百药煎中药饮片的检测方法技术

本申请涉及中药饮片的技术领域，具体公开了一种百药煎中药饮片的检测方法，包括以下步骤：制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2对照品的混合液；制备供试品溶液：取百药煎样品粉末，加入氯化钠，经70%的甲醇水溶液提取，取提取液稀释后液体经过免疫亲和柱，然后用甲醇洗脱得到净化后的溶液，定容，过0.45μm滤膜，即得供试品溶液；液相色谱检测：将制得的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，检测。本申请提供了百药煎中药饮片中黄曲霉毒素含量的定量检测方法，且检测方法快速、准确、灵敏度高。灵敏度高。灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
百药煎中药饮片的检测方法


[0001]本申请涉及中药饮片的
，更具体地说，它涉及一种百药煎中药饮片的检测方法。

技术介绍

[0002]百药煎是由五倍子同茶叶等经发酵制成的块状物，具有清肺化痰、解热生津的功效，临床上可用于肺热咳嗽，风火牙痛，口舌糜烂，久痢脱肛。
[0003]黄曲霉毒素（Aflatoxins,AF）是一类由黄曲霉和寄生曲霉产生的代谢产物，具有诱发人体致畸、致癌、致突变的作用，主要的污染物有黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2。中药材大多以天然植物为基源，在储存不当或因其他外界条件影响时，易受霉菌污染产生黄曲霉毒素。因此对中药材进行黄曲霉毒素的高效便捷检测是十分有必要的。

技术实现思路

[0004]为了提供百药煎中药饮片中黄曲霉毒素含量的定量检测，本申请提供一种百药煎中药饮片的检测方法。
[0005]本申请提供的一种百药煎中药饮片的检测方法采用如下的技术方案：一种百药煎中药饮片的检测方法，包括以下步骤：制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2对照品的混合液；制备供试品溶液：取百药煎样品粉末，加入氯化钠，经70%的甲醇水溶液提取，取提取液稀释后液体经过免疫亲和柱，然后用甲醇洗脱得到净化后的溶液，定容，过0.45μm滤膜，即得供试品溶液；测定：将制得的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，检测。
[0006]通过采用上述技术方案，本申请中制备供试品溶液时，在百药煎样品粉末中加入盐酸，然后再加入甲醇水溶液提取，可以实现提取百药煎中的黄曲霉毒素，甲醇选用70%的甲醇水溶液，提取剂甲醇中加入少量水，可以润湿百药煎样品粉末，增强甲醇在百药煎样品中的渗透能力，提高提取效率，盐酸通过破乳化和盐析作用提高两相分离，从而进一步提高提取效率和效果，然后再将提取样品经过免疫亲和柱，黄曲霉毒素被吸附留在亲和柱上，而其它杂质则被排除，起到净化的效果，然后用甲醇洗脱定容，最后过0.45μm滤膜，对黄曲霉毒素洗脱液过滤去除杂质，得到净化纯化后的黄曲霉毒素供试品溶液，然后进行液相色谱检测，可以实现黄曲霉毒素的定量检测，且同时检测四种主要黄曲霉毒素（B 1,B 2,G 1和G2），检测结果准确，且具有更高的灵敏度，检测速度快，提供了一种快速、准确、灵敏度高的定量检测方法。
[0007]优选的，制备供试品溶液步骤中，提取液稀释后液体经过免疫亲和柱，在甲醇洗脱前还用水洗脱。
[0008]通过采用上述技术方案，在免疫亲和柱净化过程中，首先用水洗脱，可以用水洗涤
去除免疫亲和柱上的杂质，然后再用甲醇洗脱免疫亲和柱上的黄曲霉毒素，实现特异性地将黄曲霉毒素分离出来，一步完成净化和浓缩，操作简单快速，且提高检测的灵敏度。
[0009]优选的，制备对照品溶液步骤中，混合液中黄曲霉毒素B1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素B2的浓度为0.0006μg/mL，黄曲霉毒素G1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素G2的浓度为0.0006μg/mL。
[0010]优选的，制备供试品溶液步骤中，百药煎样品粉末与氯化钠添加质量比为（4.5-5.5）：1，百药煎样品粉末质量：70%甲醇水溶液体积为1g：4-6mL，提取液中加入3-4体积倍数的水稀释，提取液稀释后液体进行免疫亲和柱进化为提取液体积的3/10-5/10，甲醇定容后体积与提取液稀释后体积相同。
[0011]通过采用上述技术方案，用甲醇提取后得到的含黄曲霉毒素的提取液先进行稀释后再进行免疫亲和柱净化，防止有过多的有机溶剂是的免疫亲和柱失活。
[0012]优选的，制备供试品溶液步骤中，甲醇溶液提取具体操作为：在百药煎样品粉末和氯化钠的混合物中，加入甲醇溶液后，高速搅拌均质，离心5-10min。
[0013]优选的，均质在11000-12000r/min下高速搅拌，离心转速为2500-3000r/min。
[0014]优选的，液相色谱检测步骤中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为28:12:60的甲醇-乙腈-水为流动相。
[0015]优选的，液相色谱检测步骤中，色谱柱柱温为40℃，进样量为20μL，流速为0.7mL/min。
[0016]优选的，液相色谱检测步骤中，采用荧光检测器检测，激发波长为360nm，发射波长为450nm。
[0017]优选的，所述百药煎样品粉末为过20目筛后得到的筛下物。
[0018]综上所述，本申请具有以下有益效果：1、本申请提供了百药煎中黄曲霉毒素含量的定量检测方法，保证药品质量，确保患者用药安全，而且方法简便易操作，可重复性良好，结果准确；2、本申请中制备供试品溶液时，在百药煎样品粉末中加入盐酸，然后再加入甲醇水溶液提取，可以提取百药煎中的黄曲霉毒素，盐酸通过破乳化和盐析作用提高两相分离，从而提高提取效率和效果，然后再将提取样品经过免疫亲和柱，黄曲霉毒素被吸附留在亲和柱上，而其它杂质则被排除，起到净化的效果，然后用甲醇洗脱定容，最后过0.45μm滤膜，对黄曲霉毒素洗脱液过滤去除杂质，得到净化纯化后的黄曲霉毒素供试品溶液；3、用甲醇提取后得到的含黄曲霉毒素的提取液先进行稀释后再进行免疫亲和柱净化，防止有过多的有机溶剂是的免疫亲和柱失活。
[0019]4、本申请中供试品溶液依次进行提取和净化后，再通过0.45μm滤膜，对供试品溶液进行最终的过滤后进行液相色谱，检测结果更为精准，有效检测百药煎中黄曲霉毒素的含量，检测结果准确。
附图说明
[0020]图1是本申请实施例1的检测方法测得的HPLC图。
具体实施方式
[0021]以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。予以特别说明的是：以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，以下实施例中所用原料除特殊说明外均可来源于普通市售。
[0022]黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素，是霉菌毒素中毒性最大，对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素，因此，需要对百药煎产品进行黄曲霉毒素的检测已保证百药煎的安全性能。
[0023]为此，本申请提供了一种百药煎中药饮片的检测方法，包括以下步骤：制备对照品溶液：制备含有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2对照品的混合液，混合液中黄曲霉毒素B1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素B2的浓度为0.0006μg/mL，黄曲霉毒素G1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素G2的浓度为0.0006μg/mL；制备供试品溶液：取百药煎样品粉末，加入氯化钠，然后加入70%的甲醇水溶液，在11000-12000r/min下高速搅拌均质，然后再在离心转速为2500-3000r/min的条件下离心5-10min，实现采用甲醇水溶液对黄曲霉毒素的提取，得到提取液；然后加入提取液3-4体积倍数的水将提取液稀释，得到稀释液，然后取稀释液体积的3/10-5/10通过免疫亲和柱，免疫亲和柱可以选择性吸附本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种百药煎中药饮片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：制备对照品溶液：以甲醇为溶液，制备含有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2对照品的混合液；制备供试品溶液：取百药煎样品粉末，加入氯化钠，经70%的甲醇水溶液提取，取提取液稀释后液体经过免疫亲和柱，然后用甲醇洗脱得到净化后的溶液，定容，过0.45μm滤膜，即得供试品溶液；液相色谱检测：将制得的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，检测。2.根据权利要求1所述的一种百药煎中药饮片的检测方法，其特征在于：制备供试品溶液步骤中，提取液稀释后液体经过免疫亲和柱，在甲醇洗脱前还用水洗脱。3.根据权利要求1所述的一种百药煎中药饮片的检测方法，其特征在于：制备对照品溶液步骤中，混合液中黄曲霉毒素B1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素B2的浓度为0.0006μg/mL，黄曲霉毒素G1的浓度为0.002μg/mL，黄曲霉毒素G2的浓度为0.0006μg/mL。4.根据权利要求1所述的一种百药煎中药饮片的检测方法，其特征在于：制备供试品溶液步骤中，百药煎样品粉末与氯化钠添加质量比为（4.5-5.5）：1，百药煎样品粉末质量：甲醇水溶液体积为1g：4-6mL，提取液中加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：辜兆丰，
申请(专利权)人：北京金崇光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：