拮抗性PD-1、PD-L1和LAG-3结合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及拮抗性抗原结合蛋白、编码该拮抗性结合蛋白的核酸、包含该核酸分子的重组表达载体、包含该载体的宿主细胞、制备拮抗性抗原结合蛋白的方法、通过该方法制备的拮抗性结合蛋白以及包含拮抗性结合蛋白、核酸或载体的药物组合物。本发明专利技术还涉及包含所述药物组合物的试剂盒和所述拮抗性结合蛋白在治疗癌症和/或慢性感染性疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】拮抗性PD-1、PD-L1和LAG-3结合蛋白本专利技术涉及拮抗性抗原结合蛋白、编码该拮抗性结合蛋白的核酸、包含该核酸分子的重组表达载体、包含该载体的宿主细胞、制备拮抗性抗原结合蛋白的方法、通过该方法制备的拮抗性结合蛋白以及包含拮抗性结合蛋白、核酸或载体的药物组合物。本专利技术还涉及包含所述药物组合物的试剂盒和所述拮抗性结合蛋白在治疗癌症和/或慢性感染性疾病中的用途。专利技术背景参与抗肿瘤反应的免疫细胞的活化和增殖受多种刺激和抑制途径的调节。单克隆抗体(mAb)可以靶向多种刺激和抑制途径，这些单克隆抗体可以对T和B淋巴细胞或NK细胞表面表达的免疫抑制受体进行抑制或共刺激调节物进行活化(统称为免疫检查点)以增强它们的肿瘤特异性反应。这一概念在临床上的应用导致了新的有效免疫疗法的发展。迄今为止，已经批准了针对三类免疫抑制受体例如CTLA4(伊匹单抗)、PD-1(纳武单抗和派姆单抗)和PD-L1(阿特珠单抗、度伐单抗和Avelumab)的人或人源化单克隆抗体，用于治疗包括黑色素瘤、NSCLC、RCC、头颈鳞状细胞癌、霍奇金淋巴瘤、尿道上皮癌、MSICRC和Merkell细胞癌的多种肿瘤。在这些免疫疗法的巨大成功的刺激下，更多的针对其他免疫调节受体的抗体被引入临床，期望通过靶向新的免疫途径找到更有效的治疗方法。实际上，尽管取得了成功，但目前批准的针对免疫检查点的抗体(因此统称为检查点抑制剂；CI)仅对约20％至30％的患者有效。在新的靶标中，有共抑制受体例如淋巴细胞激活基因3(LAG3)、在活化的T淋巴细胞和T调节淋巴细胞上表达的免疫抑制受体、T细胞免疫球蛋白3(TIM-3)、在癌症中耗尽的CD8+T细胞上表达的T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)。除了改善CD8T细胞功能外，Lag-3、TIM-3和TIGIT阻滞有望影响肿瘤组织调节性T细胞(Treg细胞)和产生IL-10的Tr1细胞。B淋巴细胞和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)是另一种共抑制受体，其表达在T细胞活化过程中被诱导，这导致对人类CD8+癌症特异性T细胞的抑制。BTLA与B7同源物B7H4相互作用，但与PD-1和CTLA-4不同，BTLA通过与肿瘤坏死家族受体(TNF-R)相互作用而不仅与细胞表面受体B7家族相互作用，显示出抑制T细胞的作用。同样，识别共刺激受体的激动剂抗体也已进入临床阶段，例如OX40，它是一种防止活化淋巴细胞过早死亡的次级共刺激免疫检查点分子，以及在活化的CD4和CD8T淋巴细胞上表达的41BB。其他被认为是抗体介导的免疫治疗良好靶点的共刺激蛋白是诱导性T细胞共刺激蛋白(ICOS)，它是CD28超家族的免疫检查点蛋白，以及CD27，它是肿瘤坏死因子受体超家族的成员。基于免疫调节抗体的癌症免疫疗法正在成为现代肿瘤学的主流。已显示检查点抑制剂(即抗PD-1、抗PD-L1和抗CTLA4)可实现前所未有的功效，并具有长期的临床益处。也许最重要的是，这些抗体具有极其广泛的应用，目前已被批准用于治疗多种肿瘤。尽管如此，CI的治疗效果仍限于人群的20％至30％，并且在高度流行的癌症类型例如结肠癌和直肠癌、乳腺癌和前列腺癌中没有显示出治疗效果。然而，最近丰富了针对分别对共刺激或抑制受体具有激动或拮抗活性的新靶标的单克隆抗体库，允许设计新的联合疗法以增强基于免疫的癌症疗法的潜力。还可以将针对不同免疫检查点受体的抗体进行组合以实现累加或协同活性，从而有可能转化为更好的疗效。伊匹单抗和纳武单抗联合治疗转移性黑色素瘤的疗效高于单一治疗，这一发现为该方法的概念提供了证据。目前，正在进行超过一千项关于针对免疫调节受体的已批准或新颖的抗体的临床试验，这些抗体可用于单一疗法或与其他生物制剂或小分子组合使用。由于无法在一个实验室中获得针对不同免疫检查点的大量抗体，因此，这些试验中的大多数都没有进行临床前的面对面比较，从而预测最有效的治疗方法。本专利技术人已经使用通过在活化的人淋巴细胞上直接淘选来快速、平行筛选噬菌体展示的抗体文库的策略，产生了针对几个免疫调节检查点的大量完全人类mAb。证明了如此选择的mAb对其靶标具有高结合亲和力并且对淋巴细胞具有改善的功能活性。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术提供了拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-1，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合PD-1，所述抗体(i)包含SEQIDNO：2的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：3的氨基酸序列轻链可变区；或(ii)包含SEQIDNO：11的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：12的氨基酸序列轻链可变区。在第二方面，本专利技术涉及拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-L1，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合PD-L1，所述抗体(i)包含SEQIDNO：20的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：21的氨基酸序列轻链可变区；或(ii)包含SEQIDNO：29的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：30的氨基酸序列轻链可变区；(iii)包含SEQIDNO：83的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：84的氨基酸序列轻链可变区；或(iv)包含SEQIDNO：92的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：93的氨基酸序列轻链可变区；或(v)包含SEQIDNO：101的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：102的氨基酸序列轻链可变区。在第三方面，本专利技术涉及拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合LAG-3，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合LAG-3，所述抗体(i)包含SEQIDNO：38的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：39的氨基酸序列轻链可变区；(ii)包含SEQIDNO：47的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：48的氨基酸序列轻链可变区；(iii)包含SEQIDNO：56的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：57的氨基酸序列轻链可变区；(iv)包含SEQIDNO：65的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：66的氨基酸序列轻链可变区；或(v)包含SEQIDNO：74的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：75的氨基酸序列轻链可变区。在第四方面，本专利技术涉及拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-1，其中所述抗原结合蛋白包含以下任一种：(i)轻链可变域和重链可变域的组合，所述组合选自：含有与SEQIDNO：3具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和含有与SEQIDNO：2具有至少90％同一性的序列的重链可变域；含有与SEQIDNO：12具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和含有与SEQIDNO：11具有至少90％同一性的序列的重链可变域；(ii)重链的互补决定区3(CDRH3)和轻链的互补决定区3(CDRL3)的组合，所述组合选自：包含或组成为SEQIDNO：8的氨基酸序列的CDRH3和包含或组成为SEQIDNO：9的氨基酸序列的CDRL3；包含或组成为SEQIDNO：1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-1，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合PD-1，所述抗体/n(i)包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列重链可变区；和SEQ ID NO：3的氨基酸序列轻链可变区；或/n(ii)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列重链可变区；和SEQ ID NO：12的氨基酸序列轻链可变区。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180322 EP 18163432.01.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-1，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合PD-1，所述抗体
(i)包含SEQIDNO：2的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：3的氨基酸序列轻链可变区；或
(ii)包含SEQIDNO：11的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：12的氨基酸序列轻链可变区。


2.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-L1，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合PD-L1，所述抗体
(i)包含SEQIDNO：20的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：21的氨基酸序列轻链可变区；或
(ii)包含SEQIDNO：29的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：30的氨基酸序列轻链可变区；
(iii)包含SEQIDNO：83的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：84的氨基酸序列轻链可变区；或
(iv)包含SEQIDNO：92的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：93的氨基酸序列轻链可变区；或
(v)包含SEQIDNO：101的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：102的氨基酸序列轻链可变区。


3.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合LAG-3，其中所述抗原结合蛋白与抗体竞争结合LAG-3，所述抗体
(i)包含SEQIDNO：38的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：39的氨基酸序列轻链可变区；
(ii)包含SEQIDNO：47的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：48的氨基酸序列轻链可变区；
(iii)包含SEQIDNO：56的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：57的氨基酸序列轻链可变区；
(iv)包含SEQIDNO：65的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：66的氨基酸序列轻链可变区；或
(v)包含SEQIDNO：74的氨基酸序列重链可变区；和SEQIDNO：75的氨基酸序列轻链可变区。


4.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-1，其中所述抗原结合蛋白包含以下任一种
(i)轻链可变域和重链可变域的组合，所述组合选自：
含有与SEQIDNO：3具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：2具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
含有与SEQIDNO：12具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：11具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
(ii)重链的互补决定区3(CDRH3)和轻链的互补决定区3(CDRL3)的组合，所述组合选自：
包含或组成为SEQIDNO：8的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：9的氨基酸序列的CDRL3；
包含或组成为SEQIDNO：17的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：18的氨基酸序列的CDRL3，
优选还包含选自以下的一种或多于一种：包含或组成为SEQIDNO：4或13的氨基酸序列的CDRH1、包含或组成为SEQIDNO：6或15的氨基酸序列的CDRH2、包含或组成为SEQIDNO：5或14的氨基酸序列的CDRL1和包含或组成为SEQIDNO：7或16的氨基酸序列的CDRL2。


5.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结合PD-L1，其中所述抗原结合蛋白包含以下任一种
(i)轻链可变域和重链可变域的组合，所述组合选自：
含有与SEQIDNO：21具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：20具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
含有与SEQIDNO：30具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：29具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
含有与SEQIDNO：84具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：83具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
含有与SEQIDNO：93具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：92具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
含有与SEQIDNO：102具有至少90％同一性的序列的轻链可变域和
含有与SEQIDNO：101具有至少90％同一性的序列的重链可变域；
(ii)重链的互补决定区3(CDRH3)和轻链的互补决定区3(CDRL3)的组合，所述组合选自：
包含或组成为SEQIDNO：26的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：27的氨基酸序列的CDRL3；
包含或组成为SEQIDNO：35的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：36的氨基酸序列的CDRL3；
包含或组成为SEQIDNO：89的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：90的氨基酸序列的CDRL3；
包含或组成为SEQIDNO：98的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：99的氨基酸序列的CDRL3；
包含或组成为SEQIDNO：107的氨基酸序列的CDRH3和
包含或组成为SEQIDNO：108的氨基酸序列的CDRL3，
优选还包含选自以下的一种或多于一种：包含或组成为SEQIDNO：22、31、85、94或103的氨基酸序列的CDRH1、包含或组成为SEQIDNO：24、33、87、96或105的氨基酸序列的CDRH2、包含或组成为SEQIDNO：23、32、86、95或104的氨基酸序列的CDRL1和包含SEQIDNO：25、34、88、97或106的氨基酸序列的CDRL2。


6.一种拮抗性抗原结合蛋白，其特异性结...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿尔弗雷多·尼科西亚，尼古拉·赞布拉诺，埃马努埃莱·萨索，克劳迪娅·德洛伦佐，
申请(专利权)人：柯伊莱斯股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH