洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术及其栽培方法技术

本发明专利技术属于食用菌的栽培技术领域，特别是一种洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术及其栽培方法。本发明专利技术的洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术及其栽培方法，经过选择不同的培养基，不同的培养条件，将营共生生活的野生洛巴伊口蘑菌株驯化为可营腐生生活，能独立培养的菌株，其栽培料配方的生物学效率高，新菌株产量高，生物学转化率为１００％以上，新鲜子实单丛重达２．０ｋｇ左右。改变我国目前高温期栽培食用菌困难的现状，实现食用菌的周年栽培。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于食用菌的栽培
，特别是一种。为实现本专利技术的第一个目的，洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术按以下方法步骤(一)分离培养基组份配方及配方比基 料10-60g葡萄糖1.5-2g琼 脂1.8-2g 水100mlpH6.5(二)分离方法(A)培养基的配制①、按配方称量基料，切碎，加水煮汁，煮沸5-10分钟，用纱布过滤，取滤液定容100ml；②、在上述步骤①所取得的滤液中加入葡萄糖和琼脂，搅拌煮溶；③、将步骤②所得的溶液分别装于试管中，每支试管10ml，用棉花塞住试管口；④、将步骤③制得的试管9支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中灭菌，温度为121--126℃，压力1.1-1.5kg/cm2，维持30分钟；⑤、自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；(B)制取母种取上述步骤制得的试管培养基，在无菌条件下对半撕开野生洛巴伊口蘑新鲜子实体，用无菌接种刀在菌盖与菌柄交界处切取一小块菌肉组织，无菌操作条件下移入培养基斜面上，置于干净环境中培养；(C)母种纯培养①、母种培养基配方及配方比C源 0-1.5gN源 0-0.5gKH2PO40.05gMgSO40.05g琼脂 1.8g水 100m②、纯培养方法a、培养基的配制按配方称量各组份，加水煮汁，煮沸5分钟，然后分别装于试管中，每支试管10ml，用棉花塞住试管口，将装有溶液的试管9支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中来菌，温度为121-126℃压力1.1-1.5kg/cm2，维持30分钟，自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；b、母种纯培养无菌条件下将分离的野生洛巴伊口蘑菌株用无菌接种刀切取一小块菌丝，无菌操作移入步聚a所得的培养基中培养，得母种；(D)原种的纯培养技术①、原种培养基配方及配方比基料79-99％塘泥0-20％CaCO31％麦麸0-10％②、纯培养方法a、拌料将上述各原料用自来水调节含水量60-65％；b、装袋选取12-20cm2一端开口的聚丙烯袋，每袋装入10cm高的料，上下松紧合适，然后用绳绑紧；c、灭菌灭菌有两种方法，一是在高温高压设备中，温度121-126℃，压力为1.1-1.5kg/cm2，维持1.5-2小时；二是在常温常压设备中，温度100℃，常压维持8-10小时；d、冷却将灭菌的培养料自然冷却至30-35℃；e、接种在消毒过的干净环境条件下，将洛巴伊口蘑母种一小块接入上述所得培养料中；f、发菌将接菌的培养料移入干净室中培养，室内温度为30℃，空气相对温度为70％，培养30-40天，菌丝长满整个培养料；所述步聚(一)分离培养基的基料为马铃薯、棉籽壳或稻草。所述分离培养基配方比为基料25-60g、葡萄糖2g、琼脂2g、水100ml、pH6.5。所述分离培养基配方比为基料25g、葡萄糖2g、琼脂2g、水100ml、pH6.5。所述步骤(C)母种纯培养基的C源为蔗糖、麦芽糖、葡萄糖或可溶性淀粉；N源为蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或NH4NO3。所述步聚(D)原种培养基的基料为发酵甘蔗渣或棉籽壳。为实现本专利技术的另一个目的，洛巴伊口蘑的栽培方法按以下步骤(A)拌料将栽培料用自来水调节含水量60-65％；(B)装袋选取41×22cm2两端开口的聚丙烯袋，每袋装入20cm高的料，上下松紧合适，然后用纤维绳绑紧两头；(C)灭菌将步骤(B)装好的培养料袋置入高温高压设备中，温度为121-126℃，压力为1.1-1.5kg/cm2，维持1.5-2小时；(D)冷却将灭菌的培养料自然冷却到30-35℃；(E)接种在消毒过的干净环境条件下，将洛巴伊口蘑原种接入上述培养料中，两头接种，接种量为菌种铺满培养料表面，然后两端袋口各用套环套上，外封无菌报纸，再用橡皮圈套住；(F)发菌将接菌的培养料移入干净室中培养，室内温度为25-30℃，空气相对湿度为70％，培养30-40天，菌丝长满整个培养料，即可进行覆土；(G)覆土将发菌好的菌条袋子一端打开或将袋子脱掉，然后以两条紧密堆放在一起，表面覆盖1cm厚的土，土质采用肥沃的塘泥土或菜园土；(H)出菇管理旱晚在上述覆土层表面淋水一次，淋水量以土层发亮为度，保持室温度在25℃以上，28-32天白色菇体形成；(I)采收待菇体长至6成熟，即菌盖未打开之前采摘；(J)重复出菇管理将表面烂菇，杂物清洁干净，停水10天后，早晚淋水一次，保持室温25℃以上，28-32天白色菇体形成。作为本专利技术洛巴伊口蘑栽培方法的改进，所述栽培料为棉籽壳、谷壳或甘蔗渣。本专利技术的，经过选择不同的培养基，不同的培养条件，将营共生生活的野生洛巴伊口蘑菌株驯化为可营腐生生活，能独立培养的菌株，其栽培料配方的生物学效率高，新菌株产量高，生物学转化率为100％以上，新鲜子实单丛重达2.0kg左右。改变我国目前高温期栽培食用菌困难的现状，实现食用菌的周年栽培。表1、栽培材料，栽培方法的比较及其生物学转化率对照表 根据实施例一和实施例二，采用不同的基料棉籽壳与马铃薯，可见，马铃薯富含淀粉，棉籽壳富含多种糖类、脂肪等物质，比马铃薯营养更全面丰富，所以，马铃薯是食用菌母种的常用培养基，但并不是洛巴伊口蘑的最佳培养基。实施例三称取蔗糖1.5g，蛋白胨0.5g，KH2PO40.05g，MgSO40.05g，琼脂1.8g，水100ml置入烧杯中，煮溶，分装于试管中，每支试管10ml，试管口用棉花塞住，9支一扎用牛皮纸包上试管口端，放入高压锅中灭菌，温度为121-126℃，压力1.1-1.5kg/cm2，维持30分钟，自然降压为0时，取出打斜面，待斜面凝固后，在无菌条件下，将实施例一、二所述分离成功的野生洛巴伊口蘑菌株，用无菌接种刀切取一小块菌丝，移入培养基斜面上，置于干净环境中培养。菌丝长满试管斜面无污染即为母种。就实施例五和实施例六比较，覆土是该栽培技术的关键。其不仅有保温保湿的作用，土壤中含有的多种微生物对子实体形成有促进作用。不同的土质，其这种作用有差异。一般可选择塘泥土、菜园土或凤凰树根际土。覆土时可采用脱袋覆土或不脱袋覆土，栽培料可选择棉籽壳、谷壳或甘蔗渣。在选用泥土，覆土方式及栽培料的相互搭配中，以棉籽壳作为栽培料，采用熟料脱袋覆塘泥土为最佳，其生物学转化率达156％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术，按以下方法步骤：（一）分离培养基组份配方及配方比基料 １０－６０ｇ葡萄 １．５－２ｇ琼脂 １．８－２ｇ水 １００ｍｌｐＨ ６．５（二）分离方法（Ａ）培养基的配制：①、按配 方称量基料，切碎，加水煮汁，煮沸５－１０分钟，用纱布过滤，取滤液定容１００ｍｌ；②、在上述步骤①所取得的滤液中加入葡萄糖和琼脂，搅拌煮溶；③、将步骤②所得的溶液分别装于试管中，每支试管１０ｍｌ，用棉花塞住试管口；④、将步骤③制得 的试管９支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中灭菌，温度为１２１－１２６℃，压力１．１－１．５ｋｇ／ｃｍ↑［２］，维持３０分钟；⑤、自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；（Ｂ）组织分离：取上述步骤制得的试管培养基，在无菌条 件下对半撕开野生洛巴伊口蘑新鲜子实体，用无菌接种刀在菌盖与菌柄交界处切取一小块菌肉组织，无菌操作条件下移入培养基斜面上，置于干净环境中培养；（Ｃ）母种纯培养：①、母种培养基配方及配方比：Ｃ源 ０－１．５ｇＮ源 ０－０．５ｇ ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］ ０．０５ｇＭｇＳＯ↓［４］ ０．０５ｇ琼脂 １．８ｇ水 １００ｍ②、纯培养方法：ａ、培养基的配制：按配方称量各组份，加水煮汁，煮沸５分钟，然后分别装于试管中，每支试管１０ｍｌ，用棉花塞住试管口 ，将装有溶液的试管９支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中来菌，温度为１２１－１２６℃压力１．１－１．５ｋｇ／ｃｍ↑［２］，维持３０分钟，自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；ｂ、母种纯培养：无菌条件下将分离的野生洛巴伊口蘑菌株用 无菌接种刀切取一小块菌丝，无菌操作移入步骤ａ所得的培养基中培养，得母种；（Ｄ）原种的纯培养技术：①、原种培养基配方及配方比：基料 ７９－９９％塘泥 ０－２０％ＣａＣｏ↓［３］ １％麦麸 ０－１０％②、纯培养方法： ａ、拌料：将上述各原料用自来水调节含水量６０－６５％；ｂ、装袋：选取１２－２０ｃｍ↑［２］一端开口的聚丙烯袋，每袋装入１０ｃｍ高的料，上下松紧合适，然后用绳绑紧；ｃ、灭菌：灭菌有两种方法，一是在高温高压设备中，温度为１２１－１２ ６℃，压力为１．１－１．５ｋｇ／ｃｍ↑［２］，维持１．５－２小时；二是在常温常压设备中，温度１００℃，常压维持８－１０小时；ｄ...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种洛巴伊口蘑菌株分离纯培养技术，按以下方法步骤(一)分离培养基组份配方及配方比基 料10-60g葡萄糖1.5-2g琼 脂1.8-2g水100mlpH6.5(二)分离方法(A)培养基的配制①、按配方称量基料，切碎，加水煮汁，煮沸5-10分钟，用纱布过滤，取滤液定容100ml；②、在上述步骤①所取得的滤液中加入葡萄糖和琼脂，搅拌煮溶；③、将步骤②所得的溶液分别装于试管中，每支试管10ml，用棉花塞住试管口；④、将步骤③制得的试管9支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中灭菌，温度为121-126℃，压力1.1-1.5kg/cm2，维持30分钟；⑤、自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；(B)组织分离取上述步骤制得的试管培养基，在无菌条件下对半撕开野生洛巴伊口蘑新鲜子实体，用无菌接种刀在菌盖与菌柄交界处切取一小块菌肉组织，无菌操作条件下移入培养基斜面上，置于干净环境中培养；(C)母种纯培养①、母种培养基配方及配方比C源0-1.5gN源0-0.5gKH2PO40.05gMgSO40.05g琼脂 1.8g水100m②、纯培养方法a、培养基的配制按配方称量各组份，加水煮汁，煮沸5分钟，然后分别装于试管中，每支试管10ml，用棉花塞住试管口，将装有溶液的试管9支一扎用牛皮纸包上试管口端，置入高压锅中来菌，温度为121-126℃压力1.1-1.5kg/cm2，维持30分钟，自然降压后取出试管打斜面，凝固后得培养基；b、母种纯培养无菌条件下将分离的野生洛巴伊口蘑菌株用无菌接种刀切取一小块菌丝，无菌操作移入步聚a所得的培养基中培养，得母种；(D)原种的纯培养技术①、原种培养基配方及配方比基料79-99％塘泥0-20％CaCo31％麦麸0-10％②、纯培养方法a、拌料将上述各原料用自来水调节含水量60-65％；b、装袋选取12-20cm2一端开口的聚丙烯袋，每袋装入10cm高的料，上下松紧合适，然后用绳绑紧；c、灭菌灭菌有两种方法，一是在高温高压设备中，温度为121-126℃，压力为1.1-1.5kg/cm2，维持1.5-2小时；二是在常温常压设备中，温度100℃，常压维持8-10小时；d、冷却将灭菌的培养料自然冷却至30-35℃；e、接种在消毒过的干净环境条件下，将洛巴伊口蘑母种一小块接入上述所得培养料中；f、发菌将接菌的培养料移入干净室...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月廉，郭荣发，谭树明，温美英，
申请(专利权)人：湛江海洋大学，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]