一种复合免疫佐剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合免疫佐剂，所述复合免疫佐剂包含人参皂苷和纳米乳剂。本发明专利技术利用纳米乳剂与人参皂苷的协同免疫增强作用，以提高抗原的免疫原性和增强疫苗的免疫效果。本发明专利技术的配方可用作灭活疫苗、减毒疫苗、多糖疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的免疫佐剂。蛋白质疫苗或多肽疫苗的免疫佐剂。

【技术实现步骤摘要】
一种复合免疫佐剂及其应用


[0001]本专利技术涉及生物制药
，特别涉及一种复合免疫佐剂及其应用。

技术介绍

[0002]人参(Panaxginseng C.A.Mey)是一种药食两用的药用植物，具有抗肿瘤、抗疲劳、增强免疫力及抗衰老等功效。人参皂苷(Ginsenoside，GS)是其发挥功效的重要成分之一，皂苷是一种免疫调节剂，具有广泛的药理活性，对心血管、中枢神经系统、内分泌以及免疫系统等都具有显著的作用。人参皂苷按其苷元的化学结构可分为三类：1)人参二醇系皂苷，包括Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd；2)人参三醇系皂苷，包括Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1及三七皂苷(notoginsenoside)R1；3)齐墩果酸(oleanolicacid)为苷元的人参皂苷Ro。其中，Rg1属于原人参三醇型(Protopanaxatriol type，PPT)，人参皂苷Rg1作为人参的主要成分，具有抗肿瘤作用和类固醇激素样作用；可提高小鼠的非特异性免疫功能，但机制尚不明确。其中，Rg1结构如式I所示。
[0003][0004]纳米乳剂包括MF59、Stable emulsion、AS04、AF03等。其中，MF59是Chiron公司研制的一种水包油乳剂，含角鲨烯、聚山梨酯80和三油酸山梨坦。与未加佐剂的流感疫苗相比，含MF59佐剂疫苗对婴幼儿和老年人的同种和异种流感毒株均产生更强和持久的抗体反应。1997年，首个MF59
TM
佐剂季节性流感疫苗在欧洲批准用于65岁以上人群，目前已在近30个国家批准上市。对2,600多名不同年龄的志愿者(主要是65岁以上人群)进行含MF59佐剂流感疫苗Fluad的安全性和免疫原性临床评价，结果显示MF59佐剂三价流感疫苗的耐受性较好且免疫原性优于传统疫苗。与铝佐剂类似，MF59的作用机制尚不完全清楚，但有研究提示MF59等佐剂可诱导促炎细胞因子和趋化因子，这种促炎反应与注射部位抗原提呈细胞的招募、活化和成熟有关。
[0005]当前纯度高，成分明确且安全性好的新型疫苗在临床上正逐渐取代减毒及灭活疫苗，然而前者也存在免疫原性弱、单独应用难以诱导机体产生有效免疫应答的问题，需要添加佐剂增强其免疫效果。铝盐佐剂是最早被批准使用的一类人用疫苗佐剂，存在一定的局
限性：主要诱导体液免疫，诱导的细胞免疫弱，无法清除病毒的胞内感染；缓释时间长，免疫应答产生滞后；诱发注射部位红肿；而且金属铝对人类神经系统的毒性作用也不容忽视。此外铝佐剂也无法应对疫苗应用范围扩大(预防苗
→
预防苗和治疗苗)以及应用方式多样化(肌肉注射
→
肌肉注射、口服、滴鼻等)的发展趋势，对新型佐剂的需求愈发迫切。因此，需要找到一种新型佐剂来解决上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个方面，是针对现有技术中的免疫佐剂辅助免疫效果差，免疫应答产生滞后以及给药方式单一的缺点，提供了一种复合免疫佐剂及其应用。
[0007]本专利技术提供的技术方案为：
[0008]一种复合免疫佐剂，所述复合免疫佐剂包含人参皂苷和纳米乳剂。
[0009]本专利技术技术方案将纳米乳剂联合人参皂苷按照相应的方法配制成复合免疫佐剂，然后与抗原配伍。利用纳米乳剂与人参皂苷的协同免疫增强作用，以提高抗原的免疫原性和增强疫苗的免疫效果。
[0010]在本专利技术中，如无特殊解释，所述纳米乳剂为水包油纳米乳剂，该纳米乳剂可以按常规方法制备成水包油的形式。
[0011]在本专利技术中，所述复合免疫佐剂还可以包含任意合适的添加剂或药用辅料，其作用可能为增加复合免疫佐剂的特定功能及性质，例如，稳定剂、赋形剂、溶剂，等等。但本专利技术复合免疫佐剂中至少包含人参皂苷和纳米乳剂(NE)两种组分。
[0012]在本专利技术中，所述复合免疫佐剂中的人参皂苷和纳米乳剂可以以任意合适的比例配比，其均可以实现本专利技术的目的。同时，在本专利技术的一个实施方式中，专利技术人还研究了高浓度的人参皂苷对本专利技术复合免疫佐剂所起到的积极效果。因此，作为优选，在本专利技术的一个实施方式中，所述人参皂苷的浓度为600～1200ug/ml。更优选地，所述人参皂苷的浓度为1200ug/ml。
[0013]人参皂苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物，又称三萜皂苷，其分子结构中含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核。作为优选，在本专利技术的实施方式中，所述人参皂苷为人参二醇系皂苷、人参三醇系皂苷和/或齐墩果酸为苷元的人参皂苷Ro，其中，所述人参二醇系皂苷为选自Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc或Rd中的一种或几种，所述人参三醇系皂苷为选自Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1或三七皂苷中的一种或几种。
[0014]更优选地，在本专利技术的一个实施方式中，所述人参皂苷为Rg1。所述人参皂苷Rg1如式I所示。
[0015][0016]上述人参皂苷可使用任意市售的商品化人参皂苷，例如，成都曼思特生物科技有限公司生产的人参皂苷Rg1，也可以使用任意合适的现有技术中的方法进行制备，例如，《人参的提取工艺和人参皂苷的转化研究》，张留记等，《中医临床研究》2016年第34期，5-10页中记载的方法。
[0017]在本专利技术中，所述纳米乳剂(NE，nanoemulsion)可以为选自MF59、AS04或AF03中的一种或几种。作为优选，在本专利技术的一个实施方式中，所述纳米乳剂为MF59。
[0018]上述纳米乳剂可使用任意市售的商品化纳米乳剂。也可以使用任意合适的现有技术中的方法进行制备，例如：
[0019]1.机械法制备纳米乳剂
[0020]机械法制备纳米乳剂的常规过程有两步：首先是粗乳液的制备，通常按照工艺配比将油，水，表面活性剂及其他稳定剂成分混合，利用搅拌器得到一定粒度分布的常规乳液；然后是纳米乳剂的制备，利用动态超高压微射流均质机或超声波与高压均质机联用对粗乳液进行特定条件下的均质处理得到纳米乳剂。
[0021]利用高压均质机或超声波发生器能量的方法通常被叫做高能乳化法。研究表明，这些设备能在最短的时间内提供所需要的能量并获得液滴粒径最小的均匀流体。动态超高压微射均质机在国内外纳米乳剂领域的研究中被广泛应用。超声波乳化在降低液滴粒径方面相当有效，仅仅适用于小批量生产。
[0022]2.低能乳化法
[0023]低能乳化法是利用在乳化作用过程中曲率和相转变发生的原理。乳剂转换点EIP(Emulsioninversion point)法由Marszall和Shick首先专利技术。在恒定温度下，乳化过程中不断改变组分就可以观察到相转变。Sadurni等研制的O/W型纳米乳剂，粒径小至14nm，同时还具有高的动力学稳定性。转相乳化PIT(phase inversion temperature)法由Shinoda和Saito首先专利技术。在恒定组分条件下，调节温度得到目标乳化体系。此法在实际应用中多用来制备0/W型乳液。研究表明，在不添加任何表面活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合免疫佐剂，其特征在于，所述复合免疫佐剂包含人参皂苷和纳米乳剂。2.根据权利要求1所述的复合免疫佐剂，其特征在于，所述人参皂苷的浓度为600～1200ug/ml。3.根据权利要求1所述的复合免疫佐剂，其特征在于，所述人参皂苷为人参二醇系皂苷、人参三醇系皂苷和/或齐墩果酸为苷元的人参皂苷Ro，其中，所述人参二醇系皂苷为选自Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc或Rd中的一种或几种，所述人参三醇系皂苷为选自Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1或三七皂苷中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的复合免疫佐剂，其特征在于，所述人参皂苷为R...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐静，单璞，王志标，李树香，李计来，魏多前，张转，郝少杰，
申请(专利权)人：国药中生生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：