一种纽莫康定B0的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种纽莫康定B0的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：将纽莫康定B0粗品上样至层析柱中，之后洗脱，得到纽莫康定B0纯品；所述层析柱为亲水层析柱，所述亲水层析柱的填料为均粒HILIC。本发明专利技术提供的纽莫康定B0的纯化方法纯度高、收率高、操作简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。大大降低了生产成本。大大降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种纽莫康定B0的纯化方法


[0001]本专利技术属于药物纯化领域，具体涉及一种纽莫康定B0的纯化方法，尤其涉及一种纯度高、收率高的纽莫康定B0的纯化方法。

技术介绍

[0002]纽莫康定B0(PneumocandinB0，简称PB0)是由真菌产生的次级代谢物，是合成抗真菌药物卡泊芬净(Caspofungin)的中间体。卡泊芬净是棘球白素B类药物，是一种β-(1,3)-葡聚糖合成酶的非竞争性抑制剂，可影响真菌细胞壁的合成，从而具有抗真菌的活性。纽莫康定B0由真菌发酵产生，发酵过程中会产生与PB0结构相似的多种产物如纽莫康定A0(简称PA0)，也有PB0的异构体纽莫康定C0(简称PC0)，从发酵液中分离PB0的方法非常复杂。PB0结构如下：
[0003][0004]CN102816207B公开了一种卡泊芬净前体pneumocandinB0组分的纯化方法，包括以下步骤：将PB0组分粗品进行反相柱层析，收集并减压浓缩，得到半纯品；将步骤1中所得PB0半纯品上正相柱层析，得高纯度PB0组分，正反相液相分析，色谱纯度均大于95％。该专利技术使用正、反相柱子，对PB0组分进行纯化，不仅纯化步骤简单，纯化效果好，而且对设备要求低，可实现规模化生产，生产可行性高；特别是该专利技术方法分离PB0组分收率高，而成本却较低。但是其采用了两种以上的层析分离操作，为了避免填料污染，中途添加了很多纯化步骤，这些步骤多次涉及到浓缩操作。而PB0的热稳定性较差，应在不超过50℃条件下浓缩，然而此温度下低浓度含水有机溶剂的浓缩需要时间较长，长时间浓缩会造成产品质量、收率的降低，生产操作繁琐。
[0005]CN110655557A公开了一种纽莫康定B0丝氨酸类似物的分离纯化方法，所述分离纯化方法包括以下步骤：a)用聚合物基质色谱填料进行第一次层析富集，等度洗脱，收集纯度＞30％部分；b)用亲水作用色谱填料进行第二次层析纯化，等度洗脱，收集纯度＞60％部分；c)用反相硅胶基质色谱填料进行第三次层析纯化，等度洗脱，收集纯度＞80％部分；d)第三次纯化后，纽莫康定B0丝氨酸类似物纯度＞80％的层析液，减压浓缩除去溶剂后冻干，
得到纽莫康定B0丝氨酸类似物。通过该制备方法得到的纯度＞80％的纽莫康定B0丝氨酸类似物进行了结构鉴定，为进一步进行生物活性的筛选或对其进行结构修饰后再进行生物活性筛选，奠定了基础。但该方法同样存在纯化步骤过多引起的浓缩导致收率下降的问题。
[0006]CN107778357B公开了一种纽莫康定B0的提取、纯化方法，包括：1)将含有纽莫康定B0的发酵液调整pH值，加入助滤剂，过滤得到菌渣；2)菌渣用高浓度甲醇水溶液或乙醇的水溶液浸提；3)用吸附树脂树脂吸附浸提液，用甲醇(乙醇)80-90％(V/V)-水溶液洗脱，收集富含纽莫康定B0的洗脱液；4)在纽莫康定B0的洗脱液中加入活性炭进行脱色处理；5)用吸附树脂吸附，80-100％(v/v)甲醇(乙醇)-水溶液洗脱树脂，收集富含纽莫康定B0的洗脱液；6)真空浓缩至得到纽莫康定B0粗品。通过提取纯化方法的改进，脱色除杂效果明显，产物纯度明显提高，生产成本低，工艺步骤简单、适合工业化生产。
[0007]目前对于纽莫康定B0的纯化尚无一种高效简单的方法。因此，如何提供一种高质量、高收率、简单的纽莫康定B0的纯化方法，成为了亟待解决的问题。

技术实现思路

[0008]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种纽莫康定B0的纯化方法，尤其提供一种纯度高、收率高的纽莫康定B0的纯化方法。本专利技术提供的纽莫康定B0的纯化方法纯度高、收率高、操作简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
[0009]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0010]本专利技术提供了一种纽莫康定B0的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：将纽莫康定B0粗品上样至层析柱中，之后洗脱，得到纽莫康定B0纯品。
[0011]所述层析柱为亲水层析柱，所述亲水层析柱的填料为均粒HILIC。
[0012]上述纯化方法通过选择特定填料和洗脱条件可使得到的纽莫康定B0纯品纯度达到99％以上，收率达到80％以上；同时操作简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。
[0013]优选地，所述洗脱的洗脱液包括水和有机溶剂。
[0014]优选地，所述有机溶剂包括乙腈和甲醇。
[0015]优选地，所述洗脱液中乙腈、甲醇和水的体积比为(68-72):(19-23):(5-13)，其中(68-72)中的具体数值可以是68、69、70、71或72等，(19-23)中的具体数值可以是19、20、21、22或23等，(5-13)中的具体数值可以是5、6、7、8、9、10、11、12或13等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0016]上述特定溶剂及其配比的选择可使纽莫康定B0与杂质充分分离。
[0017]优选地，所述均粒HILIC的微球型号为UniSil亲水硅胶，所述UniSil亲水硅胶的粒径为10μm，孔径为
[0018]优选地，所述纽莫康定B0粗品上样前还包括对层析柱进行再生和平衡。
[0019]上述再生与平衡可排除层析柱中干扰因素，保证洗脱过程稳定。
[0020]优选地，所述再生的溶液为乙腈与缓冲盐水溶液的混合溶液，所述乙腈与缓冲盐水溶液的体积比为1:0.8-1:1.2。
[0021]优选地，所述缓冲盐水溶液的浓度为20-100mM。
[0022]其中，乙腈与缓冲盐水溶液的体积比可以是1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1或1:1.2等，
浓度可以是20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0023]优选地，所述缓冲盐包括醋酸铵、醋酸钠、磷酸二氢钠或磷酸氢二钠中任意一种。
[0024]优选地，所述平衡的溶液为乙腈、甲醇和水混合溶液，所述乙腈、甲醇和水混合溶液中乙腈、甲醇和水的体积比为(68-72):(19-23):(5-13)，例如(68-72)中的具体数值可以是68、69、70、71或72等，(19-23)中的具体数值可以是19、20、21、22或23等，(5-13)中的具体数值可以是5、6、7、8、9、10、11、12或13等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0025]优选地，所述洗脱为等度洗脱，所述等度洗脱的流程为用洗脱液对层析柱冲洗，所述洗脱液的体积为9-11个柱体积，之后结束洗脱。
[0026]优选地，所述洗脱的流速为0.8-1.2mL/min。
[0027]其中，洗脱液的体积可以是9个柱体积、9.5个柱体积、10个柱体积、10.5个柱体积或11个柱体积等，流速可以是0.8mL/min、0.85mL/min、0.9mL/min、0.95mL/min、1mL/min、1.05本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：将纽莫康定B0粗品上样至层析柱中，之后洗脱，得到纽莫康定B0纯品；所述层析柱为亲水层析柱，所述亲水层析柱的填料为均粒HILIC。2.根据权利要求1所述的纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述洗脱的洗脱液包括水和有机溶剂。3.根据权利要求2所述的纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂包括乙腈和甲醇；优选地，所述洗脱液中乙腈、甲醇和水的体积比为(68-72):(19-23):(5-13)。4.根据权利要求1-3中任一项所述的纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述均粒HILIC的微球型号为UniSil亲水硅胶，所述UniSil亲水硅胶的粒径为10μm，孔径为5.根据权利要求1-4中任一项所述的纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述纽莫康定B0粗品上样前还包括对层析柱进行再生和平衡。6.根据权利要求5所述的纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，所述再生的溶液为乙腈与缓冲盐水溶液的混合溶液，所述乙腈与缓冲盐水溶液的体积比为1:0.8-1:1.2；优选地，所述缓冲盐水...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希，朱峰，陈可凡，陈强强，
申请(专利权)人：苏州纳微科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：