本发明专利技术涉及一种突变细小病毒结构蛋白，其包含至少一个插入，所述插入包含人HSP70i氨基酸320至641内所含的至少六个连续氨基酸的序列。此外，本发明专利技术涉及包含所述蛋白的多聚体结构(VLP)，用于生产突变细小病毒结构蛋白的方法，以及可用于治疗白癜风或其他自身免疫性疾病的包含突变细小病毒结构蛋白的药物或疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗自身免疫性疾病的细小病毒结构蛋白
本专利技术涉及一种突变细小病毒结构蛋白，其包含至少一个插入，所述插入包含人HSP70i氨基酸320至641内所含的至少六个连续氨基酸的序列。此外，本专利技术涉及包含所述蛋白的多聚体结构(VLP)、用于生产突变细小病毒结构蛋白的方法、以及可用于治疗白癜风或其他自身免疫性疾病的包含突变细小病毒结构蛋白的药物或疫苗。
技术介绍
白癜风是最常见的色素脱失疾病，影响全世界约0.5％至2％的人口。白癜风病损呈乳白色斑块，其形状和大小会增加，并可能侵袭身体的大部分部位。该疾病可在任何年龄发生。但是，一半的患者在20岁之前就患上白癜风。已显示白癜风对生活质量产生不利的影响，主要是因为色素脱失引起患者的外貌改变。该疾病会影响患者的情绪和心理健康。白癜风与患抑郁症的风险增加相关，超过三分之一的白癜风患者会经历某种类型的抑郁症状，但不一定满足临床抑郁症的所有标准(Speeckaert&vanGeel，2017)。白癜风可以分为更为常见形式的非节段型白癜风和节段型白癜风。非节段型白癜风的特征是在身体两侧均出现色素脱失，而节段型白癜风仅限于身体的一侧，通常不越过身体的中线。非节段型白癜风通常具有慢性病程，伴有一生的持续进程。相反，节段型白癜风的特征是疾病发作快，并且在一到两年后疾病稳定。白癜风亚型的早期识别至关重要，因为治疗方法明显不同(Speeckaert&vanGeel，2017)。目前，局部皮质类固醇是治疗白癜风的已确立的一线治疗方案。这些化合物的抗炎作用会减缓疾病进程。但是，它们对色素再生的作用是有限的。通常，大部分的色素再生可以在面部和颈部观察到，而在躯干、四肢(尤其是手部)只能观察到有限的色素再生。皮质类固醇的副作用包括皮肤萎缩、毛细血管扩张和细纹。治疗通常持续至少六个月，其主要目的是实现疾病稳定。作为局部施用的替代方法，可以以适度剂量口服施用皮质类固醇。口服皮质类固醇疗法已显示在大多数患者中可阻止疾病进程。但是，对于口服施用皮质类固醇同样的是，只观察到很少的色素再生。此外，口服施用皮质类固醇和多种副作用有关，例如体重增加、痤疮、睡眠障碍、躁动、多毛症和月经异常，这限制了长期使用。替代皮质类固醇的白癜风局部疗法可以基于局部免疫调节剂，例如他克莫司或吡美莫司，它们可减弱T细胞活性。与皮质类固醇相似，这种治疗显示大部分的色素再生是在面部，而在身体的其他侧则效果一般。副作用包括往往可观察到的饮酒后有烧灼感或潮红，这对某些患者会造成困扰(Speeckaert&vanGeel，2017)。除药物疗法外，光疗(尤其是窄带UVB光疗)已被确立为白癜风的治疗方法。光疗显示在大多数患者中有色素再生的迹象，但是仅在少数患者中发现完全的色素再生。此外，经常观察到光疗中断后复发(Speeckaert&vanGeel，2017)。总之，已确立的白癜风疗法的疗效有限，经常引起副作用，并且通常必须长时间(例如数周或数月)施用。基于这样的观察结果，即扩大的白癜风病损通常被抗黑素细胞分化抗原(例如Mart-1或GP100)的细胞毒性T细胞浸润，白癜风被认为是一种自身免疫性疾病。已经进一步表明，心理应激以及化学性应激或机械性应激都是促使白癜风的自身免疫病因(Mosenson等人，2013；Speeckaert&vanGeel，2017)。因此，已经检测出热休克蛋白(HSP)特别是诱导型HSP70亚型(HSPi)参与白癜风的细胞机制。人HSP70i也称为HSP70A1A或HSP70A1B，它们的特征是具有相同的氨基酸序列，但是由各自具有不同调控区的基因编码。与HSC70类似，HSP70i通常被认为是一种细胞质蛋白，但是与HSP70蛋白家族的其他成员相比，HSP70i也被活细胞分泌(Mosenson等人，2013)。已知HSP70家族蛋白参与树突状细胞(DC)的活化和熟化、DC的抗原呈递和T细胞的活化。HSP70通过以下方式促进树突状细胞的抗原呈递过程：a)与肽抗原形成复合物，b)将肽递送至抗原呈递细胞并将肽转移到细胞中，c)在细胞内伴随抗原进行MHCI类呈递。在抗原呈递细胞的表面，HSP70-抗原复合物可以结合信号受体(例如TLR2、TLR4和CD91)，或结合清道夫受体(例如LOX-1、SREC-1、FEEL-1/CLEVER-1或CD91)。HSP-抗原复合物与信号受体的结合可以活化抗原呈递细胞的细胞因子产生，而与清道夫受体的结合导致受体介导的对复合物的胞吞作用。HSP70的这种刺激效应是由蛋白的C端结构域介导的(Malyshev，2013)。如Mosenson等人所示，与非病损皮肤相比，HSP70i在病损皮肤或病损周围皮肤中的表达水平明显更高。此外，与对照黑素细胞相比，白癜风黑素细胞在对氧化应激的应答中分泌明显更多的HSP70i，这与白癜风自身免疫病因中假定的HSP70i的应激相关功能相一致(Mosenson等人，2014)。不同动物模型也证实了HSP70i在白癜风中的作用。例如，可以表明，在与编码HSP70i的质粒联合施用的情况下，用编码黑素细胞分化抗原TRP-2的真核表达质粒接种的小鼠显著增加了色素脱失，而单独用仅编码黑素细胞分化抗原的质粒进行的接种增加色素脱失的程度明显更低。值得注意的是，HSP70i的作用并未被在应答接种疫苗时所表达的HSP70i抗体减弱(Denman等人，2009)。在用编码TRP-2的质粒与编码HSP70iC端区域(氨基酸320至641)的质粒联合接种的小鼠中，也观察到明显增加的色素脱失。与此相反，在用编码TRP-2的质粒联合编码HSP70i的N端区域(氨基酸1至377)的质粒接种后，色素脱失几乎没有增加(Mosenson等人，2013)。在HSP70i的C端区域内，似乎需要肽序列QPGVLIQVYEGER用于活化树突状细胞。相应序列与DnaK肽QPSVQIQVYQGEREIAAHNK(DnaK氨基酸407至426)同源，已知DnaK肽在应答感染时于炎症期间驱动树突状细胞活化。在相应的肽序列中包含氨基酸交换Q435A(HSP70iQ435A)、V438K和I440A(HSP70iV438K,I440A)或者V442A和Y443V(HSP70iV442A,Y443V)的HSP70i变体在上述小鼠接种模型中表现出明显降低的色素脱失作用(Mosenson等人，2013)。此外，在早期快速色素脱失的小鼠品系h3TA2(该品系表达携带有人酪氨酸酶反应性TCR转基因和HLA-A2.1的T细胞)中，与用空载体接种的小鼠相比，用携带HSP70iQ435A的质粒进行接种，致使恢复色素脱失。在用野生型HSP70i接种的小鼠中，观察到DC表型持续偏向炎性亚型，而相反的是在用HSP70iQ435A接种的小鼠中，观察到偏向耐受性表型。对HSP70i的体液免疫应答的分析表明，仅产生结合QPGVLIQVYEGER肽下游的抗体(Mosenson等人，2013)。除白癜风外，HSP70i在抗原呈递和DC活化中的作用还被认为与许多其他自身免疫性疾病和/或炎性疾病本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种突变细小病毒结构蛋白，其包含至少一个插入，所述插入包含人HSP70i氨基酸320至641内所含的至少六个连续氨基酸的序列。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180216 EP 18157083.9;20180611 EP 18176976.11.一种突变细小病毒结构蛋白，其包含至少一个插入，所述插入包含人HSP70i氨基酸320至641内所含的至少六个连续氨基酸的序列。
2.根据权利要求1所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，在所述插入中包含的氨基酸序列包含参与由HSP70i活化抗原呈递细胞的氨基酸序列。
3.根据前述权利要求中任一项所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，所述插入的氨基酸序列与HSP70i中的相应序列相比包含至少一个突变。
4.根据前述权利要求中任一项所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，所述插入的氨基酸序列包含氨基酸序列APGVLIQVYEG和/或QPGVLIQVYEG。
5.根据前述权利要求中任一项所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，所述突变细小病毒结构蛋白源自AAV，优选AAV2。
6.根据前述权利要求中任一项所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，所述突变细小病毒结构蛋白为突变VP3蛋白。
7.根据前述权利要求中任一项所述的突变细小病毒结构蛋白，其中，所述突变细小病毒结构蛋白包含两个或更多个根据前述权利要求中任一项所述的插入。
【专利技术属性】
技术研发人员：J·普朗斯加德，
申请(专利权)人：二A制药公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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