一种能够促进牙髓干细胞成骨转化的干扰RNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及牙髓干细胞技术领域，尤其涉及一种能够促进牙髓干细胞成骨转化的干扰RNA及其应用。本发明专利技术所提供的干扰RNA为siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.4所示，所示siRNA的反义链序列如SEQ ID NO.5所示，本发明专利技术所提供的siRNA能够有效的抑制LOC107985830的表达来促进牙髓干细胞的成骨转化，因此可将其用于制备牙髓干细胞成骨转化促进剂。用于制备牙髓干细胞成骨转化促进剂。用于制备牙髓干细胞成骨转化促进剂。

【技术实现步骤摘要】
一种能够促进牙髓干细胞成骨转化的干扰RNA及其应用


[0001]本专利技术涉及牙髓干细胞
，尤其涉及一种能够促进牙髓干细胞成骨转化的干扰RNA及其应用。

技术介绍

[0002]临床上由于牙髓的创伤或者感染引起的牙髓炎或者根尖周炎的传统治疗方法通常采用根管治疗的方法来治疗。然而传统的根管治疗方法存在一定的不足。因此，研究人员基于组织工程原料，提出了牙髓再生治疗。但是作为牙髓再生种子细胞的牙髓干细胞具有多种不同的转化方向，如何促进牙髓干细胞的成骨转化去进一步生产牙齿是急需解决的问题。
[0003]哺乳动物基因组中，超过90%的基因均转录为非编码RNA，在最开始的研究中，研究人员将非编码RNA认定为垃圾RNA。然而，随着大规模基因组测序的完成，研究人员发现非编码RNA在生理过程中发挥关键性作用。长链非编码RNA是非编码RNA家族中的重要成员，其占人体内全部非编码RNA的大部分，lncRNA的核苷酸序列长度超过200个核苷酸。lncRNA在人体组织内的表达非常广泛，具有较强的特异性。尽管lncRNA不能编码蛋白质，但是lncRNA几乎参与基因表达调控的每一个层面，涉及转录调控，染色质重塑，细胞内物质运输等多种生物学进程。
[0004]目前，长链非编码RNA LOC107985830在牙髓干细胞中的作用尚未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种能够有效的促进牙髓干细胞成骨转化的促进剂。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了LOC107985830功能性表达的抑制剂在制备用于促进牙髓干细胞成骨转化的促进剂中的用途。
[0007]优选地，所述LOC107985830的转录本序列为XR_001739224.1。
[0008]优选地，所述抑制剂选自LOC107985830的shRNA或siRNA。
[0009]优选地，所述抑制剂为LOC107985830的siRNA，所述siRNA的正义链为SEQ ID NO.4所示，所述siRNA的反义链为SEQ ID NO.5所述。
[0010]此外，本专利技术提供了一种促进牙髓干细胞成骨转化的促进剂，所述促进剂为抑制LOC107985830功能性表达的抑制剂，所述抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链为SEQ ID NO.4所示,所述siRNA的反义链为SEQ ID NO.5所示.此外，本专利技术提供了一种LOC107985830的基因抑制剂，所述抑制剂为LOC107985830的siRNA，所述siRNA的正义链为SEQ ID NO.4所示,所示siRNA的反义链为SEQ ID NO.5所示，所述siRNA能够促进牙髓干细胞成骨。
[0011]此外，本专利技术提供了一种长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA为LOC107985830，所述LOC107985830的转录本序列为XR_001739224.1，所述LOC107985830的
抑制剂能够促进牙髓干细胞成骨。
[0012]本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次证明了通过siRNA抑制LOC107985830能够有效的促进牙髓干细胞的ALP活性，细胞钙化以及成骨转化相关基因RUNX2和OCN的蛋白表达，因此，LOC107985830的siRNA能够有效的牙髓干细胞的成骨转化，从而为进一步使牙髓干细胞通过成骨转化分化为牙本质去修复牙齿提供基础。
附图说明
[0013]图1 siLOC107985830-1，siLOC107985830-2，siLOC107985830-3对于LOC107985830的干扰效果。
[0014]图2 抑制LOC107985830对于ALP活性的影响。
[0015]图3 抑制LOC107985830对于细胞钙化的影响。
[0016]图4 抑制LOC107985830对于成骨转化相关蛋白RUNX2和OCN的影响。
具体实施方式
[0017]实施例1（1）将本院收集的8-12岁的牙面形态完整且无龋的牙齿浸入到加有双抗的无菌PBS中进行冲洗，同时将牙根部和颈部所附着的牙周膜等软组织全部去除；（2）沿着牙齿长轴将牙齿纵行劈开，并且在无菌条件下，使用无菌镊子将牙髓组织取出，置于无菌EP管中；（3）使用PBS洗涤3次后，加入500μl PBS并用剪刀将牙髓组织剪碎，将EP管放入离心机中，1500rpm/min离心3分钟，保留沉淀，去除上清；（4）加入I型胶原酶，置于细胞恒温培养箱中，37℃消化60min；（5）加入适量的含10% FBS的完全培养基终止消化，1500rpm/min离心3min，弃去上清，将组织块均匀铺在培养瓶底部，加入含有10%FBS的完全培养基，放于细胞恒温培养箱中，每2-3天更换一次培养基，流式细胞仪鉴定得到牙髓干细胞。
[0018]实施例21.转染siRNA（1）设计LOC107985830的siRNA表1 siRNA序列设计表
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名称序列（5
’-3’
）siLOC107985830-1CCUACUAUGUACUCAAUAAGU（SEQIDNO.2） UUAUUGAGUACAUAGUAGGUG（SEQIDNO.3）siLOC107985830-2CAGUGGAAGUGAUUACUAAGA（SEQIDNO.4） UUAGUAAUCACUUCCACUGGA（SEQIDNO.5）siLOC107985830-3GCACCUACUAUGUACUCAAUA（SEQIDNO.6） UUGAGUACAUAGUAGGUGCCA（SEQIDNO.7）（2）将牙髓干细胞接种于6孔板中，培养过夜后，弃去培养基进行转染，转染分组为空白对照组，si-NC组，siLOC107985830-1组，siLOC107985830-2组和siLOC107985830-3组，每组
设置3个重复。
[0019]（3）转染48h后，提取RNA。
[0020]2.提取RNA（1）在每组细胞中加入1ml Trizol，使用移液器吹打细胞并且收集细胞至2ml EP管中，冰上放置10min；（2）将EP管置于离心机中，12000rpm离心5min，将上清转移至新的EP管中；（3）加入200ul氯仿，混匀后，冰上放置15min，置于离心机中，12000rpm离心5min；（4）小心的吸取上清至新的EP管中，加入等体积的预冷异丙醇，冰上放置10min；（5）置于离心机中，12000转离心10min，弃去上清，加入1ml 75%乙醇（DEPC水配置）溶解沉淀，置于离心机中7500转，4℃，离心5min，去除上清，室温干燥，加入DEPC水溶解沉淀。
[0021]3.逆转录获取cDNA反应体系：总RNA 0.5ug，PrimeScript TM RT MasterMix 2ul，ddH2O up to 10ul。
[0022]反应条件：37℃ 15min；85℃ 5s；4℃ 保存。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制 LOC107985830功能性表达的干扰RNA在制备牙髓干细胞成骨转化促进剂中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述LOC107985830的转录本序列为XR_001739224.1。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述干扰RNA选自LOC107985830的shRNA或siRNA。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述干扰RNA为LOC107985830的siRNA，所述siRNA的正义链为SEQ ID NO.4所示，所述siRNA的反义链为SEQ ID NO.5所述。5. 一种促进牙髓干细胞成骨转化的促进剂，其特征在于，所述促进剂为抑制LOC107985830功能性表达的抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金凤，高杨，
申请(专利权)人：青岛市妇女儿童医院青岛市妇幼保健院，青岛市残疾儿童医疗康复中心，青岛市新生儿疾病筛查中心，
类型：发明
国别省市：