一种脑瘫小鼠动物模型的构建及评价方法技术

本发明专利技术涉及动物模型构建技术领域，具体公开了一种脑瘫小鼠动物模型的构建与评价方法，本发明专利技术的构建方法包括以下步骤：S1.取NOD

【技术实现步骤摘要】
一种脑瘫小鼠动物模型的构建及评价方法


[0001]本专利技术涉及动物模型构建
，尤其是涉及一种脑瘫小鼠动物模型的构建与评价方法。

技术介绍

[0002]脑性瘫痪，简称脑瘫，是出生前至出生后脑发育阶段，各种原因所致的非进行性脑损伤综合征，是造成小儿肢体残疾的主要疾病。WHO报道全球每年有5
‰
新生儿发生脑瘫，我国部分地区发病率为0.5
‰
～2
‰
。目前，脑瘫发病的机制尚不明确。临床上对脑瘫患者还没有有效的治疗手段，仅仅局限于特别临床护理。
[0003]为明确其发病机制，并针对其进行有效的预防和治疗，国内外制作了大量的脑瘫动物模型，其中鼠类因神经解剖与人类极为接近、大小合适、脑体积小便于脑组织病理变化和生化改变的观察，而且比较经济，广泛应用于脑瘫模型的研究。目前脑瘫模型制备方法大致有缺血缺氧型、感染型、神经毒素型、脑外伤型、多法联合型五种。缺血缺氧模型是比较常用的脑瘫动物模型，主要有三种造模方式：单侧颈动脉结扎法、双侧颈动脉结扎法、子宫动脉结扎。感染模型主要包括腹腔内感染模型和宫内感染模型。神经毒素模型主要有胆红素模型、甲基汞模型和三硝基丙酸模型。脑外伤模型有脑组织切除法、液压冲击法、加速致伤法、自由落体打击法、各种脑组织破坏法等。多法联合模型就是将两种以上的造模方法联合应用，从多角度呈现脑瘫多因素致病的特点。
[0004]检验动物模型常用的方法有以下几点:(1)神经行为学检测：目前脑瘫的诊断主要依靠其特征性的临床表现，即空间学习认知能力、运动功能的损害，姿势的异常等，检测方法主要有Morris水迷宫、足印重复间距分析试验、平衡木试验、平衡木试验等。(2)病理形态学：组织病理学检测可以客观直观的获取到组织形态学图片，可以清晰的观察到脑皮层细胞排列是否整齐，轮廓是否清晰，结构是否完整以及有无异型性细胞等。(3)神经电生理检测：神经电生理方法对脑瘫的检测近年来得到了飞速的发展。(4)分子生物学指标：该测定为后续细胞移植与基因治疗脑瘫提供了理论依据。
[0005]但是，目前尚没有能够模拟各种类型脑瘫公认的、理想的动物模型。每一种动物模型都有其优势与不足。例如，各种模型的建立过程都是对实验动物的摧残过程，操作过程专业性要求较高，受到一定的局限性，并且当研究人源干细胞对脑瘫的治疗作用时，由于普通小鼠与人体内环境有很大差别，加之用药引起的免疫反应，其研究结果与真实情况容易相差较大，因此，亟需一种在简化操作下，能同时减轻动物痛苦的脑瘫小鼠动物模型的构建与评价方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种脑瘫小鼠动物模型的构建与评价方法，经过本专利技术人大量实验摸索，结果发现通过本专利技术的构建方法可以建立脑瘫小鼠动物模型，在简化操作的前提下，能同时减轻实验动物的痛苦，并且构建的脑瘫
动物模型更加接近真实人体内环境，为治疗脑瘫疾病提供了坚实的基础。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0008]本专利技术第一目的是提供了一种脑瘫小鼠动物模型的构建方法，其包括以下步骤：
[0009]S1.取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷孕鼠腹腔注射LPS，致使孕鼠感染，自然分娩取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔，阻止NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔血液循环；
[0010]S2.将处理后的NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔送回母亲共处，然后放置在有机玻璃缺氧室中，将含氧的氮氧混合物以1.0～2.0L/min的流速注入缺氧室内；
[0011]S3.将步骤S2处理完成的NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔送回至母亲共处。
[0012]在本专利技术的技术方案中，本专利技术首次采用人源化小鼠(NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠)使得构建得到的脑瘫动物模型更接近真实人体内环境，提高了相关研究的可信度，并且在操作过程中尽量将模型小鼠与母鼠共养，使得母鼠可以给模型小鼠心灵慰藉；本专利技术的构建方法简化了操作，不需要用到高端仪器就可以构建成功，节省了实验成本。
[0013]作为本专利技术所述脑瘫小鼠动物模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤S2中氮氧混合物的氧含量为6.0～8.0％。
[0014]作为本专利技术所述脑瘫小鼠动物模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤S2中注入含氧的氮氧混合物的时间为0.5～1h。
[0015]作为本专利技术所述脑瘫小鼠动物模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤S2中注入含氧的氮氧混合物的时间为0.5h。
[0016]在本专利技术的技术方案中，将模型动物暴露到含氧的氮氧混合物0.5h，减轻了对动物的痛苦，其次又达到了缺血缺氧的效果。
[0017]作为本专利技术所述脑瘫小鼠动物模型的构建方法的优选实施方式，所述含氧的氮氧混合物以1.5L/min的流速注入缺氧室内。
[0018]本专利技术的第二目的是提供了一种上述构建方法建立的动物模型，所述NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔的年龄为8～10天。
[0019]本专利技术的第三目的是提供了一种构建方法建立的动物模型的评价方法，所述评价方法是通过体重分析、神经行为学检测和病理形态学方法对构建得到的脑瘫小鼠动物模型进行评价。
[0020]作为本专利技术所述评价方法的优选实施方式，所述神经行为学检测包括提高躯体摆动实验、悬吊实验、转棒实验、旷场实验和步态分析检测。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0022]1)本专利技术所采用的NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠，使得构建得到的脑瘫动物模型更接近真实人体内环境，提高了相关研究的可信度；
[0023]2)本专利技术的构建方法在简化操作的同时，减少了动物的痛苦；同时在构建过程中将小鼠与母鼠共养，使得母鼠可以给模型小鼠心灵慰藉；
[0024]3)本专利技术提供的脑瘫小鼠动物模型，可以用于脑瘫药物等应用；
[0025]4)本专利技术提供的评价方法，可信度高、准确度高，具有普适性。
附图说明
[0026]图1为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中脑瘫组和对照组体重分析示意图；
[0027]图2为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中脑瘫组和对照组提高躯体摆动实验分析示意图；
[0028]图3为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中脑瘫组和对照组悬吊实验分析示意图；
[0029]图4为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中实验组、模型组和对照组的转棒实验分析示意图；
[0030]图5为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中实验组、模型组和对照组的旷场实验分析示意图；
[0031]图6为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中实验组、模型组和对照组的摆动持续时间结果示意图；
[0032]图7为本专利技术脑瘫小鼠动物模型中实验组、模型组和对照组的推进持续时间结果示意图；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脑瘫小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷孕鼠腹腔注射LPS，致使孕鼠感染，自然分娩取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔，阻止NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔血液循环；S2.将处理后的NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔送回母亲共处，然后放置在有机玻璃缺氧室中，将含氧的氮氧混合物以1.0～2.0L/min的流速注入缺氧室内；S3.将步骤S2处理完成的NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔送回至母亲共处。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中氮氧混合物的氧含量为6.0～8.0％。3.如权利要求1所述的构建方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟，嵐山芮，李永生，
申请(专利权)人：广州市天河诺亚生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：