垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用技术

本发明专利技术提供了垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用，属于医药领域。本发明专利技术的垂枝藓醇提物的制备方法通过无水乙醇对垂枝藓进行提取，得到垂枝藓醇提物。实施例结果表明，本发明专利技术得到的垂枝藓醇提物呈剂量依赖性地抑制肝癌细胞的生长，并且对小鼠脾脏细胞无毒性作用；垂枝藓醇提物通过线粒体途径及死亡受体途径激活caspase信号通路，诱导肝癌细胞凋亡；垂枝藓醇提物还能够显著增加小鼠脾脏指数和免疫细胞的数量，从而提高机体免疫力，能够进一步提高抗肿瘤效果。本发明专利技术制备的垂枝藓醇提物抗肿瘤效果显著，且为纯天然成分，安全无毒，为新型抗肝癌药物的研发奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用。
技术介绍
肝癌是发病率和死亡率高、预后极差的恶性肿瘤之一，主要包括原发性肝癌和继发性肝癌，肝细胞癌(HCC)约占原发性肝癌的90％。恶性肿瘤中肝癌发病率和死亡病例均较高，男性的肝癌发病率位居恶性肿瘤的第三位，死亡率高居恶性肿瘤的第二位；女性肝癌发病率和死亡率分别位居于恶性肿瘤的第七位和第三位。随着科学技术的不断发展，目前在肝癌预防和诊断方面取得了进展。在肝癌早期，化疗、手术切除、肝移植、局部消融等治疗方法可以提高患者的生存率；但5年复发率很高，即使肝癌患者接受了潜在的治疗，复发率也可能高达80％～90％，且80％HCC患者被诊断为晚期肝癌，中位生存期仅6～8个月，缺乏有效的治疗方案。小分子靶向治疗药物索拉非尼和瑞格拉非尼是目前FDA批准的标准治疗晚期肝癌方法，索拉非尼是目前唯一可用于晚期肝癌的标准一线系统治疗药物，但中位生存期仅为12.3个月；瑞格拉非尼是一种二线系统治疗药物，中位生存期仅为10.6个月；尽管索拉非尼和瑞格拉非尼能提高肝癌患者的整体生存率，但时效短，易产生耐药性，预后仍然很差，患者抗肿瘤免疫无能或低下，易复发。晚期肝癌患者对于化疗药物的不敏感、肿瘤细胞易对化疗产生耐受成为亟待解决的问题，因此寻找安全、高效低毒且逆转耐药的新型肝癌治疗或辅助型药物迫在眉睫。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用。本专利技术的垂枝藓醇提物的制备方法得到的醇提物可显著抑制肝癌细胞的生长、诱导肝癌细胞的凋亡和坏死，同时还可以增强机体免疫力，抗肝癌细胞效果显著，且为纯天然成分，安全无毒，为新型抗肝癌药物的研发奠定基础。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供了一种垂枝藓醇提物的制备方法，包括如下步骤：采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，得垂枝藓醇提物；所述垂枝藓的质量与无水乙醇的体积比为1g：(10～20ml)。优选的，所述提取的温度为50～60℃，所述提取的时间为2～3h。本专利技术提供了上述技术方案中所述制备方法得到的垂枝藓醇提物，所述垂枝藓醇提物包括多糖和黄酮，所述多糖的质量百分含量为25％～35％，所述黄酮的质量百分含量为3％～5％。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备抗肝癌细胞H22、BEL-7404和HepG2药物中的应用。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备阻滞肝癌细胞周期于G0/G1期药物中的应用。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备诱导肝癌细胞凋亡和坏死药物中的应用。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备降低肝癌细胞线粒体膜电位药物中的应用。本专利技术还提供了一种垂枝藓醇提物在制备提高机体免疫力药物中的应用。本专利技术提供了一种抗肝癌药物，包括垂枝藓醇提物和辅料。有益效果：本专利技术提供了垂枝藓醇提物及其制备方法和垂枝藓醇提物在制备抗肝癌药物中的应用。本专利技术的垂枝藓醇提物的制备方法通过无水乙醇对垂枝藓进行提取，得到垂枝藓醇提物。实施例结果表明，垂枝藓醇提物呈剂量依赖性地抑制肝癌细胞H22、BEL-7404和HepG2的生长，并且对小鼠脾脏细胞无毒性作用；可通过阻滞H22细胞周期于G0/G1期，从而抑制H22细胞的增殖；另外，垂枝藓醇提物还能够显著诱导肝癌细胞的凋亡和坏死，垂枝藓醇提物可显著降低线粒体膜电位，提高肝癌细胞的活性氧的水平，提高促凋亡蛋白Bax和细胞色素C的蛋白水平，降低抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平，通过线粒体途径及死亡受体途径激活caspase信号通路，诱导肝癌细胞凋亡；垂枝藓醇提物还能够显著增加小鼠脾脏指数和免疫细胞的数量，从而提高机体免疫力，能够进一步提高抗肿瘤效果。垂枝藓醇提物抗肿瘤效果显著，且为纯天然成分，安全无毒，为新型抗肝癌药物的研发奠定基础。附图说明图1为实施例4垂枝藓醇提物对肝癌细胞H22生长的影响图；图2为实施例5垂枝藓醇提物对H22细胞周期的影响图；图3为实施例6垂枝藓醇提物对肝癌细胞凋亡影响图；图4为实施例7垂枝藓醇提物对线粒体膜电位的影响图；图5为实施例7垂枝藓醇提物对H22细胞活性氧水平的影响图；图6为实施例7垂枝藓醇提物对凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及细胞色素c蛋白水平的影响图；图7为实施例7垂枝藓醇提物对H22细胞caspase信号通路相关蛋白(Caspase9、Cleavedcaspase9、Caspase8、Cleavedcaspase8、PARP、CleavedPARP)的影响图；图8为在caspase3抑制剂Z-VAD-CHO预处理后垂枝藓醇提物对H22细胞凋亡的影响图；图9为实施例8垂枝藓醇提物对小鼠体重的影响图；图10为实施例8垂枝藓醇提物对小鼠器官指数(肝脏指数、心脏指数、肾脏指数、肺脏指数、脾脏指数及胸腺指数)的影响图；图11为实施例8垂枝藓醇提物对小鼠脾脏中T细胞、B细胞、NK细胞及活化的CD4+及CD8+T细胞数量的影响图。图12为实施例8垂枝藓醇提物对小鼠脾脏中巨噬细胞、树突状细胞数量及其成熟的影响图。具体实施方式本专利技术提供了一种垂枝藓醇提物的制备方法，包括如下步骤：采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，得垂枝藓醇提物；所述垂枝藓的质量与无水乙醇的体积比为1g：(10～20ml)。本专利技术采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，得垂枝藓醇提物。在本专利技术中，所述垂枝藓优选为垂枝藓粉末，以垂枝藓粉末作为提取的原料可以使垂枝藓中的有效成分更加充分的释放，提高垂枝藓醇提物有效成分的含量，提高垂枝藓醇提物抗肝癌细胞的效果。本专利技术采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，所述垂枝藓的质量与无水乙醇的体积比为1g：(10～20ml)，进一步优选为50～60℃，更进一步优选为60℃。在本专利技术中，所述垂枝藓优选以粉末的形式进行提取，有利于活性物质的溶出。在本专利技术中，所述提取的温度优选为50～65℃，进一步优选为50～60℃，更进一步优选为60℃；所述提取的时间优选为2～3h，进一步优选为2h。提取后，本专利技术优选将提取液进行离心，所述离心的转速优选为6000～8000rpm，进一步优选为8000rpm；所述离心的时间优选为10～20min，进一步优选为15min。离心后，将沉淀继续提取2～4次，将多次提取、离心后的上清液合并。得到合并后的上清液后，本专利技术优选将合并后的上清液进行过滤，得到滤液。本专利技术优选将得到的滤液进行浓缩，得到垂枝藓醇提物。本专利技术通过无水乙醇对垂枝藓进行提取，可有效提取垂枝藓中的活性物质，使得到的垂枝藓醇提物具有显著的抗肝癌细胞的效果，同时，还能够增强机体免疫力，提高抗癌效果，且为纯然天提取物，对机体无毒副作用，安全性能高。进一步的，本专利技术控制提取过程中垂枝藓和提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种垂枝藓醇提物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，得垂枝藓醇提物；所述垂枝藓的质量与无水乙醇的体积比为1g：(10～20ml)。/n

【技术特征摘要】
1.一种垂枝藓醇提物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
采用无水乙醇对垂枝藓进行提取，得垂枝藓醇提物；所述垂枝藓的质量与无水乙醇的体积比为1g：(10～20ml)。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取的温度为50～60℃，所述提取的时间为2～3h。


3.权利要求1～2任一项所述制备方法得到的垂枝藓醇提物，其特征在于，所述垂枝藓醇提物包括多糖和黄酮，所述多糖的质量百分含量为25％～35％，所述黄酮的质量百分含量为3％～5％。


4.一种垂枝藓醇提物在制备抗肝...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金耀，马荣斌，周方方，
申请(专利权)人：新疆前进荣耀投资有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65