抗人SIRPa v1抗体的用途和生产抗SIRPa v1抗体的方法技术

本发明专利技术属于免疫治疗领域。本发明专利技术提供了可用于治疗应用和诊断应用的靶向人SIRPa的抗体，所述抗体增强了抗原向T细胞的交叉呈递。本发明专利技术还提供了针对SIRPa的特定同工型并且能够破坏SIRPa的这些同工型与人CD47之间相互作用的抗体，该抗体用于治疗或预防疾病或诊断应用，以及生产和/或筛选抗人SIRPa抗体的方法，所述抗人SIRPa抗体以不同的亲和力与人SIRP成员的各种同工型结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗人SIRPav1抗体的用途和生产抗SIRPav1抗体的方法
本专利技术属于免疫治疗领域。本专利技术提供了可用于治疗应用和诊断应用的靶向人SIRPa的抗体，所述抗体增强了抗原向T细胞的交叉呈递。本专利技术还提供了针对SIRPa的特定同工型(isoform)且能够破坏SIRPa的这些同工型与人CD47之间相互作用的抗体，该抗体用于治疗或预防疾病或诊断应用。本专利技术还涉及生产和/或筛选抗人SIRPa抗体的方法，该抗人SIRPa抗体以不同亲和力与人SIRP成员的各种同工型结合。
技术介绍
适应性免疫的靶向免疫检查点已显示出抗击多种癌症的巨大治疗功效。对髓样细胞(例如巨噬细胞、树突状细胞(DC)、髓源性抑制细胞(MDSC，myeloid-derivedsuppressorcell)以及多形核白细胞或嗜中性粒细胞(PMN))的免疫检查点的研究仍不足，而这些细胞代表了许多实体瘤中丰度最高的免疫细胞类型且通常与不良结果有关。信号调节蛋白α(SIRPa，也称为SIRP-α、SIRPa、CD172a或SHPS-1)在单核细胞、组织巨噬细胞的大部分亚群(subpopulation)、粒细胞、淋巴组织中DC的子集(subset)和某些骨髓祖细胞中表达，在神经元上的表达水平不同，并且在大脑的富含突触的区域(例如小脑的颗粒层和海马)中显著表达。SIRPa是封闭的相关SIRP蛋白的SIRP配对受体家族的原型成员(prototypicmember)，SIRP蛋白包括SIRPa、SIRPg(也称为SIRP-γ、SIRPγ、CD172g或SIRPβ-2)和SIRPb(也称为SIRP-β、SIRPβ、CD172b)。信号调节蛋白(SIRP)构成细胞表面糖蛋白家族，它们在髓样细胞(包括巨噬细胞、粒细胞、髓样树突状细胞和肥大细胞)和神经元细胞中表达(总结于Barclay,A.N.和Brown,M.H.,NatRevImmunol6,457-64(2006)；也参见WO97/48723)。CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，CD47充当SIRPa的细胞配体并与SIRPa的NH2末端的细胞外末端结合。就SIRPa对巨噬细胞吞噬宿主细胞的抑制作用而言，SIRPa的作用已得到最好的证明。特别地，巨噬细胞上的SIRPa与靶细胞上表达的CD47的结合产生抑制信号，该抑制信号负调控吞噬作用。然而，最近发现也证明了通过SIRPa结合介导的另外的正信号传导作用(Shultz,L.D.等JImmunol154,180-91)。编码SIRPa的基因是多形基因(polymorphicgene)，已知了人类群体中的几种SIRPa变体。最常见的人SIRPa变体是SIRPav1和SIRPav2(登录号分别为NP_542970(P78324)和CAA71403)，SIRPa家族通常分为这两个子集，即SIRPav1同工型家族和SIRPav2同工型家族。SIRPa由髓样细胞表达，SIRPa与遍在受体(ubiquitousreceptor)CD47相互作用，此种相互作用是先天反应的重要免疫检查点，参与调节髓样功能。SIRPa和CD47之间的相互作用提供了抑制宿主细胞吞噬作用的下调信号。由于CD47在某些癌细胞中广泛地过表达，因此CD47充当包含这些细胞的某些肿瘤内的“不要吞噬我(don’teatme)”信号，从而避免了吞噬作用。近年来，已对CD47-SIRPa相互作用在癌细胞清除中的潜在作用进行了深入研究。据显示，肿瘤中CD47受体的丰度与患者的总体生存率呈负相关，并构成了几种癌症类型的不良预后因素。因此，对SIRPa/CD47通路进行了不同的药物开发以增强巨噬细胞的吞噬作用。已提出多种方法来破坏CD47/SIRPa相互作用，以实现生物学结果。这些方法包括使用片段化/截短的SIRPa蛋白和/或CD47蛋白及它们的抗体。即使癌细胞包被有治疗性抗体，这些癌细胞中CD47的过表达也会使它们对巨噬细胞产生抗性。据显示，通过靶向CD47的药剂阻断SIRPa/CD47通路可增强巨噬细胞的抗体依赖性吞噬作用。还描述了这些治疗与耗竭型(depleting)治疗性抗癌抗体(例如曲妥珠单抗(Trastuzumab)(抗Her2)、西妥昔单抗(Cetuximab)(抗EGFR)、利妥昔单抗(Rituximab)(抗Cd20)和阿仑妥珠单抗(Alemtuzumab)(抗CD52))协同作用。尽管如此，最近显示抗CD47药剂显示出涉及CD47生理作用的血液学毒性。例如，这些抗CD47药剂可能引起贫血或血小板减少。此外，CD47还与SIRP家族的其他成员一起参与其他通路。实际上，CD47还与人T细胞表面存在的SIRPg结合，但不与人髓样细胞表面存在的SIRPg结合。SIRPg/CD47相互作用介导细胞-细胞粘附、增强超抗原依赖性T细胞介导的增殖并共刺激T细胞活化(Piccio等，2005)。因此，近年来已开发出能够仅结合一种SIRP且能够破坏CD47与SIRPa的结合的抗人SIRP抗体，以避免不希望的效果(例如抑制T细胞增殖)。不幸的是，由于SIRPa蛋白家族的特性，当患者细胞表达的SIRPa蛋白为SIRPav1或SIRPav2时，现有技术的抗体可能无法有效治疗涉及SIRPa的疾病。一些抗体可能可用于治疗SIRPav1患者，但对治疗SIRPav2患者的治疗功能可能会降低，反之亦然。由于某些癌症的治疗与患者的表型密切相关，因此需要针对每个患者的细胞表达的同工型的抗体。因此，现有技术仍需要以更高的特异性靶向SIRPa的新型改良药剂(特别是抗体)。还需要生产此类特异性抗体的方法、筛选这些抗体的方法以及在接受此类治疗前确定患者是否可能对抗人SIRPa抗体的治疗产生反应的方法。本领域还需要增强抗原呈递细胞(APC)的抗原交叉呈递。APC(特别是树突状细胞)在肿瘤发生、疾病发展、疾病进展以及对治疗的反应中起独特而多样的作用。例如，树突状细胞主动摄取肿瘤相关抗原，对肿瘤相关抗原进行加工并将抗原肽呈递给T细胞，从而诱导并维持肿瘤特异性T细胞应答。树突状细胞(DC)也称为专职性APC。树突状细胞与不同免疫效应细胞的相互作用也可以支持先天性抗肿瘤免疫力，以及还可以支持已知在某些情况下会抑制肿瘤发展的体液反应。另一方面，DC通过特异性的肿瘤来源因子和基质来源因子被募集到肿瘤部位，这可能会损害DC的成熟、分化和/或功能，从而导致抗肿瘤免疫应答的形成不足，或树突状细胞介导的耐受性和免疫抑制的发展。识别肿瘤环境中的DC刺激因子和DC抑制/极化因子以及DC调节机制对于设计有效的基于DC的疫苗以及恢复免疫缺陷的常驻型(resident)DC至关重要，这些常驻型DC负责维持癌症患者的临床相关抗肿瘤免疫力(Zong等，2016)。SIRPa阴性的树突状细胞被描述为在小鼠和人体内交叉呈递抗原的最有效的APC。已知DCSIRPa阳性的交叉呈递效率较低(Meral等，2013；Nierkens等，2015；Segura等，2015)。癌细胞表达肿瘤抗原，包括由非同义突变产生的新抗原，但抗原呈递较差。负责维持癌症患者的临床相关抗肿瘤免本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体包含：/n(a)重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，/n其中：/nHCDR1包含或由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列组成；/nHCDR2包含或由SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成；/nHCDR3包含或由SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列组成；/n以及/n(b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列；/n所述抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体用于治疗或预防疾病，特别是癌症，或用于针对疾病特别是癌症的治疗性疫苗接种；所述抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体增强在所述疾病特别是所述癌症中表达的抗原的交叉呈递，并参与引发适用于治疗所述疾病的T细胞应答。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180313 EP 18305271.11.抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体包含：
(a)重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，
其中：
HCDR1包含或由SEQIDNO：9所示的氨基酸序列组成；
HCDR2包含或由SEQIDNO：10或SEQIDNO：11所示的氨基酸序列组成；
HCDR3包含或由SEQIDNO：12或SEQIDNO：13或SEQIDNO：14或SEQIDNO：15所示的氨基酸序列组成；
以及
(b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO：16或SEQIDNO：17所示的氨基酸序列；
所述抗人SIRPa抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体用于治疗或预防疾病，特别是癌症，或用于针对疾病特别是癌症的治疗性疫苗接种；所述抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体增强在所述疾病特别是所述癌症中表达的抗原的交叉呈递，并参与引发适用于治疗所述疾病的T细胞应答。


2.根据权利要求1所述的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体：
-与人SIRPav1特异性结合并抑制人CD47与人SIRPav1的结合、不阻止或抑制人CD47与人SIRPg的结合；特别是不与人SIRPg特异性结合。


3.抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体包含：
a)重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，
其中：
HCDR1包含或由SEQIDNO：9所示的氨基酸序列组成；
HCDR2包含或由SEQIDNO：10或SEQIDNO：11所示的氨基酸序列组成；
HCDR3包含或由SEQIDNO：12或SEQIDNO：13或SEQIDNO：14或SEQIDNO：15所示的氨基酸序列组成；
以及
b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO：16或SEQIDNO：17所示的氨基酸序列；
其中，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物抑制人CD47与人SIRPav1的结合，并且不阻止或抑制人CD47与人SIRPav2的结合；
所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体用于预防和/或治疗SIRPav1阳性受试者的疾病。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，
所述重链可变结构域包含或由SEQIDNO：18或SEQIDNO：19或SEQIDNO：20或SEQIDNO：21或SEQIDNO：22或SEQIDNO：23所示的氨基酸序列组成；特别地，所述重链可变结构域包含或由SEQIDNO：20所示的氨基酸序列组成；
所述轻链可变结构域包含或由SEQIDNO：17所示的氨基酸序列组成。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述疾病选自癌症，特别是炎性癌症和具有浸润的髓样细胞，特别是浸润的树突状细胞和/或MDSC细胞和/或TAM细胞的癌症、癌症转移，特别是乳腺癌转移、黑色素瘤；或者权利要求1或4所述的用途是针对这些疾病之一的治疗性疫苗接种，特别是针对黑色素瘤的治疗性疫苗接种。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体具有以下特性：
-它不特异性结合人SIRPav2；
-它不抑制人CD47与人SIRPg的结合，特别是它不与人SIRPg特异性结合；
-它以至少10E-9M的亲和力与人SIRPav1结合；以及
-它促进抗原呈递细胞特别是树突状细胞对人T细胞特别是人CD8+T细胞交叉呈递至少一种抗原；
可选地，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体具有以下特性中的至少一种：
-它不抑制人T细胞的体内活化和/或增殖；和/或
-它促进巨噬细胞的活化。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段或其修饰的抗体，其中，所述疾病是癌症；并且受试者中表达或检测到至少一种抗原，所述抗原选自：来自人乳头状瘤病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、梅克尔细胞多瘤病毒、人类免疫缺陷病毒、人T细胞白血病病毒、人类疱疹病毒8、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、HCV、HBC、巨细胞病毒的抗原；或单点突变抗原，所述单点突变抗原选自CTNNB1基因、CASP8基因、hER2基因、p53基因、KRAS基因、NRAS基因的抗原；或肿瘤抗原，特别是产生自或源自下组的肿瘤抗原：ras癌基因、BCR-ABL肿瘤抗原、ETV6-AML1肿瘤抗原、黑色素瘤抗原编码基因(MAGE)、BAGE抗原、GAGE抗原、ssx抗原、ny-eso-1抗原、周期蛋白A1肿瘤抗原、MART-1抗原、gp100抗原、CD19抗原、前列腺特异抗原、前列腺酸性磷酸酶抗原、癌胚抗原、甲胎蛋白抗原、癌抗原125、粘蛋白16抗原、粘蛋白1抗原、人端粒酶逆转录酶抗原、EGFR抗原、MOK抗原、RAGE-1抗原、PRAME抗原、野生型p53抗原、癌基因ERBB2抗原、唾液酸Tn肿瘤抗原、肾母细胞瘤1抗原、间皮素抗原、碳水化合物抗原、B-连环蛋白抗原、MUM-1抗原、CDK4抗原和ERBB2IP抗原，特别是Melan-A黑色素瘤肿瘤相关抗原(TAA)。


8.药物组合物，其中，所述药物组合物包含权利要求1至7中任一项所述的抗体、其抗原结合片段或其修饰的抗体，还包含至少一种药物媒介物。


9.多肽(特别是抗原)在生产或筛选抗人SIRPav1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或其修饰的抗体中的用途，其中，所述多肽或抗原包含或由人SIRPav1的表位组成，所述人SIRPav1的表位由SEQIDNO：1、SEQIDNO：4或SEQIDNO：25组成，所述抗人SIRPav1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或其修饰的抗体特异性结合人SIRPav1、抑制人CD47与人SIRPav1的结合，并且不阻止或抑制人CD47与人SIRPav2和人SIRPg的结合，特别地，所述抗人SIRPav1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或其修饰的抗体增强抗原呈递细胞特别是树突状细胞向人T细胞特别是CD8+T细胞交叉呈递抗原。


10.制备抗人SIRPav1抗体的方法，其中，所述方法包括用权利要求9所述的至少一种抗原或至少一种包含或由人SIRPav1的表位组成的抗原免疫非人动物，特别是非人哺乳动物，所述人SIRPav1的表位由SEQIDNO：1、SEQIDNO：4或SEQIDNO：25组成；特别地，从所述免疫的非人动物中收集所得的血清或B细胞，获得针对所述抗原的抗体。


11.根据权利要求9所述的用途或根据权利要求所述10的方法，其中，所述用途或方法还包括筛选和回收抗人SIRPav1抗体的步骤，所述筛选步骤包括以下步骤中的至少一个：
a.检测抗体与人SIRPav1的结合能力，特别是抗体与权利要求7中所述的抗原的结合能力；和/或
b.检测抗体降低或抑制人CD47与人SIRPav1结合的能力；和/或
c.检测抗体阻止或抑制人CD47与人SIRPav2结合的能力；和/或
d.检测抗体阻止或抑制人CD47与人SIRPg结合的能力；
以及，可选地：
e.检测抗体结合分别位于SEQIDNO：3的SIRPa的第130位和第132位或分别位于SEQIDNO：24的SIRPa的第100位和第102位的氨基酸残基D和氨基酸残基V的能力；
f.检测抗体与人SIRPav2结合的能力；和/或
g.检测抗体与人SIRPg结合的能力；
其中，回收的抗体具有以下特性：
1.它与人SIRPav1特异性结合；
2.它降低或抑制人CD47与人SIRPav1的结合；
3.它不降低或抑制人CD47与人SIRPg的结合；
以及可选地，回收的抗体具有以下特性中的至少一种：
4.它以至少10E-9M的亲和力结合人SIRPav1；和/或
5.它结合分别位于SEQIDNO：3的SIRPa的第130位和第132位或分别位于SEQIDNO：24的SIRPa的第100位和第102...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·波里尔，V·高铁尔，C·马里，S·彭加马，B·瓦努夫，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法，
类型：发明
国别省市：法国;FR