一种新型冠状病毒疫苗及其应用制造技术

本申请涉及一种新型冠状病毒疫苗及其应用，具体涉及截短的Spike蛋白，包含所述截短的Spike蛋白的融合蛋白，包含编码所述截短的Spike蛋白或融合蛋白的核苷酸序列的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体和宿主细胞。此外，本申请还涉及包含所述截短的Spike蛋白、融合蛋白、核酸分子或载体的药物组合物。核酸分子或载体的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
CoV-2的一种膜蛋白，它们具有相同的含义， 可互换使用。在新型冠状病毒的相关研究及疫苗治疗中，S蛋白可作 为抗原，在本文中也简称为“S抗原”。
[0010]如本文中所使用的，术语“新型冠状病毒肺炎”和“COVID
-ꢀ
19”是指，因SARS-CoV-2感染而导致的肺炎，二者具有相同的含 义，可互换使用。
[0011]如本文中所使用的，术语“SARS-CoV”或“SARS-CoV-1”为
ꢀ“
严重急性呼吸综合征冠状病毒1(severe acute respiratory syndromecoronavirus 1)”的简称，其属于β冠状病毒属，为含包膜的单链正义RNA病毒。SARS-CoV-1的基因组序列是本领域技术人员已知的，可参 见例如GenBank：AAP13567.1。由SARS-CoV-1所导致的肺炎被称为 SARS。
[0012]如本文中所使用的，术语“野生的”或“天然的”可互换地使用。 当这些术语用于描述核酸分子、多肽或蛋白时，其表示该核酸分子、多 肽或蛋白在自然界中存在，发现于自然界，并且未经过人工的任何修饰 或加工。如本文中所使用的，野生的SARS-CoV-2的Spike蛋白是指天 然存在的，具有生物学活性的Spike蛋白。本领域技术人员可以方便地 从各种公共数据库(例如GenBank数据库)获得Spike蛋白的氨基酸 序列。例如，野生的SARS-CoV-2的Spike蛋白的氨基酸序列可如SEQID NO：1所示。
[0013]如本文中所使用的，术语“载体”是指，可将多聚核苷酸插入其中 的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达 时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细 胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技 术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色 体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人 工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用 作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病 毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳 头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表 达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、 选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。
[0014]如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细 胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞 或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如 纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细 胞，HEK 293细胞或人细胞等的动物细胞。
[0015]本领域技术人员将理解，表达载体的设计可取决于诸如待转化的宿 主细胞的选择、所希望的表达水平等因素。一种载体可以被引入到宿主 细胞中而由此产生转录物、蛋白质、或肽，包括由如本文所述的蛋白、 融合蛋白、分离的核酸分子等。
[0016]在第一方面，本申请提供了一种截短的Spike蛋白，其与野生的新 型冠状病毒的Spike蛋白相比，C末端截短了67个氨基酸。
[0017]在某些实施方案中，所述新型冠状病毒的Spike蛋白的氨基酸序列 如SEQ ID NO:1所示。
[0018]在某些实施方案中，所述截短的Spike蛋白的氨基酸序列如SEQID NO:3所示。
[0019]在第二方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含如上所述的截短 的Spike蛋白以及另外的多肽。在本申请中，所述融合蛋白不是天然存 在的蛋白或其片段。在某些实施方案中，所述另外的多肽相对于所述截 短的Spike蛋白是异源的。
[0020]在某些实施方案中，所述另外的多肽任选地通过接头连接至所述截 短的Spike蛋白的N端或C端。这类接头是本领域熟知的，其实例包 括但不限于，包含一个或多个(例如，1个，2个，3个，4个或5个) 氨基酸(如，Gly或Ser)的肽接头。在某些实施方案中，所述肽接头 是柔性的。在某些实施方案中，柔性的肽接头可能是有利的，其能够连 接两种蛋白/多肽成分，并且保持其各自的活性和功能。此类肽接头包 括但不限于，(GGGGS)3。
[0021]在某些实施方案中，所述另外的多肽选自标签、信号肽或导肽、可 检测的标记(例如，荧光素酶(fluc)、绿色荧光蛋白(GFP))，或 其任何组合。在某些实施方案中，可以将本申请的截短的Spike蛋白与 标签序列连接，以便于本申请的截短的Spike蛋白的表达、检测和/或纯 化。在某些实施方案中，可以将本申请的截短的Spike蛋白与信号肽或 导肽序列连接，以引导本申请的截短的Spike蛋白的分泌。在某些实施 方案中，可以将本申请的截短的Spike蛋白与可检测的标记序列连接， 以便于对本申请的截短的Spike蛋白进行检测或示踪。
[0022]在某些实施方案中，所述信号肽选自Spike蛋白的天然信号肽、 HGF(肝细胞生长因子)的天然信号肽和IgE(免疫球蛋白E)的天然 信号肽。在某些实施方案中，所述信号肽具有选自下列的氨基酸序列： SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11，和SEQ ID NO:12。
[0023]本领域技术人员可以理解，本文意在涵盖的信号肽包括但不限于上 述列举的信号肽，本领域技术人员已知如何根据期望目的(例如，蛋白 的分泌或引导)选择合适的信号肽。
[0024]在某些实施方案中，所述融合蛋白具有选自下列的氨基酸序列： SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。
[0025]在第三方面，本申请提供了一种核酸分子，其包含编码如前所述的 截短的Spike蛋白或者如前所述的融合蛋白的核苷酸序列。
[0026]在某些实施方案中，所述编码截短的Spike蛋白或融合蛋白的核苷 酸序列是根据宿主细胞(例如，人细胞)的密码子偏好性进行了密码子 优化的或是未进行优化的。
[0027]在某些实施方案中，所述核酸分子具有选自下列的核苷酸序列： SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7，和SEQ ID NO:9。
[0028]在第四方面，本申请提供了一种载体，其包含如前所述的核酸分 子。
[0029]在某些实施方案中，所述载体选自质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工 染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源 的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体；以及，病毒载 体，例如逆转录酶病毒载体(例如慢病毒载体)、腺病毒载体、腺相关病 毒载体、疱疹病毒载体(如单纯疱疹病毒载体)、痘病毒载体、杆状病毒 载体、乳头瘤病毒载体、乳头多瘤空泡病毒载体。
[0030]在某些实施方案中，所述载体用于表达(例如在受试者(例如哺乳 动物，例如人)体内表达)所述截短的Spike蛋白或者融合蛋白。
[0031]在某些实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种截短的Spike蛋白，其与野生的新型冠状病毒的Spike蛋白相比，C末端截短了67个氨基酸；优选地，所述新型冠状病毒的Spike蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；优选地，所述截短的Spike蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。2.一种融合蛋白，其包含权利要求1的截短的Spike蛋白以及另外的多肽；优选地，所述另外的多肽相对于所述截短的Spike蛋白是异源的；优选地，所述另外的多肽任选地通过接头连接至所述截短的Spike蛋白的N端或C端；优选地，所述另外的多肽选自标签、信号肽或导肽、可检测的标记(例如，荧光素酶(fluc)、绿色荧光蛋白(GFP))，或其任何组合；优选地，所述信号肽选自Spike蛋白的天然信号肽、HGF(肝细胞生长因子)的天然信号肽和IgE(免疫球蛋白E)的天然信号肽；优选地，所述信号肽具有选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11，和SEQ ID NO:12；优选地，所述融合蛋白具有选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。3.一种核酸分子，其包含编码权利要求1的截短的Spike蛋白或者权利要求2的融合蛋白的核苷酸序列；优选地，所述编码截短的Spike蛋白或融合蛋白的核苷酸序列是根据宿主细胞(例如，人细胞)的密码子偏好性进行了密码子优化的或是未进行优化的；优选地，所述核酸分子具有选自下列的核苷酸序列：SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9。4.一种载体，其包含权利要求3的核酸分子；优选地，所述载体选自质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体；以及，病毒载体，例如逆转录酶病毒载体(例如慢病毒载体)、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体(如单纯疱疹病毒载体)、痘病毒载体、杆状病毒载体、乳头瘤病毒载体、乳头多瘤空泡病毒载体；优选地，所述载体用于表达(例如在受试者(例如哺乳动物，例如人)体内表达)所述截短的Spike蛋白或者融合蛋白；优选地，所述载体是用于基因治疗的载体，例如质粒，腺病毒载体，腺相关病毒载体，和慢病毒载体。5.一种宿主细胞，其包含根据权利要求3所述的核酸分子或根据权利要求4所述的载体；优选地，所述宿主细胞选自原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)；优选地，所述宿主细胞是大肠杆菌细胞，例如大肠杆菌DH5α细胞；或者所述宿主细胞是人细胞(例如，293T细胞)。6.一种表达或产生权利要求1的截短的Spike蛋白或者权利要求2的融合蛋白的方法，所述方法包括，使用根据权利要求3所述的核酸分子或根据权利要求4所述的载体或根据权利要求5所述的宿主细胞；
优选地，所述方法包括，在允许蛋白表达的条件下，在宿主细胞中表达根据权利要求3所述的核酸分子或根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁明征，马杉姗，汤晓闯，聂李亚，马素永，韩成权，许松山，
申请(专利权)人：北京诺思兰德生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：