨基酸，没有信号肽，因此，成熟的转氨酶UPTA的理论分
子量为46.19kDa。
[0043]本专利技术提供了编码上述转氨酶UPTA。该基因的基因组序列如SEQ ID NO.2所示：
[0044]SEQ ID NO.2：
[0045]ATGGCTTGGACTAACAAGAGAGCCTTGGAGTTGAGAGACAGAGCTGAGCAAGTTATCCCAGGTGGTATGTACGGTCACGAGGCTACTACTTTGATGCCAGCTGAGTTCCCACAGTTCTTC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转氨酶UPTA，其特征在于：所述转氨酶UPTA的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。2.如权利要求1所述的转氨酶UPTA的制备方法，其特征在于：步骤如下：
⑴
用包含编码所述转氨酶UPTA的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
⑵
培养重组菌株，诱导转氨酶UPTA表达；
⑶
分离纯化获得的转氨酶UPTA。3.根据权利要求2所述的转氨酶UPTA的制备方法，其特征在于：所述步骤
⑴
中宿主细胞为大肠细胞、啤酒酵母细胞或多型逊...

【专利技术属性】
技术研发人员：李中媛，张同存，潘昆岗，罗学刚，宋亚囝，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：