一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，包括设有包被板以及样品垫的检测卡，包被板的金标区包被有胶体金标记抗人IgA，检测区包被有新型冠状病毒重组抗原，质控区包被羊抗鼠IgG。本发明专利技术试剂盒可以快速检测新型冠状病毒IgA抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒
本专利技术属于免疫分析检测
，尤其是涉及一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒。
技术介绍
冠状病毒属于单股正链RNA病毒，既往已知感染人的冠状病毒有6种，即HCoV-229E、HCoV-OC43、SARSr-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和MERSr-CoV。新型冠状病毒(2019-nCoV)属于第7种。新型冠状病毒肺炎是一种急性感染性肺炎，其病原体是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，即2019新型冠状病毒。经呼吸道飞沫和密切接触传播是主要的传播途径，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况中存在经气溶胶传播的可能。患者初始症状多为发热，乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重表现。多数患者预后良好，部分严重病例可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。目前已知新型冠状病毒SARS-COV-2为一种粘膜靶向的病毒，其可以刺激产生大量分泌型IgA，进而激活粘膜免疫应答。但目前仍无SARS-COV-2特异性IgA抗体检测试剂盒，提出一种快速检测新型冠状病毒IgA抗体的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提出一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，可以快速检测新型冠状病毒IgA抗体。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，设有包被板以及样品垫的检测卡，包被板的金标区包被有胶体金标记抗人IgA，检测区包被有新型冠状病毒重组抗原，质控区包被羊抗鼠IgG。优选的，新型冠状病毒重组抗原为S-RBD蛋白。优选的，所述样品垫上涂有样本处理液，所述样本处理液为含BSA的质量浓度为0.5-1.5％、酪蛋白的质量浓度为0.5-1％，蔗糖的质量浓度为0.3-1.2％、海藻糖的质量浓度为0.1-1.2％、Procline的体积浓度为0.05-0.3％、tween-20体积浓度为0.05-0.5％的pH为7.0-7.6的tris缓冲液；且样品垫的制备方法如下，将样品垫处理液以45-85微升每平方厘米的量，喷涂或浸泡玻纤膜或聚酯膜，37-45℃条件下，烘干8-16小时。优选的，胶体金标记抗人IgA的制备包括如下步骤，向均一的胶体金溶液中添加K2CO3，调节pH至6.0-7.5，向调好pH的溶液中添加抗人IgA，使其蛋白含量为15-60μg/mL，偶联0.5-4小时，向其中添加终止液，终止偶联反应，终止液的终浓度(质量体积比)为1-1.5％；终止反应后的0.5-2小时后离心处理，离心参数为12000-18000RPM，离心处理15-30min，弃上清，沉淀用复溶液复溶，2-8℃保存备用。优选的，终止液为牛血清蛋白、脱脂乳粉或甘氨酸中的一种或两种所配制的水溶液，当终止液为其中的一种时，需配制成为质量体积比为5％-10％的溶液，当为其中的两种时，牛血清蛋白与脱脂乳粉或甘氨酸的质量体积比为1：1-4：1，固体质量含量和液体体积比为10％；所述复溶液为0.01-0.05MTris或PB缓冲液，pH为7.4-8.2，向其中加入NaCl质量体积比为0.5-1％,海藻糖质量体积比为0.2-1％，PEG20000的质量体积比为0.1％-3％；牛血清蛋白质量体积比为0.5-3％，TritonX-405体积浓度0.5-1％。优选的，所述胶体金溶液通过如下方法制备，将氯金酸配制成质量体积比为1％-10％的溶液，再向煮沸的纯化水中添加上述溶液至含氯金酸质量体积比为万分之一到万分之四，继续煮沸2-5分钟，将0.1-0.2M的柠檬酸钠，按每100mL氯金酸溶液中添加500-800微升的量，继续搅拌加热10-20分钟，制备出粒径均一的胶体金溶液。优选的，将胶体金标记抗人IgA铺匀在标记垫上，37℃条件下，烘干12小时，得到标记垫；分别将新型冠状病毒重组抗原以及羊抗鼠IgG配制成蛋白含量0.5-2.0mg/mL的溶液，使用划膜仪分别包被在T线和C线的位置37℃干燥后得到包被的硝酸纤维素膜，包被参数为0.5-1.5μL/cm；将吸水纸、硝酸纤维素膜、标记垫、滤血膜、样品垫依次搭接的粘贴在PVC板上。优选的，所述滤血膜经过抗RBC抗体处理后使用，处理浓度在0.1mg/mL，处理量为60微升每平方厘米，37℃条件下，烘干12小时。可起到拦截血液样本中的红细胞的作用。优选的，包括样本稀释液，0.05MPB缓冲液，pH为8.0，向其中加入NaCl质量体积比为0.9％-2％，tween20体积比为0.05％-0.3％。本专利技术还提供如上所述的试剂盒在制备新型冠状病毒IgA检测试剂中的应用。结合垫是标记结合物附着的组件，用于处理结合垫的处理液为pH为8.0-8.5，0.01-0.05Mtris缓冲液，0.1-0.3％tween-20。用于稀释包被用的抗原抗体原料的包被缓冲液为pH为7.4-8.5的0.01-0.05M缓冲液，0.1-3％蔗糖，0.1-1％酪蛋白。本专利技术的原理是：本试剂盒采用免疫层析法，将需要检测的血液样本加入到检测卡上，样本中的新型冠状病毒IgA抗体、非新型冠状病毒IgA抗体，均与胶体金标记的抗人IgA结合，形成新型冠状病毒IgA抗体-抗人IgA抗体复合物，非新型冠状病毒IgA抗体-抗人IgA抗体复合物，免疫复合物在毛细作用下沿检测卡向前移动，新型冠状病毒IgA抗体-抗人IgA抗体复合物会被包被在膜上检测区的新型冠状病毒重组抗原捕获，形成紫红色(或粉红色)的条带，非新型冠状病毒IgA抗体-抗人IgA抗体复合物继续向前移动，与质控区羊抗鼠结合，形成紫红色(或粉红色)的条带，显示新型冠状病毒IgA抗体阳性。相对于现有技术，本专利技术所述的一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，具有以下特点：作为单一检测指标时，具有更高的灵敏度及特异性。附图说明图1为检测条情况分析。具体实施方式除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下面结合实施例来详细说明本专利技术。一种新型冠状病毒IgA胶体金检测试剂盒，包括设有包被板以及样品垫的检测卡，包被板的金标区包被有胶体金标记抗人IgA，检测区包被有新型冠状病毒重组抗原，质控区包被羊抗鼠IgG。新型冠状病毒重组抗原为S-RBD蛋白。所述样品垫上涂有样本处理液，所述样本处理液为含BSA的质量浓度为1％、酪蛋白的质量浓度为0.5％、蔗糖的质量浓度为0.5％、海藻糖的质量浓度为1.0％、Proclin300的体积浓度为0.05％、tween-20体积浓度为0.08％的pH为7.4的Tris缓冲液；且样品垫的制备方法如下，将样品垫处理液以60微升每平方厘米的量，喷涂或浸泡玻纤膜或聚酯膜，37℃条件下，烘干12小时。胶体金标记抗人IgA的制备包括如下步骤，向均一的胶体金溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：包括设有包被板以及样品垫的检测卡，包被板的金标区包被有胶体金标记抗人IgA，检测区包被有新型冠状病毒重组抗原，质控区包被羊抗鼠IgG。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：包括设有包被板以及样品垫的检测卡，包被板的金标区包被有胶体金标记抗人IgA，检测区包被有新型冠状病毒重组抗原，质控区包被羊抗鼠IgG。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：新型冠状病毒重组抗原为S-RBD蛋白。


3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：所述样品垫上涂有样本处理液，所述样本处理液为含BSA的质量浓度为0.5-1.5％、酪蛋白的质量浓度为0.5-1％，蔗糖的质量浓度为0.3-1.2％、海藻糖的质量浓度为0.1-1.2％、Procline的体积浓度为0.05-0.3％、tween-20体积浓度为0.05-0.5％的pH为7.0-7.6的tris缓冲液；且样品垫的制备方法如下，将样品垫处理液以45-85微升每平方厘米的量，喷涂或浸泡玻纤膜或聚酯膜，37-45℃条件下，烘干8-16小时。


4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：胶体金标记抗人IgA的制备包括如下步骤，向均一的胶体金溶液中添加K2CO3，调节pH至6.0-7.5，向调好pH的溶液中添加抗人IgA，使其蛋白含量为15-60μg/mL，偶联0.5-4小时，向其中添加终止液，终止偶联反应，终止液的终浓度(质量体积比)为1-1.5％；终止反应后的0.5-2小时后离心处理，离心参数为12000-18000RPM，离心处理15-30min，弃上清，沉淀用复溶液复溶，2-8℃保存备用。


5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于：终止液为牛血清蛋白、脱脂乳粉或甘氨酸中的一种或两种所配制的水溶液，当终止液为其中的一种时，需配制成为质量体积比为5％-10％的溶液，当为其中的两种时，牛血清蛋白与脱脂乳粉或甘氨酸的质量体积比为1：1-4：1，固体质量含量和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘朝阳，栾大伟，刘萍，李雅慧，张天一，
申请(专利权)人：博奥赛斯天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12