从条件性重编程细胞获得动物模型的方法以及该动物模型用于筛选抗肿瘤药物的用途技术

一种从条件性重编程肿瘤细胞获得用于筛选抗肿瘤药物的动物模型的方法以及使用该动物模型来筛选抗肿瘤药物的方法。物模型来筛选抗肿瘤药物的方法。物模型来筛选抗肿瘤药物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从条件性重编程细胞获得动物模型的方法以及该动物模型用于筛选抗肿瘤药物的用途


[0001]本专利技术涉及一种用于将从患者的肿瘤活检样本中获得的原代肿瘤细胞在体内和体外条件下培养的组合物、一种将所获得的原代肿瘤细胞在该组合物中培养的方法、一种使用该动物模型获得用于筛选抗肿瘤药效的动物模型的方法。

技术介绍

[0002]条件性重编程(CR)是一种可用于快速有效地从正常细胞和患病细胞(包括肿瘤细胞)建立来源于患者的细胞培养物的细胞培养技术。CR的最大优势在于其可以从患者组织样本中快速有效地扩增细胞培养物。这使得研究者可以足够快地筛选肿瘤对抗癌药物或免疫疗法的敏感性，从而提供临床使用信息。
[0003]在动物模型中测试抗肿瘤药物的功效是重要的，因为此类动物模型对于抗肿瘤药物筛选是重要的。此类动物模型将模拟患者的体内环境，反映出患者的响应，因此更加有效。为了建立动物模型，本领域技术人员通常需要获得数量足够多的肿瘤细胞。然而，从患者获得的肿瘤样本可能包含非常少量或者甚至微量的肿瘤细胞，这取决于获得它们的方式。例如，从穿刺活检获得的肿瘤样本可能包含非常少量的肿瘤细胞，因此，本领域技术人员难以使用它们来建立用于筛选抗肿瘤药物的所需动物模型。
[0004]通过条件性重编程而进行的肿瘤细胞永生化是针对基于细胞的诊断、药敏实验和体外生物样本库而产生培养肿瘤细胞的非常重要的工具。但是，如何有效且成功地培养从患者获得的原代肿瘤细胞(特别是从例如穿刺活检获得少量或者甚至微量的细胞样本)依然是一项挑战。

技术实现思路

>[0005]为了解决上述问题，对于来自多种肿瘤类型的原代肿瘤细胞，本专利技术人针对永生化成功地进行了条件性重编程，并使用经过条件性重编程的肿瘤细胞来建立用于测试抗肿瘤药物的动物模型。原代肿瘤细胞从手术组织、活检或穿刺活检样本中获得。本专利技术中获得的条件性重编程的原代肿瘤细胞显示出典型的克隆样生长，且在低温冻存后保持良好。一些情况下，细胞可多次传代，变成有用的细胞系。与原代肿瘤细胞一样，条件性重编程的肿瘤细胞对于在体外测试药物敏感性是可靠的。本专利技术人已经成功地将条件性重编程的肿瘤细胞(CRC)植入到用于测试药效的动物模型中，并使用该动物模型来筛选抗肿瘤药物。本专利技术还公开了条件性重编程的肿瘤细胞在药效试验中的用途。
[0006]本专利技术的一个方面提供了一种获得用于筛选抗肿瘤药物的动物模型的方法，其包括：
[0007](1)在组合物中培养从患者的肿瘤活检样本获得的原代肿瘤细胞，该组合物包含：
[0008]a)0.01-1.0mg/L氢化可的松；
[0009]b)1.0-10.0mg/L菊粉；
[0010]c)1.0-20.0μg/L霍乱毒素；
[0011]d)2.0-50.0mg/L腺嘌呤；
[0012]e)1.0-30.0μg/L EGF；
[0013]f)1.0-30.0μmol/L Y-27632；
[0014]g)青霉素/链霉素(Pen/Strep)；
[0015]h)2-20％FBS；
[0016]i)F12培养基；
[0017]j)高糖DMEM，以及可选地
[0018]k)非必需氨基酸溶液；
[0019]l)GlutaMAX补充剂；
[0020](2)将步骤(1)中获得的原代肿瘤细胞植入到动物中。在实施方案中，本专利技术方法的步骤(1)中的组合物包含：
[0021]a)0.3-0.5mg/L，优选0.4mg/L氢化可的松；
[0022]b)4-6mg/L，优选5mg/L菊粉；
[0023]c)7-9μg/L，优选8.3μg/L霍乱毒素；
[0024]d)20-30mg/L，优选24.2mg/L腺嘌呤；
[0025]e)8-12μg/L，优选10μg/L EGF；
[0026]f)8-12μmol/L，优选10μmol/L Y-27632；
[0027]g)青霉素/链霉素；
[0028]h)8-12％，优选10％FBS；
[0029]i)F12培养基；
[0030]j)高糖DMEM，以及可选地
[0031]k)非必需氨基酸溶液；
[0032]l)GlutaMAX补充剂。
[0033]在实施方案中，该肿瘤活检样本是穿刺活检样本。在实施方案中，从穿刺活检中获得的样本中原代肿瘤细胞的浓度小于约2mol/L、小于约1.9mol/L、小于约1.8mol/L、小于约1.7mol/L、小于约1.6mol/L、小于约1.5mol/L、小于约1.4mol/L、小于约1.3mol/L、小于约1.2mol/L、小于约1.1mol/L、小于约1.0mol/L、小于约0.9mol/L、小于约0.8mol/L、小于约0.7mol/L、小于约0.6mol/L、小于约0.5mol/L、小于约0.4mol/L、小于约0.3mol/L、小于约0.2mol/L、小于约0.1mol/L或更少，例如小于约2mol/L、小于约1.7mol/L、小于约0.8mol/L、小于约0.64mol/L、小于约0.59mol/L。在实施方案中，原代肿瘤细胞与滋养层细胞一起在步骤(1)的组合物中进行培养，尤其地，该滋养层细胞是小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞。在实施方案中，该MEF细胞用丝裂霉素C处理过。
[0034]在实施方案中，本专利技术中的动物是小鼠或大鼠，尤其是免疫缺陷小鼠，例如裸鼠。在实施方案中，步骤(1)中获得的原代肿瘤细胞在中空纤维中被植入动物中。在实施方案中，中空纤维由改良聚偏氟乙烯制成，更具体而言，中空纤维由改良聚偏氟乙烯制成，且可截留分子量为500000道尔顿。
[0035]本专利技术的另一个方面提供了一种通过本专利技术的方法获得的用于筛选抗肿瘤药物的动物模型。在实施方案中，本专利技术中的动物是小鼠或大鼠，尤其是免疫缺陷小鼠，例如裸
鼠。
[0036]本专利技术的另一个方面提供了一种使用本专利技术的动物模型来筛选抗肿瘤药物的方法，该方法包括向本专利技术的动物模型施用候选药物。在实施方案中，上述方法还包括在本专利技术的动物模型中测量肿瘤细胞生长。
附图说明
[0037]图1示出了来自各种肿瘤样本的克隆样生长中的条件性重编程细胞的形态。A，条件性重编程的原代细胞的P0、P4和P6代源自肺癌患者的手术样本；B，P3条件性重编程的细胞源自肺癌患者的活检样本；C，P4条件性重编程的细胞源自腺样囊性癌患者的穿刺活检样本；D，P12细胞源自腹膜间皮瘤患者的穿刺活检样本；E，P7细胞源自恶性胶质瘤患者的手术样本；F，P6细胞源自结直肠癌患者的活检样本；G，P3细胞源自胆囊癌患者的手术样本。
[0038]图2A，受试药物在MDX079 Mini-PDX模型中的抗肿瘤药效的结果；B，受试药物在MDX083 Mini-PDX模型中的抗肿瘤药效的结果；C，受试药物在MDX095 Mini-PDX模型中的抗肿瘤药效的结果；D，受试药物在MDX107 Mini-PDX模型本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种获得用于筛选抗肿瘤药物的动物模型的方法，包括：(1)在组合物中培养从患者的肿瘤活检样本获得的原代肿瘤细胞，所述组合物包含：a)0.01-1.0mg/L氢化可的松；b)1.0-10.0mg/L菊粉；c)1.0-20.0μg/L霍乱毒素；d)2.0-50.0mg/L腺嘌呤；e)1.0-30.0μg/L EGF；f)1.0-30.0μmol/L Y-27632；g)青霉素/链霉素；h)2-20％FBS；i)F12培养基；j)高糖DMEM，以及可选地k)非必需氨基酸溶液；l)GlutaMAX补充剂；(2)将步骤(1)中获得的原代肿瘤细胞植入到动物中。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中的所述组合物包含：a)0.3-0.5mg/L，优选0.4mg/L氢化可的松；b)4-6mg/L，优选5mg/L菊粉；c)7-9μg/L，优选8.3μg/L霍乱毒素；d)20-30mg/L，优选24.2mg/L腺嘌呤；e)8-12μg/L，优选10μg/L EGF；f)8-12μmol/L，优选10μmol/L Y-27632；g)青霉素/链霉素；h)8-12％，优选10％FBS；i)F12培养基；j)高糖DMEM，以及可选地k)非必需氨基酸溶液；l)GlutaMAX补充剂。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤活检样本是穿刺活检样本。4.根据权利要求1所述的方法，其中从穿刺活检中获得的所述样本中的所述原代肿瘤细胞的浓度小于约2mol/L、小于约1.9mol/L、小于约1.8mol/L、小于约1.7mol/L、小于约1.6mol/L、小于约1.5mol/L、小于约1.4mol/L、小...

【专利技术属性】
技术研发人员：闻丹忆，
申请(专利权)人：上海立迪生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：