一种新型的血清甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种甲胎蛋白异质体3（AFP

【技术实现步骤摘要】
一种新型的血清甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生化试剂测定
，特别涉及一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，还涉及所述甲胎蛋白异质体3测定试剂盒制备方法和应用。

技术介绍

[0002]原发性肝细胞癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃癌、食道癌而居第三位。我国是乙肝大国，大约有1.2亿例乙肝病毒携带者，每年有13万患者死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45%。与其他肿瘤普查一样，肝癌防治主要在于“三早”，即早期发现、早期诊断和早期治疗。早期肝癌，如得到科学治疗，5年生存率在50-70％以上，不少患者可以长期存活。中晚期肝癌通常伴有肝内外的转移，手术无法切除，药物治疗也难有显效，手术并发症多，疗效差，生存期短，一般发病后生存时间仅为6个月。临床肝癌治疗困难的最主要原因是临床确诊时已近晚期。因此对于肝癌，在亚临床阶段即可得出诊断非常重要。甲胎蛋白(AFP)已经被广泛应用于临床诊断，但是HCC和肝病患者血清中AFP均有升高，致使对AFP检测结果的解释产生混淆。从临床经验角度观察，AFP特异性不足限制了HCC早期诊断的价值。其中AFP的异质体AFP-L3是肝癌细胞所特有，可以作为检测HCC的一个新的肿瘤标志物。
[0003]AFP-L3临床意义：（1）AFP-L3有助于鉴别AFP阳性的良、恶性肝病：甲胎蛋白异质体AFP-L3只由肝癌细胞分泌产生，因此检测甲胎蛋白异质体比率，可有效鉴别良、恶性肝病。
[0004]（2）AFP-L3有助于预警肝癌发生：在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位病变时，相比较影像学技术，AFP-L3可以提前9-12个月被检测出，FDA报道有21个月预警的，对患者进行AFP-L3检测可以早期预警肝癌发生。如果患者血清中AFP-L3占AFP比例超过10%，即可定为阳性，提示肝癌的发生率大于95%。AFP-L3占总AFP的比例越高提示肿瘤的恶性程度越高。
[0005]目前检测甲胎蛋白异质体3的方法主要是双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)，该方法准确性和灵敏度高，但是仪器设备昂贵，试剂保存不方便，价格高。胶乳免疫比浊法法具有特异性高，操作简单快捷、准确安全、可自动化分析、成本较低的优点，但现在国内并没有出现AFP-L3生化试剂盒，仅有AFP试剂盒。AFP-L3生化试剂盒研发困难，样本中含量低，反应不灵敏，本专利技术针对甲胎蛋白异质体3试进行剂盒的研发以满足临床检测以及化学分析的要求。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒。
[0007]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
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20-80mmol/L；NaCl
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9g/L；助悬剂
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10-40g/L；表面活性剂
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0.1%-2%；防腐剂
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0.5-1 ml /L。
[0008]试剂R2中含有以下成分：缓冲液
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20-80mmol/L；羊抗人AFP-L3抗体包被胶乳颗粒
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10-35mg/L；羊抗人AFP-L3抗体包被磁性纳米颗粒
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10-35mg/L；表面活性剂
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0.1%-2%；助悬剂
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10-40g/L；防腐剂
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0.5-1 ml /L。
[0009]其中所述百分比为体积比。
[0010]优选地，所述试剂R1的pH 为7.0-7.5。
[0011]优选地，所述试剂R2 的pH为6.5-7.5。
[0012]优选地，所述试剂 R1 和R2试剂中的表面活性剂选自吐温-20、曲拉通x-100、聚氧乙烯烷基醚GLAURIN中的一种或多种。更优选地，表面活性剂为二乙二醇单月桂酸酯GLAURIN。
[0013]优选地，所述试剂R1和R2试剂中的助悬剂为牛血清白蛋白、海藻糖、丙三醇和聚乙二醇6000中的一种或多种。更优选地，助悬剂由牛血清白蛋白、海藻糖和聚乙二醇6000组成，质量比为1:1:1。
[0014]优选地，所述试剂R1 和R2试剂中的防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT和苯甲酸钠中的一种或多种。
[0015]优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1～5:1。更优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为4:1。
[0016]上述所述的甲胎蛋白异质体3测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：一、羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体包被的磁性纳米颗粒的制备方法：取适量300nm修饰的聚乙二醇包覆的磁性纳米颗粒，加入到10ml缓冲液中，使颗粒终浓度为1.0% ；然后加入适量羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体、1ml mmol/L的16-巯基十六烷-1-醇溶液，室温下混合搅拌2小时，加入1ml 10g/L的BSA溶液，10000 rpm离心30分钟，去除上清，所得沉淀即为封闭完成的羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体包被的磁性纳米颗粒。二、羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体包被胶乳颗粒的制备方法：取适量表面羧基化的聚苯乙烯胶乳颗粒，加入到10ml缓冲液中，使胶乳颗粒终浓度为1.0% ；然后加入适量羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐及N-羟基丁二酰亚胺，室温下混合搅拌3小时，加入1ml 10g/L的BSA溶液，12000 rpm离心40分钟，去除上清，所得沉淀即为羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体包被胶乳颗粒；再按照比例加入其它物质溶解，制成甲胎蛋白异质体3测定试剂盒；所述的羊抗人甲胎蛋白异质体3抗体包被胶乳颗粒为两种不同粒径大小的颗粒，分别为： 100nm和200nm，质量
比为1:1。
[0017]本专利技术还公开了甲胎蛋白异质体3测定试剂盒的应用，用于疾病的辅助诊断和治疗目的测定血清中甲胎蛋白异质体3的浓度。
[0018]本专利技术试剂盒采用胶乳免疫比浊法，其反应原理为试剂R1中提供稳定性试剂反应环境，去除干扰，然后被检测物与试剂R2中吸附在胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
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20-80mmol/L；NaCl
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9g/L；助悬剂
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10-40g/L；表面活性剂
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0.1%-2%；防腐剂
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0.5-1 ml /L；试剂R2中含有以下成分：缓冲液
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20-80mmol/L；羊抗人AFP-L3抗体包被胶乳颗粒
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10-35mg/L；羊抗人AFP-L3抗体包被磁性纳米颗粒
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10-35mg/L；表面活性剂
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0.1%-2%；助悬剂
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10-40g/L；防腐剂
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0.5-1 ml /L；其中所述百分比为体积比。2.根据权利要求1所述的甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液体系为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、N-氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液、2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液中的一种。3.根据权利要求1所述的甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为7.0-7.5，试剂R2的pH为6....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘安娜，张刘云，
申请(专利权)人：中临健康科技产业有限公司中金进出口有限公司，
类型：发明
国别省市：