一株芽孢杆菌W608及其在防治油菜菌核病中的应用制造技术

本发明专利技术提供一株芽孢杆菌（

【技术实现步骤摘要】
一株芽孢杆菌W608及其在防治油菜菌核病中的应用
本专利技术涉及芽孢杆菌，尤其是涉及一种芽孢杆菌（Bacillussp.）W608及其在制备防治油菜菌核病发酵上清液中的应用。
技术介绍
长期以来化学农药一直是植物病害防治的主要方式，它对农业生产上防治病虫害起到了十分重要的作用，但长期不合理使用化学农药产生了药物残留、环境污染及病原耐药性增加等诸多问题。因此，开发对人类和环境友好、防治效果优良的植物病害防治新策略尤为重要。生物防治是利用微生物或其活性产物来防治农作物病虫害，具有安全高和防治效果好的优点，已经成为当前控制农作物病虫害的重要途径，其中活性微生物筛选是至关重要的环节。深远海作为远离陆地，面积广阔的海域，具有独立的潮汐系统和强大的洋流系统，而且高压、低温、黑暗、高盐、寡营养的深海极限环境使得生长于该区域的微生物在适应极端环境过程中形成了特殊的生理代谢和防御机制。因而，这些深海微生物可能是结构新颖、活性优良天然产物的重要来源，开发利用高活性深海微生物或其活性产物已成为当前海洋生物资源研发的热点之一。芽孢杆菌（Bacillussp.）因能产生耐热抗逆的芽孢，所以是土壤和植物微生物生态的优势种群。同时由于芽孢杆菌具有内生芽孢、抗逆性强、繁殖速度快、营养要求简单和易于在植物根部定殖的特点，使其在植物病害生物防治中被加以应用。例如，由美国Gustafson公司开发的命名为GBO3的芽孢杆菌能有效防治Fusarium和Rhizoctonia引起的植物病害，与此同时其还具有防病和促进植物生长的作用。江苏省农业科学院筛选获得的Bacillussp.916菌株对水稻白叶枯病具有显著的防治效果。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一株芽孢杆菌（Bacillussp.）W608。本专利技术的目的之二在于提供一株芽孢杆菌（Bacillussp.）W608在制备防治油菜菌核病发酵上清液中的应用。所述芽孢杆菌（Bacillussp.）W608分离自中国第31次大洋科学考察所采集的深海沉积物样品（152º57′3012′′W，6º44′9371′′N）；该菌已于2020年07月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号为CCTCCNO：M2020335。所述芽孢杆菌（Bacillussp.）W608通过聚合酶链式反应（PCR）扩增16SrDNA序列，与美国国家生物技术信息中心（NCBI）GenBank数据库中相应的序列进行比对分析，发现其与芽孢杆菌属（Bacillussp.）细菌具有99%的序列相似性。所述防治油菜菌核病发酵上清液的制备方法如下：首先将芽孢杆菌（Bacillussp.）W608在含有5mLLB培养基的试管中进行活化培养，然后将活化的菌株接种到500mLLB培养基中进行发酵培养，发酵培养结束后离心除去菌体，得到防治油菜菌核病发酵上清液。所述离心除去菌体是在10,000r/min下离心15～20min。所述活化培养的时间为12-24h。所述发酵培养的温度为28-30℃，发酵培养的时间为48-60h，发酵培养的摇床转速为180-220r/min。所述油菜菌核病致病真菌为核盘菌。所述防治油菜菌核病发酵上清液的使用方法如下：将防治油菜菌核病发酵上清液直接或稀释后喷洒在植物上。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：发酵上清液的制备工艺简单，抑真菌谱广，生防效果好。在油菜菌核病（核盘菌）的田间防治试验中显示出较好地生物防治效果，防效可达57%以上。附图说明图1为芽孢杆菌（Bacillussp.）W608的菌落形态。图2为芽孢杆菌（Bacillussp.）W608的发酵上清液对不同植物致病真菌的抑菌效果图。在图2中：A：宛氏拟青霉；B：核盘菌；C：立枯丝核菌；D：镰刀菌；E：长柄链格孢；F：梨炭疽菌；G：葡萄座腔；H：梨黑斑。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。实施例1芽孢杆菌（Bacillussp.）W608的分离筛选本专利技术涉及芽孢杆菌（Bacillussp.）W608来源于本申请人从中国第31次大洋科学考察所采集的深海沉积物样品。先将沉积物样品用无菌海水梯度稀释至10-10，分别取100μL的10-1-10-10的稀释液均匀涂布在LB平板上，每个梯度做三个平行重复，并放置在28℃培养箱中培养48h。根据菌落的形态、颜色等特征，挑取单菌落划线于LB培养板，经过3轮重复划线，直至每株得到纯培养，即完成菌株的分离纯化。获得菌株在LB培养基上生长，28℃培养24h后，菌体不透明，呈白色，边缘不光滑呈锯齿状。实施例2芽孢杆菌（Bacillussp.）W608的菌种鉴定利用16SrDNA通用引物27F和1492R（27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAT；1492R：ACGGCTACCTTGTTACGACTT）对深海沉积物来源菌株W608的16SrDNA序列进行扩增。以W608总DNA为PCR扩增模板，在PCR扩增仪上进行PCR反应。反应条件为：94℃变性1min；55℃退火1min；72℃延伸1.5min，30个循环。扩增序列经测序公司测序后，获得该菌株16SrDNA序列。将该序列通过与美国国家生物技术信息中心GenBank中核酸数据进行比对分析（http://ncbi.nlm.nih.gov/blast）。结果显示，W608的16SrDNA序列与Bacillusvelezensis（MN938176.1）、Bacillussiamensis（MN865945.1）、及Bacillusamyloliquefaciens（MK182997.1）等菌株的序列相似性为99％，即芽孢杆菌（Bacillussp.）W608与芽孢杆菌同源，因此，将其命名为芽孢杆菌（Bacillussp.）W608。所述芽孢杆菌（Bacillussp.）W608的16SrDNA部分序列如下：AAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株芽孢杆菌（

【技术特征摘要】
1.一株芽孢杆菌（Bacillussp.）W608，已于2020年07月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2020335。


2.权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈新华，何天良，温巧，
申请(专利权)人：福建农林大学，中国大洋矿产资源研究开发协会中国大洋事务管理局，
类型：发明
国别省市：福建;35