一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法技术

本申请公开一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法。该方法制备的脂质体将姜黄素包裹在脂质双分子层中,这样克服姜黄素水溶性差和生物利用度低的问题。同时该佐剂具有明显的缓释效果,可延长药物在体内的循环时间,提高药物的稳定性，辅助激活免疫应答反应，增加炎症因子分泌，提高抗体滴度，延长免疫保护时间，减少免疫次数、降低毒副作用和动物应激反应。与传统动物用疫苗佐剂相比，纳米姜黄素脂质体疫苗佐剂具有明显的优势。苗佐剂具有明显的优势。苗佐剂具有明显的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法


[0001]本申请涉及生物
，具体的涉及一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]姜黄素是一种黄色素，从姜黄中提取，多用于食品着色，是一种常用的天然色素。具有邻二羟基基因的姜黄素在抗氧化过程中，会产生稳定性很好的醌类物质，使其成为抗氧化物质的冠军。诸多研究表明具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗人免疫缺陷病毒等作用，目前，国内外对姜黄素的研究主要集中于药物代谢动力学以及抗肿瘤、抗炎和抗病毒效应。但是姜黄素本身因水溶性差、生物利用度低、半衰期短、易降解等缺点而制约了自身的使用。
[0003]佐剂是指能增强机体抗原免疫应答或改变免疫应答类型的物质，其主要作用是为了增强机体免疫系统的反应强度和持久性。现有疫苗佐剂多为油佐剂或铝胶佐剂，存在局部刺激大、不良反应多、疫苗稳定性差、效力不高等问题。目前我国疫苗企业使用的佐剂主要依赖进口，造成疫苗制剂的生产成本大幅度提高和产品价格上涨。此外，现有疫苗佐剂产生免疫保护率低、免疫期短，同时油乳剂不易被机体吸收并有刺激性，容易导致注射部位红肿或溃烂等副作用，影响动物产品的品质。随着人们对食品安全的高度关注，开发高效、安全、绿色的新型纳米佐剂具有广阔的应用前景。
[0004]因此，需要研制一种新型疫苗佐剂。

技术实现思路

[0005]为克服上述缺陷，本申请的目的在于提出一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法。该佐剂包含有姜黄素，因而具有较强的抗自由基，抗脂质过氧化和稳定细胞膜的作用，可抑制氧自由基的产生增加谷胱甘肽的水平，进而保护机体组织器官免受侵害。
[0006]为了达到以上目的，本申请如下技术方案：
[0007]一种姜黄素纳米脂质体佐剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含如下步骤：
[0008]S1.将质量比为0.05～0.4:2:1:1的姜黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPE分别溶解在有机溶剂中；
[0009]S2.超声震荡第一时间，使得黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPEPE充分混合,
[0010]S3.将无水乙醇的混合溶液滴加到去离子水中，所述去离子水处于40-45℃水浴条件下，并维持水浴旋转搅拌，
[0011]S4.在40-45℃的条件下真空旋转蒸发第二时间、以除去无水乙醇,获得姜黄素脂质体佐剂。
[0012]在一较佳的实施方式中，该步骤S1中，称取姜黄素1mg、大豆磷脂10mg、OTAP5mg及DOPE(二油酰基磷脂酰乙醇胺)5mg,并溶解在有机溶剂中。
[0013]在一较佳的实施方式中，该有机溶剂为无水乙醇。
[0014]在一较佳的实施方式中，该步骤S4中，包括真空度为0.1MPa和转速介于100～200r/min条件下，真空旋转蒸发30分钟。
[0015]在一较佳的实施方式中，该步骤S4中，还包括
[0016]S5.将获得的姜黄素脂质体佐剂依次通过滤膜筛选。
[0017]在一较佳的实施方式中，该步骤S5中包括所述姜黄素脂质体佐剂依次通过孔径为400nm、200nm及100nm的碳酸纤维膜筛选，以制备粒径均匀的姜黄素纳米脂质体佐剂。
[0018]本申请实施例提供一种上述制备方法制备的姜黄素纳米脂质体佐剂，所述姜黄素纳米脂质体佐剂的包封率超过88％。
[0019]有益效果
[0020]本申请提出的姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法。利用该制备方法制备的脂质体将姜黄素包裹在脂质双分子层中,这样克服姜黄素水溶性差和生物利用度低的问题。同时该佐剂具有明显的缓释效果,可延长药物在体内的循环时间,提高药物的稳定性，利用该佐剂制备的疫苗与传统动物用疫苗佐剂相比，纳米姜黄素脂质体疫苗佐剂具有明显的优势。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
[0022]图1为本申请实施例的纳米姜黄素脂质体佐剂的体外释放试验示意图。
[0023]图2为本申请实施例的制备的疫苗在不同实验组脾脏淋巴细胞IL-2分泌水平比较；
[0024]图3为本申请实施例的制备的疫苗在不同实验组脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平比较；
[0025]图4为本申请实施例的制备的疫苗不同实验组脾脏淋巴细胞IL-4分泌水平比较示意图；
[0026]图5为本申请实施例的制备的疫苗免疫后各组SPF鸡体内特异性抗体增长曲线示意图。
具体实施方式
[0027]以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本申请而不限于限制本申请的范围。实施例中采用的实施条件可以如具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。当用于权利要求书或说明书时，选择/可选/优选的“数值范围”既包括范围两端的数值端点，也包括相对于前述数值端点而言，所述数值端点中间所覆盖的所有自然数。
[0028]本申请揭示一种姜黄素纳米脂质体佐剂及其制备方法。制备的脂质体将姜黄素包裹在脂质双分子层中,这样克服姜黄素水溶性差和生物利用度低的问题。同时该佐剂具有
明显的缓释效果,可延长药物在体内的循环时间,提高药物的稳定性，辅助激活免疫应答反应，增加炎症因子分泌，提高抗体滴度，延长免疫保护时间，减少免疫次数、降低毒副作用和动物应激反应。与传统动物用疫苗佐剂相比，纳米姜黄素脂质体疫苗佐剂具有明显的优势。
[0029]接下来描述本申请提出的姜黄素纳米脂质体佐剂的制备方法，该方法包含如下步骤：
[0030]S1.将质量比为0.05～0.4:2:1:1的姜黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPE分别溶解在有机溶剂中；
[0031]S2.超声震荡第一时间(如5min)，使得黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPEPE充分混合,
[0032]S3.将无水乙醇的混合溶液滴加到去离子水中，所述去离子水处于40-45℃水浴条件下，并维持水浴旋转搅拌，
[0033]S4.在40-45℃的条件下真空旋转蒸发第二时间、以除去无水乙醇,获得姜黄素脂质体佐剂。
[0034]在一实施方式中，步骤S1中.称取姜黄素1mg，称取大豆磷脂10mg、DOTAP(2,3-二油酰基-丙基-三甲胺)5mg和DOPE(二油酰基磷脂酰乙醇胺)5mg,并溶解在有机溶剂中,
[0035]步骤S2.超声震荡5分钟，使得黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPEPE充分混合在无水乙醇中,
[0036]步骤S3.将10ml去离子水置于40-45℃水浴条件下，搅拌速度为100r/min，将该无水乙醇的混合溶液滴加到去离子水中并维持水浴搅拌，
[0037]步骤S4.在40-45℃、真空度0.1MPa和转速150r/min条件下，无水乙醇和去离子水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种姜黄素纳米脂质体佐剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含如下步骤：S1.将质量比为0.05～0.4:2:1:1的姜黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPE分别溶解在有机溶剂中；S2.超声震荡第一时间，使得黄素、大豆磷脂、DOTAP及DOPEPE充分混合,S3.将无水乙醇的混合溶液滴加到去离子水中，所述去离子水处于40-45℃水浴条件下，并维持水浴旋转搅拌，S4.在40-45℃的条件下真空旋转蒸发第二时间、以除去无水乙醇,获得姜黄素脂质体佐剂。2.如权利要求1所述的姜黄素纳米脂质体佐剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，分别称取姜黄素1mg、大豆磷脂10mg、OTAP5mg及DOPE5mg,并溶解在有机溶剂中。3.如权利要求1所述的姜黄素纳米脂质体佐剂的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，孙飞跃，王亚萍，
申请(专利权)人：江苏飞阳益科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：