一种用于降血糖的SOD脂质体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于降血糖的SOD脂质体及其制备方法与应用。本发明专利技术通过对SOD、卵磷脂和胆固醇进行制备得到的SOD脂质体，其平均粒径范围为100~400 nm，表面电荷范围在‑10~‑50mV。糖尿病患者每日服用本发明专利技术之药物后，可对肠道氧化应激有明显的抗氧化作用，有效降低血糖，降低糖化白蛋白、胰岛素抵抗指数、胰高血糖素，提高AMPK并改善血脂水平，有效修复结肠上皮细胞，减少炎性细胞浸润，修复肠道损伤，明显减少内毒素的全身性流入并降低炎症因子水平。

【技术实现步骤摘要】
一种用于降血糖的SOD脂质体及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种用于降血糖的SOD脂质体及其制备方法与应用，属于生物

技术介绍
氧化应激在糖尿病及其并发症发生和发展过程中发挥着重要作用，抗氧化剂能稳定或清除自由基，保护细胞和器官组织，使机体免受自由基诱导损伤。根据来源不同，抗氧化剂可分为天然抗氧化剂和合成抗氧化剂。人体内的抗氧化系统又分为酶途径和非酶途径。常见的酶途径抗氧化物质有超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GPx），过氧化氢酶（CAT）等，非酶途径抗氧化物质包括维生素A、C、E，谷胱甘肽，α-硫辛酸，类胡萝卜素，皂苷类，类黄酮，褪黑色素等抗氧化物质以及植酸、维生素B族等辅助因子。超氧化物歧化酶（SOD）是重要的抗氧化剂，它的分布极为广泛，迄今为止已从细菌、真菌、藻类、鱼类、昆虫、植物和哺乳类动物等各种生物体内分离得到。已经证明，SOD的存在可保护多种类型的细胞免受自由基的损害、衰老。SOD还可以保护细胞免受DNA损伤、脂质过氧化、电离辐射损伤、蛋白质变性和许多其他形式的渐进性细胞降解。目前，国内已开发和正在开发的SOD资源有牛血、猪血、猪肝。不少植物中SOD含量亦很丰富，如刺梨、麦叶、辣椒、种子、果实、蔬菜等。机体处于正常情况下，组织细胞中的自由基清除系统可以及时清除自由基，使自由基的生成和降解处于动态平衡。在机体处于病理情况下，由于活性氧（ROS）生成增多或者机体抗氧化能力降低，便会形成氧化应激。大量的研究表明，糖尿病会导致氧化应激增加，产生过量超氧阴离子自由基（），使机体的抗氧化防御机制受损。SOD是细胞内专一清除氧自由基的酶，它能促使变为H2O2和O2，使细胞免受损伤。SOD口服一直成为学术界关注的热点。口服SOD主要存在以下几个难点：胃液酸破坏、胃蛋白酶水解、肠粘膜吸收困难等。为了解决这个问题，本申请采用与生物膜双脂层结构十分相似的物质-脂质体将SOD包埋制成脂质体SOD（L-SOD）；而且L-SOD具有类脂质结构、对皮肤黏膜具有高度亲和力，因此能很好地附着在表皮和生物膜（包括细胞膜）上。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于降血糖的SOD脂质体及其制备方法与应用，解决了口服SOD具有胃液酸破坏、胃蛋白酶水解、肠粘膜吸收困难等问题。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种用于降血糖的SOD脂质体，所述的SOD脂质体原料组成为：Cu/ZnSOD、大豆卵磷脂和胆固醇，三者质量之比为1:4:1。所述SOD脂质体平均粒径范围为100~400nm；表面电荷呈负性，范围在-10~-50mV。SOD脂质体的制备方法：按比例称取大豆卵磷脂和胆固醇于离心管中避光保存；称取Cu/ZnSOD于离心管中，加入0.2M、pH7.4的PB缓冲液轻轻摇匀，获得0.005g/mlSOD溶液；将SOD溶液的3倍体积乙醚和SOD溶液倒入装有胆固醇和卵磷脂的离心管内，轻轻振荡摇匀后放入超声波振荡器中超声5分钟，接着将超声后的溶液倒入茄形瓶中，40℃避光旋转蒸发10分钟、充分去除乙醚；将所得的乳浊液，10000g·min-1，离心5min，弃去下层未形成脂质体的脂质残块，取上清即得到SOD脂质体。制作好的SOD脂质体放入4℃冰箱保存。所述的SOD脂质体在制备降血糖药物中的应用。作为辅助降血糖的药品时，口服使用剂量为4700U∙kg-1/天，连续28~30天。本专利技术的有益效果如下：本专利技术基于肠胃道氧化应激与高血糖的相关性制备SOD脂质体用于降血糖。SOD脂质体的制备方法中逆向蒸发过程使用极易挥发乙醚作为有机溶剂，在40℃蒸发时能充分去除，安全性高。本专利技术得到的SOD脂质体具有较高活性，粒径分布均匀，稳定性好，有良好的消化耐受性。涉及的SOD脂质体可直接作用于肠道组织、清除肠道组织自由基，修复氧化应激造成的肠道损伤，降低血糖。附图说明图1SOD脂质体的粒径分布图。图2SOD脂质体的Zeta电位分布图。图3药物干预28天后大鼠结肠丙二醛MDA含量（a）、氧化型谷胱甘肽GSSG/还原型谷胱甘肽GSH的比值（b）。本文数据分析采用LSD多重比较法。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图4不同SOD样品在大鼠体肠循环灌流120min过程中酶活变化图。图5药物干预28天过程中大鼠血糖变化图。图6药物干预28天过程中各组大鼠体重变化图。图7药物干预28天后大鼠空腹血浆糖化白蛋白（GA）浓度图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图8药物干预28天后大鼠空腹血浆胰高血糖素（GC）浓度图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图9药物干预28天后大鼠胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图10药物干预28天后大鼠空腹血浆AMPK浓度图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图11药物干预28天后大鼠空腹血浆SOD酶活力水平图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图12药物干预28天后大鼠空腹血浆MDA含量图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图13药物干预28天后大鼠结肠密度图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。图14药物干预28天后大鼠结肠HE染色图。a，正常组；b，模型组；c，SOD组；d，L-SOD组；e，SOD水解组；f，阳性对照组。图15药物干预28天后大鼠结肠occudin(A)、ZO-1(B)蛋白免疫组化分析图。a，正常组；b，模型组；c，SOD组；d，L-SOD组；e，SOD水解组；f，阳性对照组；棕色信号代表有蛋白的表达。图16药物干预28天后大鼠空腹血浆脂多糖浓度图。本文数据分析采用两独立样本均数比较t检验。图中：与模型组相比*表示p<0.05，**表示p<0.01。具体实施方式实施例1：脂质体的制备准确称取0.20g卵磷脂和0.05g胆固醇于离心管中避光保存。称取0.05gCu/ZnSOD于离心管中，加入10mL0.2M、pH为7.4的PB缓冲液，并轻轻摇匀制成SOD溶液。将30mL乙醚和SOD溶液倒入装有胆固醇和卵磷脂的离心管内，轻轻振荡摇匀后，放入超声波振荡器中超声处理5分钟，接着将超声后的溶液倒入100mL茄形瓶中，40℃避光旋转蒸发10分钟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于降血糖的SOD脂质体，其特征在于：所述脂质体包含Cu/Zn SOD、大豆卵磷脂和胆固醇，三者质量比为1:4:1。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于降血糖的SOD脂质体，其特征在于：所述脂质体包含Cu/ZnSOD、大豆卵磷脂和胆固醇，三者质量比为1:4:1。


2.根据权利要求1所述的一种用于降血糖的SOD脂质体，其特征在于：所述SOD脂质体，平均粒径范围为100~400nm，表面电荷范围在-10~-50mV。


3.一种如权利要求1所述的SOD脂质体的制备方法，其特征在于：按比例称取大豆卵磷脂和胆固醇于离心管中避光保存；称取Cu/ZnSOD于离心管中，加入0.2M、pH7.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘树滔，刘航琪，郭静科，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建;35