治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的RNA调节性寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的RNA调节性寡核苷酸。具体地，本发明专利技术提供改善的寡核苷酸和其用于治疗、缓解、预防和/或延迟DMD或BMD的应用。应用。应用。

【技术实现步骤摘要】
代替。同样适用的是“由2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架组成的寡核苷酸”可以被“由硫代磷酸酯骨架连接的2
’-
O-甲基RNA单体的寡核苷酸”代替。
[0014]在本专利技术的背景中，表述”用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物”可被表述”用于杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的治疗”取代。
[0015]优选地，寡核苷酸是具有不超过34个核苷酸的寡核苷酸。所述寡核苷酸可以具有10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个核苷酸。也可认为这样的寡核苷酸是具有10至33个核苷酸的寡核苷酸。
[0016]因此，本专利技术的寡核苷酸包含2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架并且包含不超过34个核苷酸(即，它包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个核苷酸)。
[0017]因此，本专利技术的寡核苷酸由通过硫代磷酸酯骨架连接2
’-
O-甲基RNA单体组成并且包含不超过34个核苷酸(即，它包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个核苷酸)。
[0018]因此，本专利技术的寡核苷酸包含2
’-
O-甲基RNA单体、硫代磷酸酯骨架，包含不超过34个核苷酸(即，它包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个核苷酸)和5-甲基嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基。
[0019]因此，本专利技术的寡核苷酸由通过硫代磷酸酯骨架连接的2
’-
O-甲基RNA单体组成，并且包含不超过34个核苷酸(即，它包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个核苷酸)和5-甲基嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基。
[0020]这些寡核苷酸中的每一个用作或可以用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物。
[0021]本专利技术的寡核苷酸包含2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA单体或由2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA单体组成。这样的寡核苷酸包含通过或由硫代磷酸酯骨架连接的2
’-
O-甲基RNA单体，或由2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA组成。优选地，这样的寡核苷酸由2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA组成。技术人员已知这样的化学品。遍及申请，包含2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸可被包含2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA的寡核苷酸代替。遍及申请，由通过或由硫代磷酸酯骨架连接的2
’-
O-甲基RNA单体组成的寡核苷酸可被由2
’-
O-甲基硫代磷酸酯RNA组成的寡核苷酸代替。
[0022]在本专利技术的背景下，“骨架”被用于确定两个糖单元或糖单元或部分的修饰的变体之间的连接，如此后稍后限定的(即，核苷间键(核苷间连接，internucleoside linkage))。遍及说明书，可交换地使用单词“骨架”、“核苷间键”和“连接”。因此，具有10个核苷酸的寡核苷酸具有9个骨架，将如本文稍后限定的10个糖单元或糖单元或部分的修饰的变体连接在一起。根据本专利技术的寡核苷酸的至少一个骨架由硫代磷酸酯部分组成，将如本文稍后限定的两个糖单元或糖单元或部分的修饰的变体连接在一起。因此，由硫代磷酸酯部分取代RNA中存在的至少一个磷酸二酯骨架。天然存在的核苷间键或骨架是3
’
至5
’
磷酸二酯键。
[0023]另外，本专利技术的寡核苷酸可包含碱基修饰，其增加与靶标链的结合亲和力、增加所述寡核苷酸与它的靶标链的产生的双链体的解链温度(melting temperature)、和/或减少免疫刺激影响、和/或增加生物稳定性、和/或改善生物分布和/或组织内分布、和/或细胞摄取和运输。在更优选的实施方式中，本专利技术的寡核苷酸包含5-甲基嘧啶和/或2，6-二氨基嘌
呤碱基。5-甲基嘧啶碱基选自5-甲基胞嘧啶和/或5-甲基尿嘧啶和/或胸腺嘧啶，其中胸腺嘧啶与5-甲基尿嘧啶相同。
[0024]因此，在本专利技术的修饰的寡核苷酸的背景中，表述“包含5-甲基胞嘧啶和/或5-甲基尿嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基”可以被“包含选自由5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶和2，6-二氨基嘌呤碱基组成的组的碱基修饰”代替。
[0025]当本专利技术的寡核苷酸具有两个或更多这样的碱基修饰时，所述碱基修饰可以是相同的，例如，寡核苷酸中的所有的这样的修饰的碱基是5-甲基胞嘧啶，或所述碱基修饰可以是不同的碱基修饰的组合，例如，寡核苷酸可具有一个或更多个5-甲基胞嘧啶和一个或更多个5-甲基尿嘧啶。
[0026]遍及文件，可以相互交换“胸腺嘧啶”和“5-甲基尿嘧啶”。类推地，2，6-二氨基嘌呤与2-氨基腺嘌呤相同，和遍及文件可以相互交换这些术语。在US 7,745,42的另外的背景中公开了2，6-二氨基嘌呤的应用。
[0027]如此处确定的术语“碱基修饰”或“修饰的碱基”指的是，现有的碱基(即，嘧啶或嘌呤碱基)的修饰或指的是，碱基的从头合成。与现有的碱基相比，这种从头合成的碱基可适合作“修饰的”。包含5-甲基胞嘧啶和/或5-甲基尿嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基的本专利技术的寡核苷酸分别地意味着，通过用甲基对嘧啶环的5-位置上的质子的取代，已经修饰了所述寡核苷酸的至少一个胞嘧啶核酸碱基，即，5-取代的胞嘧啶，和/或通过用甲基对嘧啶环的5-位置上的质子的取代，已经修饰了所述寡核苷酸的至少一个尿嘧啶核酸碱基(即，5-甲基尿嘧啶)，和/或通过用氨基对2-位置上的质子的取代，已经修饰了所述寡核苷酸的至少一个腺嘌呤核酸碱基(即，2，6-二氨基嘌呤)。在本专利技术的背景内，表述“在嘧啶环的位置5中用甲基取代质子”可被表述“用5-甲基嘧啶取代嘧啶”代替，嘧啶仅指尿嘧啶、仅指胞嘧啶或指两者。同样地，在本专利技术的背景内，表述“在腺嘌呤的位置2中用氨基取代质子”可被表述“用2，6-二氨基嘌呤取代腺嘌呤”代替。如果所述寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多个胞嘧啶、尿嘧啶和/或腺嘌呤，分别地这样修饰至少一个、2、3、4、5、6、7、8、9或更多个胞嘧啶、尿嘧啶和/或腺嘌呤。优选地，以这样的方式或分别地通过5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤取代，已经修饰了所有的胞嘧啶、尿嘧啶和/或腺嘌呤。不必说，本专利技术的这个方面只可使应用于在它们的序列中分别地包含至少一个胞嘧啶、尿嘧啶或腺嘌呤的寡核苷酸。通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种寡核苷酸，包含2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架并且包含5-甲基尿嘧啶和/或5-甲基胞嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基，用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含5-甲基胞嘧啶和/或5-甲基尿嘧啶碱基。3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含2，6-二氨基嘌呤碱基。4.根据权利要求1-3中任一项所述的寡核苷酸，其中，与包含2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架而不具有5-甲基胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶以及2，6-二氨基嘌呤的相应的寡核苷酸相比，所述寡核苷酸具有改善的参数，其中所述改善的参数是：结合亲和力、动力学、外显子跳读活性、生物稳定性、(组织内)分布、细胞摄取、运输和/或免疫原性。5.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸的长度小于34个核苷酸。6.根据权利要求1至5中任一项所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸反向互补于和/或结合至和/或靶向和/或杂交于肌养蛋白外显子和/或非外显子区域的至少部分。7.根据权利要求1至6中任一项所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含反向互补于和/或结合至和/或靶向和/或杂交于与肌养蛋白前体mRNA外显子44至55的至少部分的序列或由反向互补于和/或结合至和/或靶向和/或杂交于肌养蛋白前体mRNA外显子44至55的至少部分的序列组成，所述寡核苷酸部分具有从10至33个核苷酸。8.根据权利要求7所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含2
’-
O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架，所述寡核苷酸由包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：14-SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53-SEQ ID NO：90中的一个或由SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：14-SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53-SEQ ID NO：90中的一个组成的核苷酸或碱基序列，或由包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：14-SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53-SEQ ID NO：90中的一个的片段或由SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：14-SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53-SEQ ID NO：90中的一个的片段组成的核苷酸序列表示，并且所述寡核苷酸包含5-甲基尿嘧啶和/或5-甲基胞嘧啶和/或2，6-二氨基嘌呤碱基。9.根据权利要求8所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸由包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：57中的一个或由SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：57中的一个组成的核苷酸或碱基序列，或由包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：57中的一个的片段或由SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：57中的一个的片段组成的核苷酸或碱基序列表示。10.根据权利要求8或9所述的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸由包含SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：171-SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：217、SEQ ID NO：218、SEQ ID NO：219中的一个或由SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：171-SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：217、SEQ ID NO：218、SEQ ID NO：219中的一个组成的核苷酸或碱基序列，或由包含SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：171-SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：21...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得，
申请(专利权)人：比奥马林技术公司，
类型：发明
国别省市：