本发明专利技术涉及一种卵泡抑素样蛋白1的中和性抗体及其应用，所述抗体为鼠源FSTL1中和性抗体2K6。本发明专利技术还公开了该抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区。本发明专利技术还涉及FSTL1在促进皮肤纤维化疾病中的应用，以及鼠源FSTL1中和性抗体2K6用于治疗、缓解或改善肺纤维化、皮肤纤维化和关节炎疾病或症状中的用途及其制备的药物组合物。研究结果表明上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6能够治疗、缓解或改善肺纤维化、皮肤纤维化和关节炎疾病，并且对比本发明专利技术研发团队早期研发的治疗肺纤维化的抗体22B6，2K6对小鼠肺纤维化的预防和治疗效果要优于抗体22B6，即2K6实验组对肺纤维化关键指标—羟脯氨酸含量和肺纤维化面积比例的预防和治疗缓解率均高于22B6实验组。
【技术实现步骤摘要】
一种卵泡抑素样蛋白1的中和性抗体及其应用
本专利技术涉及卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)促进皮肤纤维化疾病进程的功能，以及作为药物组合物的有效成分的鼠源FSTL1中和性抗体用于治疗、缓解或改善肺纤维化、皮肤纤维化和关节炎疾病或症状中的用途。
技术介绍
器官纤维化的本质是组织遭受损伤后的修复反应，以保护组织器官的相对完整性。器官纤维化可发生在包括肺，皮肤，心，肝，肾等多种部位，有着相似的病理特征，是由多种急慢性病变引起的器官组织内纤维结缔组织增多和实质细胞减少的病理变化，可导致器官结构破坏和功能衰退。器官纤维化主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命，在人体各主要器官疾病的发生和发展过程中均起着重要作用。病理性纤维化的临床影响巨大，但治疗方案极为有限，在很大程度上是支持性而非治疗性，了解导致脏器纤维化发展的细胞和分子途径对于确定潜在的治疗靶点至关重要。肺纤维化是最重要的脏器纤维化，它是许多病因各异的肺间质疾病的终末期临床表现，是以肺泡持续性损伤、成纤维细胞增殖及大量细胞外基质沉积为特征，从而导致肺泡和肺间质出现不同程度的炎症和纤维化，进而导致肺结构破坏和呼吸衰竭的一种疾病。特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)是最常见的弥漫性肺纤维化疾病，临床上表现为进行性呼吸困难伴刺激性干咳，病情常持续进展，至今病因不明、发病机制不清、缺乏有效的治疗手段，中位生存期仅2-3年。肺纤维化成因复杂，转化生长因子(TGF-β)是目前已知最重要的一类促纤维化因子，具有诱导纤维母细胞增殖分化成肌纤维母细胞，促进胶原等细胞外基质的合成等作用，是肺纤维化疾病发生发展的总开关。TGF-β及其下游信号在IPF的发病机制中的关键作用，使之成为一个有吸引力的治疗目标。因此，本领域需要发现更多的可干扰TGF-β信号的分子，为治疗IPF等肺纤维化疾病提供潜在的分子靶点和治疗手段。皮肤纤维化也是一种很常见的器官纤维化，有多种类型和不同的病因，例如外科手术伤口或突发伤口引起的伤口愈合失败，或系统性免疫疾病均可导致局部或大面积皮肤纤维化。轻微局部的皮肤纤维化可能只给患者带来容貌或外形上的困扰，但程度严重的皮肤纤维化则会影响患者的正常生理功能，使患者丧失抵抗外界病原侵袭和伤害的最大屏障，如瘢痕疙瘩，增生性瘢痕以及系统性硬皮病。近些年针对皮肤纤维化的治疗一直局限于外科手术切除，放射治疗或免疫治疗，免疫治疗多使用激素类药物，但激素类药物短期使用复发率较高，长期使用则会给患者带来非常多副作用，包括感染，高血压，高糖血症，骨质疏松，撤药反跳，股骨头无菌坏死，肥胖，精神兴奋，消化性溃疡等等。目前皮肤纤维化药物研究未能取得突破性进展的原因是对不同类型皮肤纤维化的启动因素和病理机制不够了解，无法确切锁定涉及皮肤纤维化病因的关键性细胞因子。目前研究表明TGF-β1是调控皮肤纤维化过程中成纤维细胞活化增生的关键性因子。卵泡抑素样蛋白1(Follistatin-like1，FSTL1)是最早由ShibanumaM等从小鼠成骨细胞中克隆得到一个可被TGF-β1诱导的基因。该基因编码一种可分泌的小分子糖蛋白(38kD)，已有的研究表明FSTL1作为BMP4的抑制因子在肺的发育过程中起重要作用，此外，FSTL1在肺癌和卵巢癌细胞中被认为是一个可能的肿瘤抑制基因，在类风湿关节炎中是一个免疫调节因子，还可通过促进TGF-β信号活化在肺纤维化疾病中起作用，但FSTL1在皮肤纤维化中的作用还未阐明。
技术实现思路
本专利技术首先涉及FSTL1靶点可通过促进TGF-β1/Smad3信号介导的皮肤成纤维细胞的活化，促进皮肤纤维化疾病的进行性发展。在本专利技术的实施例1中给出了FSTL1在皮肤纤维化疾病进展中具有关键促进作用的研发实验，该实验结果显示Fstl1对于皮肤瘢痕形成和皮肤纤维化的发病机制至关重要，并且，Fstl1可被皮肤损伤诱导，并通过促进TGF-β1信号激活参与皮肤纤维化疾病进程，Fstl1是驱动皮肤纤维化疾病进展的关键促纤维化因子。本专利技术还涉及一种鼠源FSTL1中和性抗体2K6，该抗体可以治疗、缓解或改善皮肤纤维化疾病、肺纤维化疾病和关节炎疾病。该抗体包含重链可变区和轻链可变区，其重链可变区包含由序列号2的氨基酸序号26至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸序号52至58的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸序号97至106的氨基酸序列构成的CDR3，所述轻链可变区包含由序列号4的氨基酸序号27至38的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸序号56至58的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸序号95至102的氨基酸序列构成的CDR3。上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6的重链可变结构域(VH)的FR和CDR的序列如下(CDR序列以IMGT规则定义)上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6的轻链可变结构域(VL)的FR和CDR的序列(CDR序列以IMGT规则定义)上述的鼠源FSTL1中和性抗体或其抗原结合片段，其中，包含由序列号2的氨基酸序号1至117的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸序号1至112的氨基酸序列构成的轻链可变区；其抗原结合片段为鼠源FSTL1蛋白氨基酸序号270至279的氨基酸序列：QKGVQTHTEE。上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6选自由下述(a)～(b)组成的组：(a)鼠源FSTL1中和性抗体，其包含由序列号2所示的氨基酸序列构成的重链和由序列号4所示的氨基酸序列构成的轻链；以及(b)鼠源FSTL1中和性抗体，其是通过(a)所述的鼠源FSTL1中和性抗体的翻译后修饰生成的抗体。上述的鼠源FSTL1中和性抗体2K6，其中，所述鼠源FSTL1中和性抗体选自由下述(a)～(b)组成的组：(a)鼠源FSTL1中和性抗体，其包含由序列号2所示的氨基酸序列构成的重链和由序列号4所示的氨基酸序列构成的轻链；以及(b)鼠源FSTL1中和性抗体，其包含由序列号2的氨基酸序号1至117的氨基酸序列构成的重链和由序列号4所示的氨基酸序列构成的轻链。在本专利技术的实施例2、3中分别给出了上述鼠源FSTL1单克隆抗体2K6的特异性和功能性检测，及中和活性检测。本专利技术还涉及一种药物组合物，其由上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6制备得到。本专利技术还涉及上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6在制备治疗或调节组织纤维化和关节炎疾病的药物中的应用，特别是对治疗、缓解或改善肺纤维化疾病、皮肤纤维化疾病和关节炎疾病的药物中的应用，优选针对特发性肺纤维化、瘢痕疙瘩、类风湿性关节炎的应用。在本专利技术的实施例4-10中分别给出了对应的研究实验，结果表明上述鼠源FSTL1中和性抗体2K6能够治疗、缓解或改善肺纤维化、皮肤纤维化和关节炎疾病，并且对比本专利技术研发团队早期研发的治疗肺纤维化的抗体22B6，2K6对小鼠肺纤维化的预防和治疗效果要优于抗体22B6，即本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.FSTL1在促进皮肤纤维化疾病中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.FSTL1在促进皮肤纤维化疾病中的应用。
2.一种通过抑制FSTL1的治疗、缓解或改善皮肤纤维化疾病的单克隆抗体。
3.一种鼠源FSTL1中和性抗体2K6或其抗原结合片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含由序列号2的氨基酸序号26至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸序号52至58的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸序号97至106的氨基酸序列构成的CDR3；所述轻链可变区包含由序列号4的氨基酸序号27至38的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸序号56至58的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸序号95至102的氨基酸序列构成的CDR3。
4.如权利要求3所述的鼠源FSTL1中和性抗体2K6或其抗原结合片段，其中，包含由序列号2的氨基酸序号1至117的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸序号1至112的氨基酸序列构成的轻链可变区。
5.如权利要求3或4所述的鼠源FSTL1中和性抗体2K6或其抗原结合片段，其中，所述鼠源FSTL1抗体选自由下述(a)～(b)组成的组：
(a)鼠源FSTL1...
【专利技术属性】
技术研发人员：宁文，周红刚，李霄鹤，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
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