组合物及其在病毒抑制剂或灭活剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，所述组合物低温处理水痘‑带状疱疹病毒及其感染后的细胞，可以使病毒被灭活的同时，即使按照相关管理办法进行低温运输，依然能够不影响核糖体从mRNA上脱落或解离，从而可以从翻译组层面来开展药物或疫苗研发以及相关研究。

【技术实现步骤摘要】
组合物及其在病毒抑制剂或灭活剂中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物及其在病毒或病毒感染细胞的灭活剂或抑制剂中的应用。
技术介绍
水痘-带状疱疹病毒，属于人疱疹病毒属，病毒颗粒150～200nm，病毒糖蛋白E(gE)是宿主免疫系统识别的最主要糖蛋白，其初次感染引发水痘，随后病毒潜伏在神经节中，当机体免疫力下降时，再次激活引起带状疱疹。目前已针对水痘-带状疱疹病毒的基因组完成测序并进行解析，其基因组约为125Kb的线性双链DNA，至少可编码71种蛋白质(JeffreyI.Cohen,2010)。也有众多研究是从水痘-带状疱疹病毒感染不同细胞后开展的转录组层面的研究(MariaANagel.,2011；Soo-JinOh,etal.,2019)，为治疗该病毒引起的疾病药物或疫苗研发等奠定了扎实的研究基础。不过我们发现尚无研究是从水痘-带状疱疹病毒翻译组层面来开展研究的。本专利技术在开展水痘-带状疱疹病毒翻译组层面的研究时，发现目前已有的高温灭活方式或者实验室内部已有的裂解方法等，使得该病毒感染细胞在实验室之间按照相关管理条例进行运输后，无法继续开展翻译层面的研究。因而需要找到一种可以稳定的抑制或灭活该病毒、同时不影响核糖体脱落，能够在低温环境下将从病毒或病毒感染细胞从BSL2实验室A运输到BSL2实验室B中，仍然能够继续开展下游翻译组研究。本专利技术也可为其他类似病毒开展翻译组层面的研究提供启示。
技术实现思路
本专利技术提供了一种病毒的灭活方法，可以稳定地抑制或灭活病毒活性，能够便于病毒及其感染后细胞在远距离的实验室之间基于相关管理办法进行低温运输后，不影响核糖体从mRNA上脱落或解离，进而能够使得从病毒翻译组层面来开展药物或疫苗研发以及相关研究成为可能。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为专利技术了一种用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物。用这种组合物处理过的水痘-带状疱疹病毒及其感染后的细胞，可以稳定地抑制或灭活水痘-带状疱疹病毒活性，同时不会让核糖体从mRNA上脱落或解离，从而能够便于水痘-带状疱疹病毒及其感染后的细胞在远距离的实验室之间基于相关管理办法进行低温运输后，仍然能够满足下游翻译组及其相关实验开展的要求。本专利技术的第一方面涉及一种用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其组分如下：羟乙基哌秦乙硫磺酸、MgCl2、KCl、乙基苯基聚乙二醇NP-40、蛋白酶抑制剂、放线菌酮和TritonX-100。优选的，所述的组合物为包括如下溶液的混合液：溶液A：含有羟乙基哌秦乙硫磺酸、MgCl2、KCl的溶液，溶液B：含有蛋白抑制剂的乙基苯基聚乙二醇NP-40溶液，溶液C：含有放线菌酮的溶液，溶液D：TritonX-100溶液。优选的，所述的溶液A是由0.8～1.2M的羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、1.2～1.8M的MgCl2溶液和1.5～2.5M的KCl溶液以1:0.8～1.2:0.8～1.2的比例混合而成；进一步优选的，所述的溶液A是由1.0M的羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、1.5M的MgCl2溶液和2.0M的KCl溶液以1:1:1的比例混合而成。优选的，所述的溶液B是由1％NP-40和1×蛋白酶抑制剂以1000:0.8～1000:1.2的比例混匀制成的；进一步优选的，所述的溶液B是由1％NP-40和1×蛋白酶抑制剂以1000:1的比例混匀制成的。优选的，所述的溶液C中放线菌酮的浓度为8～12mg/ml；进一步优选的，所述的溶液C中放线菌酮的浓度为10mg/ml。优选的，所述的溶液D为0.8～1.2％的TritonX-100；进一步优选的，所述的溶液D为1％的TritonX-100在本专利技术的具体实施方式中，所述的溶液A采用如下方式制备得到：将羟乙基哌秦乙硫磺酸(Hepes)加入H2O中获得0.8～1.2MHepes溶液；将MgCl2加入到H2O中获得1.2～1.8M的MgCl2溶液；将KCl加入到H2O中获得1.5～2.5M的KCl溶液；将上述羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、MgCl2溶液和KCl溶液以1:0.8～1.2:0.8～1.2的比例混合而成。进一步优选的，将11.9155g羟乙基哌秦乙硫磺酸(Hepes)加入H2O中获得1MHepes溶液；将7.1408gMgCl2加入50mlH2O中获得1.5MMgCl2溶液；将7.456gKCl加入50mlH2O中获得2.0MKCl溶液；将上述羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、MgCl2溶液和KCl溶液以1:1:1的比例混合。优选的，将上述羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、MgCl2溶液和KCl溶液混合后，调节pH至7.0～7.8，然后灭菌，获得溶液A。进一步优选的，调节pH至7.4，灭菌1h，获得溶液A。优选的，本专利技术所述的组合物将所述的溶液A、溶液B、溶液C、溶液D以1:8～12:16～24:35～45的比例混合成能够用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物。进一步优选的，本专利技术所述的组合物采用如下方法制备得到：将溶液C和溶液B加入到灭菌后的溶液A中获得AB缓冲液，将溶液D加入到上述AB缓冲液中混匀获得。在本专利技术的具体实施方式中，将1ml的溶液C和10ml的溶液B加入到灭菌后的20ml的溶液A中获得AB缓冲液，放置4℃保存，使用前将40ml的溶液D加入到上述AB缓冲液中混匀获得。本专利技术的第二方面涉及一种病毒或病毒感染细胞的灭活方法，该方法是用上述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物处理病毒感染后细胞；优选的，该方法是用上述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物处理水痘-带状疱疹病毒或水痘-带状疱疹病毒感染后的细胞。优选的，上述方法还包括吹打处理后的细胞、裂解以及放入液氮速冻，以用于向另一个实验室的低温运输。优选的，低温运输后，可以进一步在冰上操作、用核酸酶处理、构建Ribo-Seq测序文库、高通量测序平台验证核糖体有无脱落，并进行进一步的关于翻译组层面的研究。在本专利技术的具体实施方式中，本专利技术所述的一种病毒或病毒感染细胞的灭活方法，包括：收集病毒或病毒感染细胞(例如约3×107个病毒感染细胞)加入3ml的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物(即抑制剂或灭活剂)中，用移液吸头轻轻吹打，冰上裂解30min，然后放置于液氮中急冻，-80℃干冰低温运输。进一步的，所述的灭活方法还包括：运输后，将样本置于冰上操作、经核酸酶处理后、构建Ribo-Seq测序文库，然后通过二代高通量测序平台进行测序。优选的，本专利技术所述的全部试剂(除酶类)需要严格保证不含RNase。进一步优选的，所有实验均在BSL2实验室中开展。本专利技术的第三方面，涉及上述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物在病毒的抑制剂或灭活剂中的应用；优选的，所述的病毒为水痘病毒-带状疱疹病毒；优选的，用制成病毒的抑制剂或灭活剂处理后的病毒或病毒感染细胞，在病毒活性被抑制或灭活的同时，即使经过远距离的实验室之间基于相关管理办法进行低本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其特征在于，所述的组合物包括如下组分：羟乙基哌秦乙硫磺酸、MgCl

【技术特征摘要】
1.一种用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其特征在于，所述的组合物包括如下组分：羟乙基哌秦乙硫磺酸、MgCl2、KCl、乙基苯基聚乙二醇NP-40、蛋白酶抑制剂、放线菌酮和TritonX-100。


2.权利要求1所述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其特征在于，所述的组合物为包括如下溶液的混合液：
溶液A：含有羟乙基哌秦乙硫磺酸、MgCl2、KCl的溶液，
溶液B：含有蛋白抑制剂的乙基苯基聚乙二醇NP-40溶液，
溶液C：含有放线菌酮的溶液，
溶液D：TritonX-100溶液。


3.权利要求2所述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其特征在于，所述的溶液A是由0.8～1.2M的羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、1.2～1.8M的MgCl2溶液和1.5～2.5M的KCl溶液以1:0.8～1.2:0.8～1.2的比例混合而成；优选的，所述的溶液A是由1.0M的羟乙基哌秦乙硫磺酸溶液、1.5M的MgCl2溶液和2.0M的KCl溶液以1:1:1的比例混合而成。


4.权利要求2所述的用于处理病毒或病毒感染细胞的组合物，其特征在于，所述的溶液B是由1％NP-40和1×蛋白酶抑制剂以1000:0.8～1000:1.2的比例混匀制成的；优选的，所述的溶液B是由1％NP-40和1×蛋白酶抑制剂以1000:1的比...

【专利技术属性】
技术研发人员：董鸣，吴婷婷，
申请(专利权)人：南京启医科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32