本发明专利技术提供了一种联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒，所述的试剂盒中包括用于DNA文库构建的专用接头、用于检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物和用于文库扩增的复合引物。所述的专用接头为接头引物1分别和8条不同的i5端引物构成的8个二聚体；所述的基因重排和基因全外显子突变的类型为CBFB重排、RUNX1重排、MLL重排、RARA重排、MECOM重排、TP53基因全外显子突变；文库扩增复合引物具有不同的i7端。本发明专利技术提供的试剂盒能够一次性检测多个急性髓细胞白血病常见的分子遗传学变异，且操作简单，时间短，检测效率高。
【技术实现步骤摘要】
一种联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒
本专利技术属于分子生物检测领域，具体涉及一种联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒。
技术介绍
急性髓细胞性白血病（Acutemyeloidleukemia，AML）是髓系造血干细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险。近年来通过基因突变频率和一些易患生物标记研究发现，急性髓细胞性白血病可能是遗传学和环境因素共同作用的结果。急性髓细胞白血病(AML)是一种异质性疾病，其包括许多种具有不同遗传异常和临床特征的实体。研究癌症的遗传谱能够鉴定导致恶性表型的基因。这些基因谱(包括基因表达和突变)提供了关于正常细胞和疾病细胞的生物学过程的有价值的信息。然而，癌症在它们的遗传“特征”中存在广泛的不同，这导致在诊断和治疗、以及开发有效疗法中存在困难。传统的荧光PCR法检测存在每次只能检测一个位点，需要的样品量较多；检测成本较高；实验操作数量较多，检测程序耗时长等缺陷。中国专利201380024896.0中公开了一种了用于诊断、预测、治疗和处理急性髓细胞白血病的方法，涉及预测患有急性髓细胞白血病的患者的生存率，分析从所述患者分离的遗传样品是否存在细胞遗传学异常，以及在基因FLT3、NPMI、DNMT3A、NRAS、CEBPA、TET2、WTI、IDHI、IDH2、KIT、RUNXI、MLL-PTD、ASXLI、PHF6、KRAS、PTEN、P53、HRAS和EZH2中的至少一者中是否存在突变。该方法涉及基因的种类繁多，检测方法复杂，有待进一步改进。中国专利201710493398.0中公开了一种癌症相关基因突变高灵敏度检测方法和试剂盒。通过针对目的基因设计一组带标签引物组，并分别进行两步扩增，然后再进行二代测序的过程，完成癌症相关基因突变的检测。该方法能够有效排除假阳性的低频突变，检测结果灵敏度和特异性都较高。但其数据分析过程复杂，增加了检测时间。提供一种方便快捷，准确度和灵敏度高的检测急性髓细胞白血病的试剂盒对于急性髓细胞白血病的临床具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种检测试剂盒，通过对送检样品的DNA和RNA共同提取，对RNA进行逆转录成cDNA后，与DNA一起进行高通量测序文库构建，并进行高通量测序，针对急性髓细胞白血病常见的分子遗传学变异，一次性检测多种变异类型。一方面，本专利技术提供了一组用于检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物。所述的特异性复合引物的序列如下表1。表1特异性复合引物表检测位点引物名称引物序列SEQIDNOCBFB重排CBFB-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCCAAAGACTGGATGGTATGGGCTGTCTGSEQIDNO:10CBFB重排CBFB-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGCTCGGAGAAGGACACGCGAATTTGAAGATSEQIDNO:11CBFB重排CBFB-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCCAGCTGGCAGGGAGAACAGCGACASEQIDNO:12RUNX1重排RUNX1-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCACTGAATGCAAACCACAGGGTTTCGCASEQIDNO:13RUNX1重排RUNX1-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCCTTCAGAAGAGGGTGCATTTTCAGGAGGSEQIDNO:14RUNX1重排RUNX1-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAACAAGACCCTGCCCATCGCTTTCAASEQIDNO:15RUNX1重排RUNX1-4GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTGAGCTGAGAAATGCTACCGCAGCCATSEQIDNO:16RUNX1重排RUNX1-5GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCACTTGGAATGAATCCTTCTAGAGACGTCCACSEQIDNO:17MLL重排KMT2A-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGCTTTCTCTGTGCCAGTAGTGGGCATGTAGSEQIDNO:18MLL重排KMT2A-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGTGTTGTCGTCGTTGCAAATTCTGTCACGSEQIDNO:19MLL重排KMT2A-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCCCACCCCCAGGCATAGAAGACAATAGACAGSEQIDNO:20MLL重排KMT2A-4GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGCCAACGACATCGGGATTTGATCAAAGGCGSEQIDNO:21MLL重排KMT2A-5GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGCTTAGATAAGCCCAAGTTTGGTGGTCGCASEQIDNO:22表1续MLL重排KMT2A-6GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCTACAATGGATGCCTTCCAAAGCCTACCTGCSEQIDNO:23MLL重排KMT2A-7GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAAGTTCCCAAAACCACTCCTAGTGAGCCCASEQIDNO:24MLL重排KMT2A-8GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGCTCCCCGCCCAAGTATCCCTGTAAAACSEQIDNO:25MLL重排KMT2A-9GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAGCAGATGGAGTCCACAGGATCAGA本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组用于检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物，其特征在于，所述的基因重排和基因全外显子突变的类型为CBFB重排、RUNX1重排、MLL重排、RARA重排、MECOM重排、TP53基因全外显子突变；所述的特异性复合引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10-SEQID NO:48所示。/n
【技术特征摘要】
1.一组用于检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物，其特征在于，所述的基因重排和基因全外显子突变的类型为CBFB重排、RUNX1重排、MLL重排、RARA重排、MECOM重排、TP53基因全外显子突变；所述的特异性复合引物的核苷酸序列如SEQIDNO:10-SEQIDNO:48所示。
2.根据权利要求1所述的检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物，其特征在于，所述的特异性复合引物还包括通用引物1，通用引物1的序列为SEQIDNO:49。
3.一种联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括权利要求1所述的用于检测基因重排和基因全外显子突变的特异性复合引物。
4.根据权利要求3所述的联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括一种用于DNA文库构建的专用接头，所述的专用接头为接头引物1分别和8条不同的i5端引物构成的8个二聚体；所述的接头引物1的序列为SEQIDNO:1；所述的8条不同的i5端引物的序列为SEQIDNO:2-SEQIDNO:9。
5.根据权利要求4所述的联合检测急性髓细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括一组用于文库扩增的复合引物，所述的文库扩增复合引物具有不同的i7端，所述的引物的序...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙石磊，姬云，
申请(专利权)人：苏州科贝生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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