一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，包括：向菌渣样品中加入提取剂后涡旋振荡，超声；对超声后的液体离心，取上清液，之后将上清液吹干，向加入净化液，涡旋振荡后，采用高效液相色谱串联质谱仪对振荡后液体进行定性、定量检测。与现有技术相比，本发明专利技术对色谱条件、质谱条件以及供试品制备方法的试验，建立了菌渣中阿卡波糖的高效液相色谱串联质谱检测分析方法；通过对色谱条件、质谱条件和净化工艺的优化，建立了菌渣中阿卡波糖的检测方法，通过方法学验证试验研究表明，建立的方法准确度高、专属性强、重现性能良好，能有效检测菌渣中残留阿卡波糖。检测菌渣中残留阿卡波糖。

【技术实现步骤摘要】
一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及菌渣检测检验
，尤其是涉及一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法。

技术介绍

[0002]原料药阿卡波糖目前主要的生产方式是发酵法。阿卡波糖是由农副产品组成的固体或液体培养基，经接种药物产生菌、多级纯种培养等生物合成过程，并从中提取得到的。而其药渣则是药物提取后剩余培养基脱水干化后得到的固态物质，残药量一般在200mg
·
kg-1
之间。此外，药渣中还含有高达20％～40％的蛋白质及丰富的有机质、矿物质和微量元素，将其无害化后，资源化利用的潜力巨大。但由于残留药物的环境行为与生物安全性尚未可知，废渣的资源化利用还不能做到有理有据。只有首先了解药渣基质与待测药物的性质，从而建立起准确分析药渣组成、尤其是残留药物及次级代谢物含量的方法，并将其与药渣环境行为、生物安全性建立起构效关系，作为安全评估标准，困扰无害化和资源化利用的难题才能迎刃而解。
[0003]现有的阿卡波糖检测方法专利(专利号：CN201811295579.3)公开了一种针对阿卡波糖发酵液的前处理及检测方法，采用高效液相色谱仪进行检测，所开发的前处理技术能有效解决发酵液中杂质对检测器的影响以及对检测结果造成的误差，并减少了后续仪器设备的维护；专利CN201610144261.X也提供了一种高效液相色谱法检测卡波糖的方法，主要用于工业样品中阿卡波糖的产品质量检验，可以实现阿卡波糖与杂质A的有效分离及检测并可以多分离出一种未知杂质，更有利于生产企业控制阿卡波糖的产品质量；专利CN201911301248.0涉及一种阿卡波糖及有关物质的分析方法，引入了焦磷酸盐作为色谱流动相，能够有效的减少金属离子对于阿卡波糖检测的影响，从而大大提高了阿卡波糖与杂质的分离效果。
[0004]2015版《中国药典》第二部中、文献《阿卡波糖及其制剂的高效液相色谱分析方法》、《高效液相色谱法测定阿卡波糖口崩片的含量》也都提供了高效液相色谱法测定阿卡波糖含量的相关方法。
[0005]以上所提及的专利、文献提供的方法均能有效的针对发酵液、药物产品进行阿卡波糖含量的定量分析，但是都存在一定的不足，主要在于现有的阿卡波糖检测方法检测的基质多为含量较高的发酵母液、药品等基质成分较为简单的物质，纯度高且杂质少，对目标物阿卡波糖提取、净化等步骤的要求并不高，经过一些相对简单的操作后，即可实现定量检测，导致方法无法适用于药渣中阿卡波糖含量的检测。因此基于上述专利、药典以及文献提供的方法，对于处理前后菌渣中残留药物的提取以及净化、精度等难以达到较优的效果，这是目前亟需解决的技术问题。
[0006]基质为医药发酵菌渣，成分相当复杂，其中包含大量有机质及糖类物质，对检测的干扰非常大，对仪器要求也较高，需要一套严格的提取和净化技术才能支撑后续仪器分析检测，尤其对于处理后的菌渣，残留的阿卡波糖含量较低，极限情况往往低于1mg/kg，必须
开发出有针对性的提取和净化手段才能在仪器上检测得到准确的含量。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是为了解决上述问题而提供一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，以填补现有方法、标准中并没有完整的关于阿卡波糖菌渣中阿卡波糖残留含量检测方法的空白，本方法利用提取剂提取，经浓缩、净化后采用液质联用仪进行检测，方法灵敏度高，结果准确可靠。
[0008]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0009]本专利技术中保护的菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，包括以下步骤：
[0010]S1：向菌渣样品中加入提取剂后涡旋振荡，超声；
[0011]S2：对超声后的液体离心，取上清液，之后将上清液吹干，向加入净化液，涡旋振荡后，采用高效液相色谱串联质谱仪对振荡后液体进行定性、定量检测。
[0012]进一步地，所述菌渣中阿卡波糖残留含量小于等于200mg/kg。
[0013]进一步地，所述菌渣中阿卡波糖残留含量为0.1-10mg/kg。
[0014]进一步地，所述阿卡波糖菌渣与提取剂的质量比为1:5-50。
[0015]本专利技术公开的方法中，提取步骤是关键环节，提取剂的用量对后续仪器检测的影响较大，提取剂量过少，不利于提取；提取量过多则影响后续定量。根据实验结果，阿卡波糖菌渣与提取剂的质量比为1:5-50之间较为合适。
[0016]进一步地，S1中所述提取剂为二乙胺-乙腈-水混合溶液。所述混合溶液中二乙胺的占比10wt％-20wt％，乙腈占比为20wt％-30wt％，其余为水。本专利技术公开的方法中，提取步骤是关键环节，提取剂的选择直接决定了提取效果的好坏。目标物为糖类物质，属于强极性物质。二乙胺、乙腈以及水都是极性溶剂，能够加大糖类的溶解。经实验验证，二乙胺的加入能大大提高提取效率，是提取环节的关键。因此根据实验结果，提取剂为二乙胺-乙腈-水混合溶液，混合液中二乙胺的占比为10wt％-20wt％之间，乙腈占比为20wt％-30wt％之间。
[0017]进一步地，S1中所述超声的时间为10-120min。
[0018]进一步地，S2中所述净化液为甲醇-乙腈-水混合溶液，混合液中乙腈占比为30wt％-70wt％，甲醇占比为20wt％-50wt％，其余为水。本专利技术为了保证检测仪器的稳定运行以及提高整个前处理过程的效率，需要对提取液进行净化，本专利技术通过加入净化液来达到这一效果。加入净化液来进行净化，可以省去使用固相萃取柱的操作步骤，与一般实验方法相比，效率大大提高，而且本专利技术所使用的净化液可以使减少样品的损失。因此根据实验结论，净化液选择为甲醇-乙腈-水混合溶液，混合液中乙腈占比为30％-70％之间，甲醇占比为20％-50％之间。
[0019]进一步地，本专利技术公开的方法中，为了保证检测结果的准确性、检测仪器的稳定运行，对仪器检测方法有较高的要求，上述所述高效液相色谱串联质谱条件包括：色谱柱需要选择亲水色谱柱；流动相A为乙腈和乙酸铵溶液；梯度洗脱。
[0020]进一步地，高效液相色谱串联质谱条件中质谱条件包括：ESI离子源；正离子扫描，选择反应监测模式；阿卡波糖母离子为646，定量子离子为303.5，定性子离子为145.8。
[0021]进一步地，本专利技术公开的方法，为了能够对菌渣中阿卡波糖含量准确定量，采用阿卡波糖标准溶液的色谱峰面积作为参照，并通过受试溶液的色谱峰面积计算得到其浓度，
进而计算出菌渣样品中阿卡波糖含量。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有以下技术优势：
[0023]1)本专利技术建立了完整的关于阿卡波糖菌渣中阿卡波糖残留含量的高效液相色谱串联质谱检测方法，经过方法学验证，证明本专利技术方法具有较好的重复性和实用性。
[0024]2)本专利技术方法不仅为生产企业提供废渣的科学管理技术保证，而且为废渣资源化利用和循环经济发展提供重要依据。
[0025]3)本专利技术的优势在于废渣前处理步骤简单高效，不仅能高效提取菌渣中残留阿卡波糖，还能有效去除基质中干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：向菌渣样品中加入提取剂后涡旋振荡，超声；S2：对超声后的液体离心，取上清液，之后将上清液吹干，向加入净化液，涡旋振荡后，采用高效液相色谱串联质谱仪对振荡后液体进行定性、定量检测。2.根据权利要求1所述的一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，其特征在于，所述菌渣中阿卡波糖残留含量小于等于200mg/kg。3.根据权利要求2所述的一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，其特征在于，所述菌渣中阿卡波糖残留含量为0.1-10mg/kg。4.根据权利要求1所述的一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，其特征在于，所述阿卡波糖菌渣与提取剂的质量比为1:5-50。5.根据权利要求1所述的一种菌渣中阿卡波糖残留含量的检测方法，其特征在于，S1中所述提取剂为二乙胺-乙腈-水混合溶液；所述混合溶液中二乙胺的占比10wt％-20wt％，乙腈占比为20wt％-30wt％，其余为水。6.根据权利要求1所述的一种菌渣中阿卡波糖残...

【专利技术属性】
技术研发人员：奚世超，曹卫宇，盛立彦，张鹏帅，孙雯，周茁，
申请(专利权)人：上海化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：