一种人源抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的中和活性单克隆抗体制造技术

本发明专利技术提供一种人源新型冠状病毒中和活性抗体及其应用。本发明专利技术从新冠病毒感染的康复病人体内分离筛选出具有中和活性的单克隆抗体，该抗体对新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)具有极优的亲和力和特异性，同时能够有效阻断新冠病毒与受体蛋白结合。

【技术实现步骤摘要】
一种人源抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的中和活性单克隆抗体
本专利技术涉及抗体
，具体涉及一种人源新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体。
技术介绍
新型冠状病毒为β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径为60-140nm。全基因组比对发现新型冠状病毒与严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)同源性达到70％，序列差异主要体现在与宿主细胞作用的关键spike基因(编码S-蛋白)。通常感染新型冠状病毒后表现出发热、乏力、干咳等肺炎症状，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。目前虽然已报道一些治疗药物，但仍需更多的临床实践证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时间。中和抗体是一类靶向病原体，并阻断病原体入侵细胞的特异性免疫球蛋白，能够筛选出针对新型冠状病毒的中和抗体是研发新冠病毒治疗药物的基础有鉴于此，提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是寻求一种能够有效阻断新型冠状病毒(SARS-CoV-2)与受体蛋白结合的中和活性单抗。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种分离的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段特异性结合人新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白，该抗体或其片段包括如SEQIDNO.1-3所示的VHCDR1-3，和如SEQIDNO.4-6所示的VLCDR1-3；或该抗体或其片段包括如SEQIDNO.11-13所示的VHCDR1-3，和如SEQIDNO.14-16所示的VLCDR1-3。。在一些实施方式中，所述抗体或其片段还包含重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或其组合。在一些实施方式中，所述抗体或其片段包含由SEQIDNO：7-8或17-18所示的氨基酸序列；或与SEQIDNO：7-8或17-18至少70％同源性的氨基酸序列，比如70％，80％或90％同源性的氨基酸序列。在一些优选的实施方式中，所述70％同源性是针对所述抗体或其片段的Fr区。在一些实施方式中，所述抗体或其片段为IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的其中一种同种型，在一些具体的实施方式中，所述抗体或其片段为为IgG4亚型。在一些实施方式中，所述抗体或其片段为嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体等。在一些实施方式中，所述抗体或其片段为Fab、Fab’和F(ab’)2、Fvs或单链抗体。在一些实施方式中，所述抗体或其片段包含氨基酸序列修饰，所述修饰包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割或非天然发生的氨基酸修饰。本专利技术还提供一种编码上述抗体或其片段的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸序列如SEQIDNO.9-10或19-20所示。本专利技术还提供一种组合物，所述组合物包含上述的抗体或其片段。在一些实施方式中，所述组合物为药物组合物；优选的，所述药物组合物还包含药学可接受的载体。本专利技术还提供一种复合物，所述复合物连接有上述抗体或其片段；在一些实施方式中，所述复合物为双抗复合物，复合物可连接另一种抗体序列；优选的，所述复合物还包含药学可接受的载体。本专利技术还提供一种分离的细胞，所述细胞包含编码上述的抗体或其片段的一种或多种多核苷酸。本专利技术还提供一种筛选方法，所述方法包括使用权利要求上述的抗体或其片段与其他溶液接触，基于接触进行筛选。本专利技术还提供一种检测方法，所述方法包括使用权利要求上述的抗体或其片段与其他溶液接触，基于接触进行检测。在一些优选的实施方式中，所述检测包括但不限于ELISA、WB、IP、IHC、CHIP、IP或CBA等方法检测。本专利技术还提供一种上述的抗体或其片段在制备诊断或治疗新冠病毒引起的疾病中的应用。本专利技术的提取分离纯化栓菌酸的方法相对于现有技术，至少具有以下有益效果：1)本专利技术制备的人源单克隆抗体能够特异性结合新型冠状病毒，具有高亲和力。2)本专利技术制备的人源抗新型冠状病毒抗体能够有效阻断新冠病毒与受体蛋白的结合，是有效的中和活性单抗。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1Spike蛋白制备的电泳图；图2抗体筛选的流式细胞分选结果图；图3重链基因扩增跑胶鉴定的部分结果；图4轻链基因扩增跑胶鉴定的部分结果；图5抗体EC50检测值；图6抗体IC50检测值。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。以下术语或定义仅仅是为了帮助理解本专利技术而提供。这些定义不应被理解为具有小于本领域技术人员所理解的范围。除非在下文中另有定义，本专利技术具体实施方式中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本专利技术。如本专利技术中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。术语“由…组成”被认为是术语“包含”的优选实施方案。如果在下文中某一组被定义为包含至少一定数目的实施方案，这也应被理解为揭示了一个优选地仅由这些实施方案组成的组。在提及单数形式名词时使用的不定冠词或定冠词例如“一个”或“一种”，“所述”，包括该名词的复数形式。本专利技术中的术语“大约”、“大体”表示本领域技术人员能够理解的仍可保证论及特征的技术效果的准确度区间。该术语通常表示偏离指示数值的±10％，优选±5％。此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三、(a)、(b)、(c)以及诸如此类，是用于区分相似的元素，不是描述顺序或时间次序必须的。应理解，如此应用的术语在适当的环境下可互换，并且本专利技术描述的实施方案能以不同于本专利技术描述或举例说明的其它顺序实施。本专利技术中关于细胞、核酸所使用的术语“分离的”，例如“分离的抗体或其片段”是指分别与存在于天然来源中的其它抗体或其片段所分离的分子；还可指当通过重组技术产生时基本上不含细胞材料、病毒材料或细胞培养基的核酸或肽，或化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。此外，“分离的”意在包括不以天然状态存在的，并且不会以天然状态存在。术语“本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段特异性结合人新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白，该抗体或其片段包括如SEQ ID NO.1-3所示的VH CDR1-3，和如SEQ ID NO.4-6所示的VL CDR1-3；或该抗体或其片段包括如SEQ ID NO.11-13所示的VHCDR1-3，和如SEQ ID NO.14-16所示的VL CDR1-3。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段特异性结合人新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白，该抗体或其片段包括如SEQIDNO.1-3所示的VHCDR1-3，和如SEQIDNO.4-6所示的VLCDR1-3；或该抗体或其片段包括如SEQIDNO.11-13所示的VHCDR1-3，和如SEQIDNO.14-16所示的VLCDR1-3。


2.如权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段还包含重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或其组合。


3.如权利要求1-2任一所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段包含由SEQIDNO：7-8或17-18所示的氨基酸序列；或与SEQIDNO：7-8或17-18至少70％同源性的氨基酸序列。


4.如权利要求1-3任一所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段为IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的其中一种同种型；优选的，所述抗体或其片段为嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体；更优选的，所述抗体或其片段为Fab、F...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚峰，
申请(专利权)人：李亚峰，
类型：发明
国别省市：山西;14