一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，包括：将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；将上述混匀液离心，弃上清；加入乙醇清洗，离心后弃上清液；向离心管中加ddH

【技术实现步骤摘要】
一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法
本专利技术涉及DNA的提取方法，特别涉及一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法。
技术介绍
荞麦为蓼科，荞麦属的双子叶植物，在我国已有2700年的种植历史，作为小宗农作物，荞麦具有抗旱耐贫瘠、适播期时间范围宽、生长期短、药食同源等特点。目前国际上已经利用基因组学等现代生物技术开展荞麦育种工作。荞麦基因组学主要涉及到荞麦的丰产、抗逆、抗病虫等重要农艺性状挖掘及分子机理的研究。对于荞麦分子机理和基因功能的研究，快速高质量的提取DNA是重要基础和前提。但是目前还没有专门进行荞麦叶片基因组DNA的方法研究，因此针对荞麦专门研究快速、简便的提取其DNA方法具有重要意义。目前荞麦DNA的主要提取方法还是借鉴传统的CTAB法，这种方法能够提取纯度较高的DNA样品，但是由于步骤繁琐，需要的时间较长，一般需要2个小时以上，且成本较高，并不适合进行高通量研究。因此，开发一种简单、方便、能够快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法对于研究荞麦重要农艺性状的基因及其功能具有重要作用。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术目的是提供一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法。技术方案：本专利技术提供一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，包括如下步骤：(1)将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；(2)在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；(3)向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；(4)离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；(5)将上述混匀液离心，弃上清；(6)加入乙醇清洗，离心后弃上清液；(7)向离心管中加ddH2O溶解，即为荞麦基因组DNA。进一步地，所述步骤(1)中先将提取液预热。进一步地，所述步骤(2)中泡沫箱密封后进行上下颠倒和左右摇晃。进一步地，所述步骤(2)中当泡沫箱中的离心管高度达到泡沫箱深度一半时，倒入液氮。进一步地，所述步骤(6)中乙醇浓度为70％。有益效果：本专利技术所需时间短、提取步骤简单，可在约30分钟～1小时内提取大量荞麦叶片基因组DNA，比传统CTAB法缩短时间50％以上。该方法所用设备试剂价格低廉，无需专门磨样机，比传统的CTAB法试剂节省50％的成本，更适合高通量基因组DNA的提取，适合当前分子标记辅助育种的高通量筛选。附图说明图1为荞麦叶片基因组DNA的提取结果图，其中ddH2O作为空白对照。具体实施方式本实施例的提取方法如下：取用3～4叶龄的荞麦嫩叶进行基因组DNA提取，也可以选用成熟叶片进行基因组DNA提取，荞麦叶片DNA快速提取的方法按照以下步骤操作：1、将约300mg装入2ml离心管中，放入0.5g0.5mm的小玻璃珠，随后将离心管放入长宽高均为20cm的泡沫箱中；对于批量提取荞麦叶片基因组DNA，可以同时放入数百个含有叶片的离心管；2、在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管。随后将泡沫箱密封好后人工摇晃泡沫箱5～10次，使内部叶片粉末化；3、在含有粉末化的2.0ml离心管中加入500μl提取液(可先将提取液置于65℃烘箱中预热)，随后置于96孔离心管架上，上下颠倒和左右摇晃，使得提取液和叶片粉末完全混合，随后置于65℃烘箱中温浴10～15min，期间摇晃混匀几次；随后加入等体积的酚氯仿异戊醇，上下颠倒用力混匀后12000r/min离心10min(Eppendorf高速冷冻离心机)；其中提取液配方为：乙二胺四乙酸(EDTA)9.3g/L，十二烷基磺酸钠(SDS)5g/L，氯化钠(NaCl)14.5g/L，三羟甲基氨基甲烷(Tris)24.2g/L，调节pH至7.5。酚氯仿异戊醇比例：25∶24∶1(体积比)4、离心后取500～600μl上清液于新的1.5ml离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，上下颠倒混匀，置于-20℃冰箱中冷浴5min；5、将上述混匀液12000r/min离心10min，弃上清；6、加入70％的乙醇清洗，5000r/min离心2min，缓慢弃上清液，将离心管置于通风橱内吹干(约需3-5min)；7.每个离心管中加50μlddH2O溶解，即为荞麦基因组DNA。8、将溶解的DNA于1％的琼脂糖凝胶中进行电泳检测，如附图。电泳图中泳道1-4分别为Marker(DL5000，从上到下的条带大小分别为5000bp，3000bp，2000bp，1500bp，1000bp，750bp，250bp，100bp)，空白对照ddH2O和2个荞麦叶片样本的提取结果，从图中可以看到2个荞麦叶片样本均获得了清晰的基因组DNA条带，其大小比较完整，基本上无降解，达到了预期的效果。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；/n(2)在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；/n(3)向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；/n(4)离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；/n(5)将上述混匀液离心，弃上清；/n(6)加入乙醇清洗，离心后弃上清液；/n(7)向离心管中加ddH

【技术特征摘要】
1.一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；
(2)在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；
(3)向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；
(4)离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；
(5)将上述混匀液离心，弃上清；
(6)加入乙醇清洗，离心后弃上清液；
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【专利技术属性】
技术研发人员：殷从飞，余海波，赵艳岭，孟婉冰，介瑞雪，曹缘，葛宛婷，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32