一种慢性肾病诊断生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种慢性肾病诊断生物标记物及其应用，所述生物标记物包括氧化三甲胺、胆碱、左旋肉碱或甜菜碱中的至少一种。所述标记物可用于在慢性肾病诊断试剂、试剂盒或检测装置的制备中。上述生物标记物的检测方法，包括以下步骤：取待检测对象的体液样本，对所述体液样本中的生物标记物浓度进行定量检测。所述检测方法还包括判定所述生物标记物定量的检测结果是否属于生物标记物的正常水平的步骤。通过检测本发明专利技术方案生物标记物的含量并与评价标准进行比较，用于实现慢性肾病的诊断，对于慢性肾病的诊断具有重要意义，同时还为开展相关药物评价和药效物质基础研究奠定了基础；通过取体液即可进行检测，取材方便且创伤性低。性低。性低。

【技术实现步骤摘要】
一种慢性肾病诊断生物标记物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种慢性肾病诊断生物标记物及其应用。

技术介绍

[0002]肾脏是人体的重要器官，其基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水分及其他有用物质，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。因此，肾脏对于保证机体内环境的稳定，确保新陈代谢得以正常进行具有重要意义。然而，生活方式不健康、免疫系统紊乱、营养缺乏或血液问题等多种因素都会引起肾脏病变。
[0003]近年来，肾脏病已经成为继肿瘤、心脑血管病、糖尿病之后，又一威胁人类健康的重要疾病。由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍(肾脏损害病史大于3个月)，包括肾小球滤过率(Glomerular filtration rate，GFR)正常和不正常的病理损伤、血液或尿液成分异常，及影像学检查异常或不明原因GFR下降超过3个月，即慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)。目前，我国成人慢性肾脏病发病率高达10.8％，慢性肾脏病临床症状往往不明显，流行病学调查显示，人群中对慢性肾脏病知晓率仅10％，有30％患者首次就诊时已是慢性肾衰，10％会进展至慢性肾功能衰竭终末期。慢性肾病按疾病等级可分为5期，然而，患者通常在慢性肾病4期之后才出现明显症状，而且一旦进入4期之后疾病进展迅速不可逆转，而现有检测技术水平有限在进入4期以前较难判别，且即使进入了4期也需要通过临床造影技术及病理检测等检测方式，方可实现诊断，这使得检测操作繁琐且周期较长，最终造成慢性肾病诊断困难，且后期的治疗更为困难。因此，若能找出能够用于慢性肾病诊断的生物标记物对于提升慢性肾病诊治率具有重要意义，尤其是若该诊断生物标记物能够通过创伤性低、取材方便的体液检查，即可对慢性肾病进行诊断，将对提高慢性肾病患者生存机率具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的第一个技术问题是：提供一种能够用于慢性肾病诊断的生物标记物。
[0005]本专利技术所要解决的第二个技术问题是：提供一种上述生物标记物的应用。
[0006]为了解决上述第一个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种慢性肾病诊断生物标记物，所述生物标记物包括氧化三甲胺(Trimetlylamine oxide，TMAO)、胆碱、左旋肉碱或甜菜碱中的至少一种。
[0007]进一步地，所述生物标记物包括氧化三甲胺、胆碱、左旋肉碱和甜菜碱。
[0008]为了解决上述第二个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：上述生物标记物在慢性肾病诊断试剂、试剂盒或检测装置的制备中的应用。
[0009]进一步地，所述试剂盒包括生物标记物的标准品和内标物。
[0010]进一步地，所述试剂盒还包括空白血浆对照试剂和检测试剂；优选地，所述检测试
剂包括蛋白沉淀液、稀释缓冲液和上样缓冲液。
[0011]为了解决上述第二个技术问题，本专利技术采用的技术方案还可以为：一种慢性肾病诊断生物标记物的检测方法，包括以下步骤：
[0012]取待检测对象的体液样本，对所述体液样本中的生物标记物浓度进行定量检测。
[0013]进一步地，所述体液样本为血浆、尿液或组织液中的至少一种。
[0014]进一步地，所述检测方法还包括判定所述生物标记物定量的检测结果是否属于生物标记物的正常水平的步骤；优选地，所述生物标记物中包括氧化三甲胺、胆碱、左旋肉碱和甜菜碱，则所述标记物的正常水平包括：所述氧化三甲胺的浓度低于400ng/ml，所述胆碱的浓度低于1100ng/ml，所述左旋肉碱的浓度低于9000ng/ml，所述甜菜碱的浓度低于7000ng/ml。
[0015]进一步地，通过液相色谱与质谱联用仪对所述生物标记物的浓度进行定量检测。
[0016]进一步地，所述液相色谱与质谱联用仪检测过程中，色谱条件为：
[0017]流动相：A相为乙腈，B相为pH＝3.0且浓度为10mmo/L的甲酸铵溶液，其中，A相与B相按体积比为70％:30％的比例进行等度洗脱；流速：0.4mL/min；进样量：5μL；柱温：30℃；
[0018]质谱条件为：
[0019]离子源：电喷雾离子源；干燥气温度：300℃；雾化气：N2；雾化气流速：8L/min；扫描模式：多反应监测模式。
[0020]本专利技术的有益效果在于：本专利技术方案提供了一种慢性肾病诊断生物标记物及其应用，通过检测本专利技术方案生物标记物的含量并与评价标准进行比较，可实现各个时期的慢性肾病的诊断，能够区分出慢性肾病的早晚期，对于慢性肾病诊断具有重要意义，同时还为开展相关药物评价和药效物质基础研究奠定了基础；本专利技术方案的生物标记物，通过取待检测对象的体液即可进行检测，取材方便、创伤性低且能够实现慢性肾病的早期诊断。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例1的实验组和对照组血浆中TMAO相对表达量结果图；
[0022]图2为本专利技术实施例2的实验组和对照组血浆中胆碱相对表达量结果图；
[0023]图3为本专利技术实施例3的实验组和对照组血浆中左旋肉碱相对表达量结果图；
[0024]图4为本专利技术实施例4的实验组和对照组血浆中甜菜碱相对表达量结果图；
[0025]图5为本专利技术实施例5的ROC曲线图；
[0026]图6为本专利技术实施例6的早晚期患者血浆中各生物标记物的浓度分布图；
[0027]图7为本专利技术实施例6的生物标记物对慢性肾病晚期患者血浆中生物标记物的ROC曲线图。
具体实施方式
[0028]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
[0029]本专利技术的实施例一为：一种慢性肾病诊断生物标记物，包括氧化三甲胺。
[0030]将该生物标记物用于慢性肾病的诊断，具体包括以下步骤：
[0031]S1、实验组样本和对照组样本的制备：
6500+(美国SCIEX公司)；
[0058]流动相：乙腈：10mmo/L甲酸铵(pH3.0)＝70％:30％(v/v)，等度洗脱；流速：0.4mL/min；进样量：5μL；柱温：30℃；
[0059]离子源：电喷雾离子源；干燥气温度：300℃；雾化气(N2)流速：8L/min；进行多反应监测模式扫描。
[0060]将实验组(标记为CN)和对照组(标记为CKD)的检测到的TMAO相对表达量检测结果图结果如图2所示，从图2中可以看出在慢性肾病患者和健康受试者中胆碱表达存在显著差异，胆碱在慢性肾病患者中表达量高，由此表明，胆碱可作为慢性肾病诊断生物标记物。
[0061]本专利技术的实施例三为：一种慢性肾病诊断生物标记物，包括左旋肉碱(L-carnitine)。
[0062]将该生物标记物用于慢性肾病的诊断，具体包括以下步骤：
[0063]S1、实验组样本和对照组样本的制备：
[0064]实验组：对已诊断为慢性肾病患者(47人)采本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种慢性肾病诊断生物标记物，其特征在于：所述生物标记物包括氧化三甲胺、胆碱、左旋肉碱或甜菜碱中的至少一种。2.根据权利要求1所述的慢性肾病诊断生物标记物，其特征在于：所述生物标记物包括氧化三甲胺、胆碱、左旋肉碱和甜菜碱。3.一种如权利要求1或2所述的慢性肾病诊断生物标记物在慢性肾病诊断试剂、试剂盒或检测装置的制备中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包括生物标记物的标准品和内标物。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒还包括空白血浆对照试剂和检测试剂；优选地，所述检测试剂包括蛋白沉淀液、稀释缓冲液和上样缓冲液。6.一种如权利要求1或2所述的慢性肾病诊断生物标记物的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：取待检测对象的体液样本，对所述体液样本中的生物标记物浓度进行定量检测。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述体液样本为血浆、尿液或组织液中的至少一种。8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述检...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭飞，欧阳冬生，周玲，唐智，齐潇，
申请(专利权)人：长沙都正生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：