用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途，该分子标志物为mtDNA D‑loop区的16189位点，其基因型为T/C，当该位点发生转换变异时，其与线粒体单链DNA的结合力下降，会加重或导致胰岛素抵抗，增加妊娠期糖尿病的患病风险，本发明专利技术将mt.16189位点的多态型或基因型用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，能准确预测妊娠期糖尿病的患病风险，及时进行人工干预，减少妊娠期糖尿病的发生。

【技术实现步骤摘要】
用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途
本专利技术属于生物医药
，特别是涉及一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途。
技术介绍
妊娠期糖尿病对孕产妇、成长中的胎儿和围生儿都构成了严重的威胁，使母体和胎儿发生并发症和合并症的风险大大增加，部分在怀孕之前并没有表现出胰岛素抵抗的妇女随着孕期糖稳态的受压而逐渐发展成妊娠期糖尿病。事实上妊娠期糖尿病与2型糖尿病有共同的病理生理基础，据流行病学研究表明：患有妊娠期糖尿病的妇女将来发展为2型糖尿病的风险更大，目前多数研究认为胰岛素抵抗为妊娠期糖尿病的病理生理基础，贯穿疾病发生和发展的全过程。在过去几年里，人们致力于研究核基因突变对妊娠期糖尿病的作用，主要包括编码葡萄糖激酶(GCK)、胰岛素、胰岛素受体和葡萄糖载体(GLUT2和GLUT4)的基因突变，但迄今为止，这些基因突变真正的病理基础和在妊娠期糖尿病人群中的突变率在很大程度上还是未知的；近年线粒体基因突变被发现于多种疾病，其中就包括糖尿病，线粒体DNA是除核基因之外可以通过母亲传递给后代的遗传物质，多种可以通过母系遗传的疾病的发病机理中都涉及到线粒体，由于线粒体在能量产生和自由基生成中起到关键作用，所以线粒体基因组可能对多种能量代谢相关疾病的产生和发展起到重要影响。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途，使用线粒体mt.16189位点的多态型或基因型作为分子标记，预测妊娠期糖尿病的发病风险，做到提早预防和采取措施，减少妊娠期糖尿病对人体的伤害。本专利技术所采用的技术方案是，用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，该分子标志物为mtDNAD-loop区的16189位点，mt.16189位点为SNP位点，其基因型为T/C。进一步的，对mtDNAD-loop区进行PCR扩增时，30μLPCR扩增体系如下：10*ExTaqbuffer3μL、dNTP2μL、PrimerF1μL、PrimerR1μL、ExTaq0.2μL、DNA2μL和H2O20.8μL；PCR扩增过程如下：96℃预热5min，然后按96℃30s、60℃30s、72℃45s，循环30次，72℃延长5min，4℃保存。进一步的，PCR扩增使用的引物如SEQIDNo.1至SEQIDNo.2所示。进一步的，使用如下任一方法检测mt.16189位点的多态型或基因型：DNA测序、限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、变性高效液相色谱、SNP芯片或荧光定量PCR技术。进一步的，使用金标准DNA一代测序法检测PCR扩增体系中mt.16189位点的多态型，测序反应体系如下：DNA1μL、H2O4μL、BigDye4μL和引物1μL，测序PCR循环条件：96℃1min，然后96℃10s、50℃5s、60℃4min，循环25次。进一步的，所述测序过程中使用的测序引物如SEQIDNo.3至SEQIDNo.6所示。用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，检测分子标志物的物质在制备预测妊娠期糖尿病患病风险的产品中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术使用与妊娠期糖尿病相关的mt.16189位点的多态型或基因型作为预测妊娠期糖尿病的分子标志物，对妊娠期糖尿病的早期检测和预防具有重要的指导意义，适于推广，可在备孕期或孕早期做好及时调整或人工干预，避免妊娠期糖尿病对人体的损害。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1线粒体基因D-loop区PCR扩增产物的电泳图。图2是mt.16189位点变异和位点正常的对照图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。16189位点是线粒体基因组非编码区D-loop环上的SNP位点，如图2所示正常16189位点的基因型为T，其发生转换变异后变为C，由于16189位点变异后，线粒体单链DNA结合蛋白与mt.16189C的结合力低于与mt.16189T的结合力，使线粒体表达障碍，会导致或加重胰岛素抵抗，增加妊娠期糖尿病的发病风险，本专利技术将位点16189的多态型或基因型用作妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，并用其制备预测妊娠期糖尿病患病风险的产品，以便及时获知受检者的患病情况，及早进行饮食调整等人工干预。对mt.16189位点进行PCR扩增，扩增引物序列如表1所示，30μLPCR扩增体系如下：10*ExTaqbuffer3μL、dNTP2μL、PrimerF1μL、PrimerR1μL、ExTaq0.2μL、DNA2μL和H2O20.8μL，PCR扩增过程如下：96℃预热5min，然后按96℃30s、60℃30s、72℃45s，循环30次，72℃延长5min，4℃保存。表1PCR扩增引物和测序引物使用DNA测序、限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、变性高效液相色谱、SNP芯片或荧光定量PCR技术，检测PCR扩增体系中mt.16189位点的多态型或基因型；使用金标准DNA一代测序法进行mt.16189位点的多态型或基因型检测时，测序反应体系如下：DNA1μL、H2O4μL、BigDye4μL和测序引物1μL，测序PCR循环条件：96℃1min，然后96℃10s、50℃5s、60℃4min，循环25次，测序引物见表1，本专利技术使用两组测序引物对扩增体系进行双重测序，能够提高检测的准确度，进而提高患病风险预测的准确度。本专利技术将mt.16189位点的多态型或基因型作为妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，对妊娠期糖尿病患病风险进行预测，以便及时进行人工干预，减少妊娠期糖尿病对大人和胎儿的损伤，该预测结果仅可用做妊娠期糖尿病检测的中间结果，需要与妊娠期糖尿病的其他指标的检测结果相结合，才能获得患者的患病情况。实施例1按照以下步骤确定妊娠期糖尿病与mt.16189位点多态型的联系：步骤1，选择24～28周单胎妊娠孕妇共424例，其中204位妊娠期糖尿病孕妇(平均年龄32.09±3.51岁)组成病例组，220位正常孕妇(平均年龄31.54±4.57岁)组成对照组，病例组与对照组的年龄孕周均无显著差异，妊娠期糖尿病的诊断标准如下：①空腹血糖≥5.1mmol/L；②OGTT-1h≥10.0mmol/L；③OGTT-2h≥8.5mmol/L，病例组与对照组的一般临床资料结果见表2，病例组的空腹血糖、OGTT-1h血糖、OGTT-2h血糖、糖化血红蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，其特征在于，该分子标志物为mtDNAD-loop区的16189位点，mt.16189位点为SNP位点，其基因型为T/C。/n

【技术特征摘要】
1.用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，其特征在于，该分子标志物为mtDNAD-loop区的16189位点，mt.16189位点为SNP位点，其基因型为T/C。


2.根据权利要求1所述的用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，其特征在于，对mtDNAD-loop区进行PCR扩增时，30μLPCR扩增体系如下：10*ExTaqbuffer3μL、dNTP2μL、PrimerF1μL、PrimerR1μL、ExTaq0.2μL、DNA2μL和H2O20.8μL；
PCR扩增过程如下：96℃预热5min，然后按96℃30s、60℃30s、72℃45s，循环30次，72℃延长5min，4℃保存。


3.根据权利要求2所述的用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，其特征在于，PCR扩增使用的引物如SEQIDNo.1至SEQIDNo.2所示。


4.根据权利要求1所述的用于妊娠期糖尿病患病...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小勤，刘爱玲，徐健，展洁，
申请(专利权)人：潍坊市妇幼保健院潍坊市妇幼保健计划生育服务中心，
类型：发明
国别省市：山东;37