一种发酵乳杆菌CICC 6278及其在新疆特色辣椒发酵中的应用制造技术

本发明专利技术涉及食品微生物领域，特别涉及到一种高效快速降解亚硝酸盐，低产生物胺且具有抑制致病微生物的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CICC 6278及其在新疆特色辣椒发酵中的应用。该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC 17811。本发明专利技术所述的菌株够抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和沙门氏菌生长；氨基酸脱羧酶为阴性；在改良MRS液体培养基中培养24h，亚硝酸盐降解率能够达到100％。采用微生物强化技术将该菌株应用于新疆特色辣椒发酵，亚硝酸盐的含量0.53mg/kg，生物胺的含量为2.81mg/kg，均低于对照组，发酵乳杆菌(L.fermentum)CICC 6278的强化提高了发酵辣椒的食用安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种发酵乳杆菌CICC6278及其在新疆特色辣椒发酵中的应用
本专利技术涉及食品微生物领域，特别涉及到一种具有快速降解亚硝酸盐，低产生物胺且具有抑制致病微生物的发酵乳杆菌CICC6278及其在新疆特色辣椒发酵中的应用。
技术介绍
乳酸菌是指革兰氏染色呈阳性、无运动性或很少有运动性、厌氧或兼性厌氧、以乳酸作为发酵代谢中主要或唯一产物等一类微生物的总称。乳酸菌广泛分布于自然界中，包括乳杆菌属，乳球菌属，链球菌属，片球菌属等属的菌株。大部分乳酸菌都具有益生功能，在发酵过程中能够产生多种有机酸，具有耐酸和耐盐特性，亚硝酸盐降解能力，抑制致病微生物特性以及低产生物胺等特性，广泛应用于果蔬发酵生产中。果蔬发酵是利用有益微生物，控制生产条件对果蔬进行加工的一种方式，能够最大程度的保持蔬菜的营养和色香味，又具有良好的感官品质，深受消费者喜爱。果菜发酵体系实质上是多种微生物相互作用的微生态环境，其中乳酸菌发挥着至关重要的作用。本专利技术筛选得到的发酵乳杆菌CICC6278，够抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和沙门氏菌等致病微生物的生长，能够快速降解亚硝酸盐，且具有低产生物胺的特性，通过微生物强化技术将该菌种应用于新疆特色辣椒发酵生产中，能够抑制发酵辣椒中致病微生物的生长，降低产品中亚硝酸盐和生物胺的含量，提高发酵辣椒的食用安全性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株发酵乳杆菌CICC6278，其特征在于抑制致病微生物生长，快速高效的降解亚硝酸盐，低产生物胺。本专利技术的另一个目的是提供一种接种上述发酵乳杆菌CICC6278的亚硝酸盐和生物胺含量低的新疆特色发酵辣椒。本专利技术在于克服现有技术的不足，通过接种能够抑制致病微生物生长，快速高效的降解亚硝酸盐，低产生物胺的发酵乳杆菌CICC6278，即可生产出亚硝酸盐和生物胺含量低的新疆特色发酵辣椒。本专利技术的具体技术方案如下：发酵乳杆菌CICC6278为实验室从新疆特色辣椒中分离得到的乳酸菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC17811，保藏日期为2019年5月15日，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏分类命名为发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum。该菌株菌落乳白色，圆形，表面光滑，不透明，边缘整齐。菌体呈短杆状，0.3-0.4μm×1.1-2.6μm，单个或成对排列，革兰氏染色呈阳性，过氧化氢酶阴性。发酵乳杆菌CICC6278具有快速亚硝酸盐降解能力，在改良MRS液体培养基中培养24h，亚硝酸盐降解率能够达到100％，亚硝酸盐降解效率和速率均优于以往报道的菌株。发酵乳杆菌CICC6278具有较强的抑制致病微生物的能力，能够抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和沙门氏菌四种常见致病菌的生长。发酵乳杆菌CICC6278氨基酸脱羧酶为阴性，表明该菌株在生长代谢过程中产生生物胺的能力较弱。将发酵乳杆菌CICC6278应用于新疆特色辣椒的发酵生产过程中，所得到的发酵辣椒亚硝酸盐的含量0.53mg/kg,生物胺的含量为2.81mg/kg，降低了发酵辣椒中亚硝酸盐和生物胺，在一定程度上解决了亚硝酸盐和生物胺带来的食品安全问题。此外，接种该菌株的发酵辣椒的总酸含量达到2.84％。附图说明图1示专利技术所述发酵乳杆菌CICC6278的扫描电镜形态图2示专利技术所述发酵乳杆菌CICC6278的16SrRNA基因系统发育树图3示专利技术所述发酵乳杆菌CICC6278亚硝酸盐降解特性具体实施方案下面结合实施例对本专利技术进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。实施例1菌株CICC6278的鉴定本专利技术中的菌株CICC6278是从新疆传统发酵辣椒中分离筛选得到，利用多相鉴定学技术，从表型和基因型水平将该菌种鉴定为发酵乳杆菌。1、形态学鉴定参照《常见细菌系统鉴定手册》对菌株CICC6278进行形态特征进行鉴定，并对其进行扫描电镜观察(图1)。MRS培养基，37℃培养24h，菌株菌落乳白色，圆形，表面光滑，不透明，边缘整齐。菌体呈短杆状，0.3-0.4μm×1.1-2.6μm，单个或成对排列，革兰氏染色呈阳性，过氧化氢酶阴性。2、生理生化特征鉴定使用API50CHL鉴定系统进行菌株CICC6278的碳源利用产酸特性，具体鉴定结果见表1。表1副干酪乳杆菌CICC6277生理生化特征鉴定结果3、16SrRNA基因的PCR扩增使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取乳酸菌的基因组。利用引27f(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492r(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)对16SrRNA基因进行扩增。PCR反应体系为：模板10×PCRbuffer5μL、dNTP(2.5mmol/L)4μL、模板2μL、TaqDNA聚合酶1μL、引物各1μL,补充去离子水至50μL。反应条件:94℃5min，94℃50s，52℃50s，72℃50s，33个循环，72℃7min。4、序列分析将所得的16SrRNA基因序列用BLAST软件与NCBI数据库进行相似性比对，运用MEGA5.0软件采用NeighborJoining方法构建系统发育树。菌株CICC6278与发酵乳杆菌处于同一个分支(图2)，16SrRNA基因序列相似度为99.86％，且与其他菌株的相似度均在98.65％以下，再结合表型特征，鉴定为发酵乳杆菌。其16SrRNA基因序列登录号为MN314273。实施例2发酵乳杆菌CICC6278的特性研究1、亚硝酸盐降解能力按照GB5009.33-2010：《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》测定发酵乳杆菌CICC6278亚硝酸盐降解能力。1％接种量接种到含0.125mg/mLNaNO2的MRS培养基中，37℃培养24h，亚硝酸盐降解率能够达到100％(图3)。2、氨基酸脱羧酶试验微生物代谢过程中，在氨基酸脱羧酶作用下，生成生物胺类物质。筛选氨基酸脱羧酶为阴性的菌株作为发酵剂，会降低果蔬发酵生产中生物胺的含量。氨基酸脱羧酶试验结果表明，发酵乳杆菌CICC6278色氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶和鸟氨酸脱羧酶活性均为阴性。3、抑菌能力利用滤纸片法测定发酵乳杆菌CICC6278对肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的抑制程度。发酵乳杆菌CICC6278过夜培养物对肠炎沙门氏菌的抑菌直径达到24.2mm，对大肠杆菌的抑菌直径达到16.3mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径达到16.4mm，对单增李斯特菌抑菌直径达到12.2mm。实施例3发酵乳杆菌CICC6278在新疆特色辣椒发酵中的应用选择新鲜的新疆辣椒，清洗，破碎后，加入3％蔗糖和3％盐，接种1％发酵乳杆菌CICC6278(108CFU/mL)，3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发酵乳杆菌 (

【技术特征摘要】
1.一种发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CICC6278，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC17811。


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【专利技术属性】
技术研发人员：姚粟，何旻霞，付琳，程池，翟磊，陈其钢，戚晨晨，
申请(专利权)人：新疆中亚食品研发中心有限公司，中国食品发酵研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65