TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用技术

TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用，属于小鼠模型构建领域，包括：将TfR1

【技术实现步骤摘要】
TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于小鼠模型构建
，具体涉及TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]转铁蛋白受体1(Transferrinreceptor 1，TfR1)，也被称为CD71，是一些细胞吸收铁所必需的膜蛋白，但并不是所有的细胞类型吸收铁都需要的膜蛋白。转铁蛋白(Tf)是TfR1的配体，能携带细胞外的铁。Fe
2+-Tf/TfR1通过受体介导的内吞作用内化并转运至核内体，在核内体低pH环境中，铁从Tf释放出来，并通过跨膜蛋白离开核内体。这种转运是由二价金属转运体(DMT1/SLC11A2)介导的。摄入的铁可以被血红素或铁硫簇直接利用，也可被储存在铁蛋白中。转铁蛋白受体1(Transferrin receptor 1，TfR1)与肺癌细胞内铁含量的调节有关。有研究发现，肺癌细胞与正常细胞相比，TfR1表达水平显著升高。在人类结节病、过敏性肺炎、间质性肺病中均检测到了TfR1的表达水平异常。在小鼠的肺纤维化模型中，也证实了肺组织中存在TfR1的高表达。然而，TfR1在肺部疾病，尤其是肺癌发病过程中的调控机制还不完全清楚。目前关于肺组织中TfR1的功能研究主要集中在细胞实验方面，这可能与缺少稳定的动物模型有关。因此，迫切需要构建出一种稳定的动物模型，以便更好的研究TfR1在肺组织中以及肺癌发病过程中的作用和机制。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用，以便深入研究TfR1在肺组织中以及肺癌发病过程中的作用和机制。
[0004]本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：
[0005]本专利技术的TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0006]步骤一、将TfR1-/-转基因小鼠和Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，得到F1代，经鉴定，基因型分别为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2和TfR1
+/-；
[0007]步骤二、将F1代TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠和F1代TfR1
+/-转基因小鼠进行杂交，得到F2代，经鉴定，基因型分别为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2、TfR1
+/+
；Sftpc-CreERT2和TfR1
+/+
；
[0008]步骤三、将F2代TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，经鉴定，得到F3代TfR1-/-；Sftpc-CreERT2纯合子基因敲除小鼠，即TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型。
[0009]作为优选的实施方式，步骤一中，F1代小鼠基因型鉴定过程如下：
[0010](1)PCR
[0011]TfR1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：
[0012]TfR1-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；
[0013]TfR1-/-R：TCCTTTCTGTGCCCAGTTCT；
[0014]Sftpc-CreERT2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：
[0015]Sftpc-CreERT2(1)：ACACCGGCCTTATTCCAAG；
[0016]Sftpc-CreERT2(2)：TGCTTCACAGGGTCGGTAG；
[0017]Sftpc-CreERT2(3)：CATTACCTGGGGTAGGACCA；
[0018]扩增反应体系20μL，其中，ddH2O 7μL、2
×
Taq Plus MasterMix 10μL、DNA模板1μL、引物各1μL；
[0019]反应条件：94℃3min，94℃30s，60℃30s，72℃1min，重复3个步骤35个循环，72℃5min，12℃保持；
[0020](2)琼脂糖凝胶电泳
[0021]PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳；
[0022]TfR1-/-基因敲除结果判定指标：出现约165bp条带的为野生型小鼠，出现约310bp条带的为转基因小鼠；
[0023]Sftpc-CreERT2基因敲除结果判定指标：出现约327bp条带的为野生型小鼠，出现约210bp条带的为转基因小鼠；
[0024](3)TfR1基因型鉴定结果为：F1代小鼠全部显示165bp和310bp双条带，F1代全部为杂合子小鼠，基因型为TfR1
+/-；
[0025]Sftpc-CreERT2基因型鉴定结果为：一部分F1代小鼠显示210bp和327bp双条带，为杂合子小鼠，基因型为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2；另一部分F1代小鼠只显示327bp条带，为野生型小鼠，基因型为TfR1
+/-。
[0026]作为优选的实施方式，步骤一中，F2代小鼠基因型鉴定过程如下：
[0027](1)PCR
[0028]TfR1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：
[0029]TfR1-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；
[0030]TfR1-/-R：TCCTTTCTGTGCCCAGTTCT；
[0031]Sftpc-CreERT2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：
[0032]Sftpc-CreERT2(1)：ACACCGGCCTTATTCCAAG；
[0033]Sftpc-CreERT2(2)：TGCTTCACAGGGTCGGTAG；
[0034]Sftpc-CreERT2(3)：CATTACCTGGGGTAGGACCA；
[0035]扩增反应体系20μL，其中，ddH2O 7μL、2
×
Taq Plus MasterMix 10μL、DNA模板1μL、引物各1μL；
[0036]反应条件：94℃3min，94℃30s，60℃30s，72℃1min，重复3个步骤35个循环，72℃5min，12℃保持；
[0037](2)琼脂糖凝胶电泳
[0038]PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳；
[0039]TfR1-/-基因敲除结果判定指标：出现约165bp条带的为野生型小鼠，出现约310bp条带的为转基因小鼠；
[0040]Sftpc-CreERT2基因敲除结果判定指标：出现约327bp条带的为野生型小鼠，出现约210bp条带的为转基因小鼠；
[0041](3)鉴定结果为：F2代小鼠包括Sftpc-CreERT2基因小鼠，基因型为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2和TfR1
+/+
；Sftpc-CreERT2；F2代小鼠还包括野生型小鼠，基因型为TfR1
+/+
。
[0042]作为优选的实施方式，步骤一中，F3代小鼠基因型鉴定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将TfR1-/-转基因小鼠和Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，得到F1代，经鉴定，基因型分别为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2和TfR1
+/-；步骤二、将F1代TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠和F1代TfR1
+/-转基因小鼠进行杂交，得到F2代，经鉴定，基因型分别为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2、TfR1
+/+
；Sftpc-CreERT2和TfR1
+/+
；步骤三、将F2代TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，经鉴定，得到F3代TfR1-/-；Sftpc-CreERT2纯合子基因敲除小鼠，即TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤一中，F1代小鼠基因型鉴定过程如下：(1)PCRTfR1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：TfR1-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；TfR1-/-R：TCCTTTCTGTGCCCAGTTCT；Sftpc-CreERT2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：Sftpc-CreERT2(1)：ACACCGGCCTTATTCCAAG；Sftpc-CreERT2(2)：TGCTTCACAGGGTCGGTAG；Sftpc-CreERT2(3)：CATTACCTGGGGTAGGACCA；扩增反应体系20μL，其中，ddH2O 7μL、2
×
Taq Plus MasterMix 10μL、DNA模板1μL、引物各1μL；反应条件：94℃3min，94℃30s，60℃30s，72℃1min，重复3个步骤35个循环，72℃5min，12℃保持；(2)琼脂糖凝胶电泳PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳；TfR1-/-基因敲除结果判定指标：出现约165bp条带的为野生型小鼠，出现约310bp条带的为转基因小鼠；Sftpc-CreERT2基因敲除结果判定指标：出现约327bp条带的为野生型小鼠，出现约210bp条带的为转基因小鼠；(3)TfR1基因型鉴定结果为：F1代小鼠全部显示165bp和310bp双条带，F1代全部为杂合子小鼠，基因型为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2基因型鉴定结果为：一部分F1代小鼠显示210bp和327bp双条带，为杂合子小鼠，基因型为TfR1
+/-；Sftpc-CreERT2；另一部分F1代小鼠只显示327bp条带，为野生型小鼠，基因型为TfR1
+/-。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤一中，F2代小鼠基因型鉴定过程如下：(1)PCRTfR1-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：TfR1-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；TfR1-/-R：TCCTTTCTGTGCCCAGTTCT；
Sftpc-CreERT2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：Sftpc-CreERT2(1)：ACACCGGCCTTATTCCAAG；Sftpc...

【专利技术属性】
技术研发人员：郗艳丽，徐斌，左丽丽，许娜，
申请(专利权)人：吉林医药学院，
类型：发明
国别省市：