利用PCR反应系统进行PCR反应的方法技术方案

本发明专利技术提出了利用PCR反应系统进行PCR反应的方法，该方法包括：将所述活塞进行第一移动处理；将所述活塞进行第二移动处理，以便使进入注射室的所述稀释液与裂解冻干粉和样本进行第一混合处理；将第一混合处理产物进行裂解处理；将所述活塞进行第三移动处理；将所述活塞进行第四移动处理，以便使进入注射室的所述裂解处理产物与剩余部分稀释液进行第二混合处理；将所述活塞进行第五移动处理，以便使第二混合处理产物进入所述注射室；将所述活塞进行第六移动处理，以便使进入注射室的所述第二混合处理产物与反转录酶和PCR原料冻干粉进行第三混合处理；以及将第三混合处理产物进行PCR温度循环扩增处理。

【技术实现步骤摘要】
利用PCR反应系统进行PCR反应的方法
本专利技术涉及分子生物学领域，具体地，本专利技术涉及利用PCR反应系统进行PCR反应的方法。
技术介绍
传统的PCR反应过程一般都是分开进行的，即先通过核酸提取试剂盒提取所需要的核酸，然后再将提取出的核酸和试剂混合添加到PCR反应管中，最后再将PCR反应管放入PCR仪器中进行PCR扩增反应，才能得出最终结果。传统的PCR反应过程操作步骤繁琐，工作效率低。因此，简便高效的PCR反应过程还需要进一步研究开发。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：传统的PCR反应过程操作步骤繁琐，工作效率低。究其原因，专利技术人发现，主要在于传统的PCR反应过程中的每一步一般都需要专业人士进行操作，并且这些操作一般都需要通过不同的仪器如核酸纯化仪、全自动工作站等分别进行，另外，整个过程的操作也需要在标准的PCR实验室环境下才能进行。基于上述问题，专利技术人通过微流控管路将核酸的提取、核酸和试剂的混合以及最终PCR的反应全部整合到了一个系统中，利用该系统进行PCR反应的方法实现了真正的全自动化操作，解决了传统PCR实验过程需要在专业实验环境下由专业人士进行操作的难题，减少了人为操作带来的误差，极大地提高了PCR反应的工作效率，大大节约了人力资源成本。为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种利用PCR反应系统进行PCR反应的方法。根据本专利技术的实施例，所述PCR反应系统包括：样本容纳单元，所述样本容纳单元内设置有裂解冻干粉和样本，并且所述样本容纳单元具有第一液体出/入口；稀释液容纳单元，所述稀释液容纳单元内设置有稀释液，并且所述稀释液容纳单元具有稀释液出口；PCR反应单元，所述PCR反应单元内设置有反转录酶和PCR原料冻干粉，并且所述PCR反应单元具有PCR反应液出口和裂解后的样本混合液入口；以及活塞单元，所述活塞单元包括注射室和活塞，所述注射室具有第二液体出/入口，所述第二液体出/入口通过第一管路与所述第一液体出/入口相连，所述第二液体出/入口通过第二管路与所述稀释液出口相连，所述第二液体出/入口通过第三管路与所述裂解后的样本混合液入口相连，所述PCR反应液出口通过第四管路与所述稀释液出口相连；所述方法包括：将所述活塞进行第一移动处理，以便使部分稀释液进入所述注射室，所述稀释液设置在所述稀释液容纳单元内；将所述活塞进行第二移动处理，以便使进入注射室的所述稀释液与裂解冻干粉和样本进行第一混合处理，所述裂解冻干粉和所述样本设置在所述样本容纳单元内，所述第一混合处理是在所述样本容纳单元中进行的；将第一混合处理产物进行裂解处理，所述裂解处理是在所述样本容纳单元中进行的；将所述活塞进行第三移动处理，以便使裂解处理产物进入所述注射室；将所述活塞进行第四移动处理，以便使进入注射室的所述裂解处理产物与剩余部分稀释液进行第二混合处理，所述第二混合处理是在所述稀释液容纳单元中进行的；将所述活塞进行第五移动处理，以便使第二混合处理产物进入所述注射室；将所述活塞进行第六移动处理，以便使进入注射室的所述第二混合处理产物与反转录酶和PCR原料冻干粉进行第三混合处理，所述反转录酶和PCR原料冻干粉设置在所述PCR反应单元内，所述第三混合处理是在所述PCR反应单元中进行的；以及将第三混合处理产物进行PCR温度循环扩增处理，所述PCR温度循环扩增处理是在所述PCR反应单元中进行的。根据本专利技术实施例的PCR反应系统通过微流控管路将样本容纳单元、稀释液容纳单元、PCR反应单元以及活塞单元相互连接在一起；同时，各单元又分别为独立设置的单元，以便使各单元在使用前存放不同的反应物，有利于反应物在不使用的情况进行长久保存。例如，样本容纳单元的独立设置有利于样本的单独添加，使样本的添加操作简单化，同时也有利于样本的长久保存。首先，将活塞向外拉动到一定位置，从而使稀释液容纳单元中的部分稀释液流向注射室；之后往复移动活塞，使注射室中的稀释液进入样本容纳单元，同时与样本容纳单元中的裂解冻干粉以及样本混合均匀；之后对样本容纳单元进行加热升温到设定温度，使样本容纳单元中的样本在设定的温度下进行充分裂解；裂解完成后，再次将活塞向外拉动到一定位置，从而使样本容纳单元中已裂解的样本混合液流向注射室；之后往复移动活塞，使注射室中已裂解的样本混合液返回稀释液容纳单元，同时与稀释液容纳单元中剩余的稀释液混合均匀，从而将已裂解的样本混合液进行稀释，将其中的杂质浓度降低；之后，再次将活塞向外拉动到一定位置，从而使稀释液容纳单元中稀释后的样本混合液流向注射室；随后往复移动活塞，使注射室中稀释后的样本混合液进入PCR反应单元，同时与PCR反应单元中的反转录酶以及PCR原料的冻干粉混合均匀；最后对PCR反应单元进行PCR温度加热控制，以便最终完成PCR扩增反应。根据本专利技术实施例的方法实现了真正的全自动化操作，解决了传统PCR实验过程需要在专业实验环境下由专业人士进行操作的难题，减少了人为操作带来的误差，极大地提高了PCR反应的工作效率，大大节约了人力资源成本。根据本专利技术的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述PCR温度循环扩增处理包括：将所述第三混合处理产物进行恒温处理；以及将恒温处理产物进行温度循环处理。根据本专利技术的实施例，所述PCR反应系统进一步包括：样本控制阀，在所述第一管路上设置所述样本控制阀，用于控制所述第一液体出/入口与所述第二液体出/入口的连通状态；稀释控制阀，在所述第二管路上设置所述稀释控制阀，用于控制所述稀释液入口与所述第二液体出/入口的连通状态；第一PCR控制阀，在所述第三管路上设置所述第一PCR控制阀，用于控制所述裂解后的样本混合液入口与所述第二液体出/入口的连通状态；以及第二PCR控制阀，在所述第四管路上设置所述第二PCR控制阀，用于控制所述稀释液出口与所述PCR反应液出口的连通状态；所述方法进一步包括：在所述第一移动处理前，关闭所述样本控制阀、所述第一PCR控制阀以及所述第二PCR控制阀，开启所述稀释控制阀；在所述第一移动处理后以及所述第二移动处理前，关闭所述稀释控制阀，开启所述样本控制阀；在所述第三移动处理后以及所述第四移动处理前，关闭所述样本控制阀，开启所述稀释控制阀；在所述第五移动处理后以及所述第六移动处理前，关闭所述稀释控制阀，开启所述第一PCR控制阀以及所述第二PCR控制阀；在所述恒温处理后以及温度循环处理前，关闭所述第一PCR控制阀以及所述第二PCR控制阀。由此，根据本专利技术实施例的方法在密闭的环境下进行，减少了对系统环境的污染，提高了实验的可信度，且操作更加简便。根据本专利技术的实施例，所述PCR反应系统进一步包括：缓冲单元，所述缓冲单元具有PCR反应液入口和通气口，在所述第四管路上设置所述缓冲单元，所述第二PCR控制阀与所述PCR反应液入口相连，所述稀释液出口与所述通气口相连。由此，根据本专利技术实施例的方法可以解决PCR试剂在高温膨胀时的溢出问题，且所述方法在密闭的环境下进行，减少了对系统环境的污染，提高了实验的可信度，操作更加简便。根据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用PCR反应系统进行PCR反应的方法，其特征在于，/n所述PCR反应系统包括：/n样本容纳单元，所述样本容纳单元内设置有裂解冻干粉和样本，并且所述样本容纳单元具有第一液体出/入口，/n稀释液容纳单元，所述稀释液容纳单元内设置有稀释液，并且所述稀释液容纳单元具有稀释液出口，/nPCR反应单元，所述PCR反应单元内设置有反转录酶和PCR原料冻干粉，并且所述PCR反应单元具有PCR反应液出口和裂解后的样本混合液入口，/n活塞单元，所述活塞单元包括注射室和活塞，所述注射室具有第二液体出/入口，/n所述第二液体出/入口通过第一管路与所述第一液体出/入口相连，/n所述第二液体出/入口通过第二管路与所述稀释液出口相连，/n所述第二液体出/入口通过第三管路与所述裂解后的样本混合液入口相连，/n所述PCR反应液出口通过第四管路与所述稀释液出口相连；/n所述方法包括：/n将所述活塞进行第一移动处理，以便使部分稀释液进入所述注射室，所述稀释液设置在所述稀释液容纳单元内，/n将所述活塞进行第二移动处理，以便使进入注射室的所述稀释液与裂解冻干粉和样本进行第一混合处理，所述裂解冻干粉和所述样本设置在所述样本容纳单元内，所述第一混合处理是在所述样本容纳单元中进行的，/n将第一混合处理产物进行裂解处理，所述裂解处理是在所述样本容纳单元中进行的，/n将所述活塞进行第三移动处理，以便使裂解处理产物进入所述注射室，/n将所述活塞进行第四移动处理，以便使进入注射室的所述裂解处理产物与剩余部分稀释液进行第二混合处理，所述第二混合处理是在所述稀释液容纳单元中进行的，/n将所述活塞进行第五移动处理，以便使第二混合处理产物进入所述注射室，/n将所述活塞进行第六移动处理，以便使进入注射室的所述第二混合处理产物与反转录酶和PCR原料冻干粉进行第三混合处理，所述反转录酶和PCR原料冻干粉设置在所述PCR反应单元内，所述第三混合处理是在所述PCR反应单元中进行的，以及/n将第三混合处理产物进行PCR温度循环扩增处理，所述PCR温度循环扩增处理是在所述PCR反应单元中进行的。/n...

【技术特征摘要】
20190701 CN 20191058525091.一种利用PCR反应系统进行PCR反应的方法，其特征在于，
所述PCR反应系统包括：
样本容纳单元，所述样本容纳单元内设置有裂解冻干粉和样本，并且所述样本容纳单元具有第一液体出/入口，
稀释液容纳单元，所述稀释液容纳单元内设置有稀释液，并且所述稀释液容纳单元具有稀释液出口，
PCR反应单元，所述PCR反应单元内设置有反转录酶和PCR原料冻干粉，并且所述PCR反应单元具有PCR反应液出口和裂解后的样本混合液入口，
活塞单元，所述活塞单元包括注射室和活塞，所述注射室具有第二液体出/入口，
所述第二液体出/入口通过第一管路与所述第一液体出/入口相连，
所述第二液体出/入口通过第二管路与所述稀释液出口相连，
所述第二液体出/入口通过第三管路与所述裂解后的样本混合液入口相连，
所述PCR反应液出口通过第四管路与所述稀释液出口相连；
所述方法包括：
将所述活塞进行第一移动处理，以便使部分稀释液进入所述注射室，所述稀释液设置在所述稀释液容纳单元内，
将所述活塞进行第二移动处理，以便使进入注射室的所述稀释液与裂解冻干粉和样本进行第一混合处理，所述裂解冻干粉和所述样本设置在所述样本容纳单元内，所述第一混合处理是在所述样本容纳单元中进行的，
将第一混合处理产物进行裂解处理，所述裂解处理是在所述样本容纳单元中进行的，
将所述活塞进行第三移动处理，以便使裂解处理产物进入所述注射室，
将所述活塞进行第四移动处理，以便使进入注射室的所述裂解处理产物与剩余部分稀释液进行第二混合处理，所述第二混合处理是在所述稀释液容纳单元中进行的，
将所述活塞进行第五移动处理，以便使第二混合处理产物进入所述注射室，
将所述活塞进行第六移动处理，以便使进入注射室的所述第二混合处理产物与反转录酶和PCR原料冻干粉进行第三混合处理，所述反转录酶和PCR原料冻干粉设置在所述PCR反应单元内，所述第三混合处理是在所述PCR反应单元中进行的，以及
将第三混合处理产物进行PCR温度循环扩增处理，所述PCR温度循环扩增处理是在所述PCR反应单元中进行的。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR温度循环扩增处理包括：
将所述第三混合处理产物进行恒温处理；以及
将恒温处理产物进行温度循环处理。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，
所述PCR反应系统进一步包括：
样本控制阀，在所述第一管路上设置所述样本控制阀，用于控制所述第一液体出/入口与所述第二液体出/入口的连通状态，<...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡军荣，韩巧玲，徐强，崔相民，
申请(专利权)人：申翌生物科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33