针对抗CD73抗体和变体的方法和组合物技术

提供了抗CD73抗体、变体、和其抗原结合片段，这些抗体、变体、和其抗原结合片段以高亲和力与人CD73结合并抑制CD73的酶活性，并且任选地诱导CD73内化。还提供了编码该抗CD73抗体、变体、和其抗原结合片段的分离的核酸分子，和相关的表达载体，和宿主细胞。提供了制备抗CD73抗体、变体、和其抗原结合片段的方法。还提供了相关的药物组合物和使用这些药物组合物治疗受试者的方法。治疗受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
针对抗CD73抗体和变体的方法和组合物


[0001]本专利技术总体上涉及抗CD73抗体、它们的变体或突变体或其抗原结合片段，以及使用其治疗人癌症的方法。

技术介绍

[0002]CD73(称为外-5
’-
核苷酸酶(NT5E，EC 3.1.3.5))是在大多数组织中发现的糖基-磷脂酰肌醇(GPI)-连接的70-kDa细胞表面酶(Zhang B.,Cancer Res.[癌症研究],70(16):6407-6411(2010))。CD73(最初被定义为淋巴细胞分化抗原)被认为在T淋巴细胞上起共同信号传导分子的作用，并且起黏附分子的作用，这对淋巴细胞与内皮结合是重要的。最近的研究表明CD73可以控制多种生理应答，包括上皮离子和液体转运、缺血预处理、组织损伤、血小板功能、缺氧和血管渗漏(Zhang B.,Cancer Res.[癌症研究],70(16):6407-6411(2010))。
[0003]已经证明了细胞外腺苷的免疫抑制作用(Stagg J.等人,Oncogene[癌基因],29(39):5346
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5358(2010))。腺苷与其受体相互作用可以抑制大多数免疫细胞功能，包括自然杀伤(NK)细胞的细胞毒性、巨噬细胞吞噬作用、T细胞的细胞毒性和细胞因子释放(Goto T.等人,J.Immunol.[免疫学杂志],130(3):1350-1355(1983)；Ohta A.等人,J.Immunol.[免疫学杂志],183(9):5487-5493(2009))。阻断腺苷信号传导可以改善免疫疗法。CD73是参与腺苷信号传导的关键分子。CD73将腺苷一磷酸(AMP)(来自通过CD39进行的三磷酸腺苷(ATP)水解途径的产物)水解为腺苷以影响肿瘤微环境(Allard B.等人,Immunol.Rev.[免疫学综述],276(1):121-144(2017)；Resta R.等人,Immunol.Rev.[免疫学综述],161:95-109(1998))。CD73腺苷轴构成免疫肿瘤学中最有希望的途径之一。
[0004]研究报道了CD73参与细胞-细胞和细胞-基质相互作用，并表明CD73参与药物抗性和肿瘤促进(Spychala J.,Pharmacol.Ther.[药理学与治疗学],87(2-3):161
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173(2000))。已证实CD73在若干种癌细胞中过表达(Gao ZW.等人,Biomed.Res.Int.[国际生物医学研究],2014:460654(2014))，并且该表达与一些癌症的预后不良或患者存活相关(Loi S.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],110(27):11091-11096(2013)；Turcotte M.等人,Cancer Res.[癌症研究],75(21):4494-4503(2015)；Xiong L.等人,Cell Tissue Res.[细胞组织研究],355(2):365-374(2014))。在一些例子中，抗CD73单克隆抗体(mAb)治疗可以抑制转移和肿瘤血管发生(Allard B.等人,Int.J.Cancer[国际癌症杂志],134(6):1466-1473(2014)；Terp MG.等人,J.Immunol.[免疫学杂志],191(8):4165-4173(2013))。此外，研究人员已经证明了CD73-腺苷在癌症中的免疫抑制作用，并且认为靶向阻断CD73或腺苷受体可以有效地促进抗肿瘤免疫并增强第一代免疫检查点阻断剂的活性(Allard D.等人、Immunotherapy[免疫疗法]、8(2):145-163(2016))。
[0005]近年来，靶向CD73在临床前模型中产生了有利的抗肿瘤作用，并且CD73阻断连同其他免疫调节剂的组合治疗是特别有吸引力的治疗选择(Antonioli L.等人,Trends Cancer[癌症趋势],2(2):95-109(2016))。与抗CD73mAb的组合可以显著增强抗CTLA-4(细
胞毒性T淋巴细胞抗原4)mAb和抗PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)mAb的抗肿瘤活性(Allard B.等人,Clin.Cancer Res.[临床癌症研究],19(20):5626-5635(2013))。
[0006]然而，尽管针对CD73的研究取得进展并且利用该蛋白质得到临床益处，仍然需要开发针对CD73的有效、安全且强有力的抗体药剂。本专利技术满足了这些需求和其他需求。

技术实现思路

[0007]根据本专利技术的一个或多个目的，如本文所体现和广泛描述的，本专利技术在一个方面涉及抗CD73抗体、变体、突变体、和/或其抗原结合片段，制备它们的方法，包含它们的药物组合物，和使用它们治疗人受试者的方法。例如，所披露的抗CD73抗体及其亲和变体和/或突变体或抗原结合片段可以在治疗与CD73表达、CD73过表达、和/或异常CD73功能相关的疾病(如癌症或纤维化)中单独使用或与其他药剂组合使用。本文提供的抗体还可以用于通过向患者给予抗CD73抗体、和/或它们的亲和变体/突变体或其抗原结合片段并且在来自该患者的样品中(例如，体内或离体)检测与CD73蛋白结合的抗CD73抗体、和/或变体/突变体或其抗原结合片段，或通过将抗CD73抗体、和/或变体/突变体或其抗原结合片段与来自患者的样品进行接触并且定性地或定量地检测与CD73蛋白结合的抗CD73抗体、和/或亲和变体/突变体或其抗原结合片段，而在患者或患者样品中检测CD73蛋白。
[0008]本专利技术提供了抗CD73抗体和变体、和/或其抗原结合片段。在某些实施例中，本专利技术提供了至少十八(18)种抗CD73抗体、变体和/或其抗原结合片段，即抗CD73抗体、和/或变体N1及变体N1变体(N1#2、N1#2-P、N1#9和N1#9-PH)，N2，N4及N4变体(N4#1、N4#4、N4#4-3、N4#5、N4#6、N4#6-2、N4#6-3、N4#6-3-P、N4#6-4、N4#6-4-P和N4#6-5)。在下文序列表中提供了这些(18种)抗CD73抗体和/或其变体中每一种的轻链和重链的核酸和/或其编码氨基酸序列。下表1和2中分别提供了每种抗CD73抗体、和/或其变体的每条轻链(CDR-L1、CDR-L2、和CDR-L3)和每条重链(CDR-H1、CDR-H2、和CDR-H3)的CDR序列。
[0009]表1.抗CD73抗体、变体、和/或突变体轻链CDR序列
[0010][0011]表2.抗CD73抗体、变体、和/或突变体重链CDR序列
[0012][0013]在一些实施例中，根据(或如应用于)任何上述实施例，本专利技术的抗CD73抗体在其可变结构域的一个或多个CDR的N-糖基化位点处包含一个或多个突变。所得去糖基化的抗体保持与亲本非去糖基化抗体相同的功能。
[0014]在一些实施例中，根据(或如应用于)任何上述实施例，抗CD73抗体包含人IgG的Fc序列。在一些实施例中，根据(或如应用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD73抗体(N1)，该抗体包含基本上由以下组成的轻链(LC)可变结构域序列：a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-H3。2.如权利要求1所述的抗CD73抗体，其中该抗CD73抗体N1的该LC包含SEQ ID NO:46的核酸序列编码的SEQ ID NO:79的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体N1的该VH包含SEQ ID NO:64的核酸序列编码的SEQ ID NO:97的氨基酸序列。3.一种抗CD73抗体(N2)，该抗体包含基本上由以下组成的轻链(LC)可变结构域序列：a)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-H3。4.如权利要求3所述的抗CD73抗体，其中该抗CD73抗体N2的该LC包含SEQ ID NO:47的核酸序列编码的SEQ ID NO:80的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体N2的该VH包含SEQ ID NO:65的核酸序列编码的SEQ ID NO:98的氨基酸序列。5.一种抗CD73抗体(N4)，该抗体包含基本上由以下组成的轻链(LC)可变结构域序列：a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H3。6.如权利要求5所述的抗CD73抗体，其中该抗CD73抗体N4的该LC包含SEQ ID NO:48的核酸序列编码的SEQ ID NO:81的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体N4的该VH包含SEQ ID NO:66的核酸序列编码的SEQ ID NO:99的氨基酸序列。7.一种抗CD73抗体变体(N1#2)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-H3。8.如权利要求7所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N1#2的该VL包含SEQ ID NO:49的核酸序列编码的SEQ ID NO:82的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N1#2的该VH包含SEQ ID NO:67的核酸序列编码的SEQ ID NO:100的氨基酸序列。9.一种抗CD73抗体变体(N1#9)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-H3。10.如权利要求9所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N1#9的该VL包含SEQ ID NO:50的核酸序列编码的SEQ ID NO:83的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N1#9
的该VH包含SEQ ID NO:68的核酸序列编码的SEQ ID NO:101的氨基酸序列。11.一种抗CD73抗体变体(N4#1)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H3。12.如权利要求11所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#1的该VL包含SEQ ID NO:51的核酸序列编码的SEQ ID NO:84的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N4#1的该VH包含SEQ ID NO:69的核酸序列编码的SEQ ID NO:102的氨基酸序列。13.一种抗CD73抗体变体(N4#4)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H3。14.如权利要求13所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#4的该VL包含SEQ ID NO:52的核酸序列编码的SEQ ID NO:85的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N4#4的该VH包含SEQ ID NO:70的核酸序列编码的SEQ ID NO:103的氨基酸序列。15.一种抗CD73抗体变体(N4#5)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H3。16.如权利要求15所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#5的该VL包含SEQ ID NO:53的核酸序列编码的SEQ ID NO:86的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N4#5的该VH包含SEQ ID NO:71的核酸序列编码的SEQ ID NO:104的氨基酸序列。17.一种抗CD73抗体变体(N4#6)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H3。18.如权利要求17所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#6的该VL包含SEQ ID NO:54的核酸序列编码的SEQ ID NO:87的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N4#6的该VH包含SEQ ID NO:72的核酸序列编码的SEQ ID NO:105的氨基酸序列。19.一种抗CD73抗体变体(N4#4-3)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H3。
20.如权利要求19所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#4-3的该VL包含SEQ ID NO:55的核酸编码的SEQ ID NO:88的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体N4#4-3的该VH包含SEQ ID NO:73的核酸编码的SEQ ID NO:106的氨基酸序列。21.一种抗CD73抗体变体(N4#6-2)，该抗体变体包含基本上由以下组成的轻链可变结构域(VL)序列：a)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR-L1，b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR-L2，和c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3，和基本上由以下组成的重链可变结构域(VH)序列：a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-H1，b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2，和c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H3。22.如权利要求21所述的抗CD73抗体变体，其中该抗CD73抗体变体N4#6-2的该VL包含SEQ ID NO:56的核酸序列编码的SEQ ID NO:89的氨基酸序列，并且其中该抗CD73抗体变体...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜伟东，陈奕颖，曾琪铃，
申请(专利权)人：上海复宏汉霖生物制药有限公司上海复宏汉霖生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：