一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，属于生物技术领域。本发明专利技术公开的一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，以毛蕊花糖苷含量等效代替裸花紫珠中总苯乙醇苷含量作为含量考察指标，以吸附率‑解吸率为综合考察指标，筛选出纯化裸花紫珠苯乙醇苷最优类型的大孔树脂，考察大孔树脂纯化裸花紫珠苯乙醇苷的吸附动力学与热力学特征，为苯乙醇苷的提取纯化工艺研究提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法
本专利技术涉及生物
，更具体地说是涉及一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法。
技术介绍
裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.exArn.)为马鞭草科紫珠属植物的干燥地上部分，主产于我国的海南、广东、江西等地；具有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿，驱风除湿之功效；主治化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、创伤出血等症；外用治烧、烫伤及外伤出血等。裸花紫珠中含有多种化学成分：黄酮类、苯乙醇苷类、萜类、酚酸类、挥发油类，具有抗炎、止血、抗脂质过氧化、抗菌等多种药理作用。裸花紫珠中苯乙醇苷类化合物含量很高，主要有连翘酯苷B(FB)、毛蕊花糖苷(类叶升麻苷，AS)、异毛蕊花糖苷(异类叶升麻苷，IAS)等，这些苯乙醇苷类成分具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、增强记忆力等药理活性。符健等用试管体外抗菌试验的方法对裸花紫珠片进行了药理研究，结果显示其对肺炎球菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等菌有不同程度的抑制作用。说明裸花紫珠片是一种较好的抗菌药物。另有研究发现，含类叶升麻苷的植物提取物对血小板聚集及5-羟色氨的释放有明显的抑制作用；在切除创伤模型中，类叶升麻苷和Teupolioside能加速伤口愈合，这些作用不仅和清除自由基活性有关，还与有效抑制一些炎症因子(如TNF-α、IFN-γ)的释放有关，显示出良好的抗炎作用。从中草药马先蒿中分离得到的类叶升麻苷、异类叶升麻苷、松果菊苷等苯乙醇苷类化合物对肝癌SMMC-7721、肺腺癌L342及胃腺癌MGC-803细胞具有较为明显的抑制活性。此外，类叶升麻苷还可通过调节端粒末端转移酶及细胞循环干预细胞的分化和凋亡，抑制端粒酶的产生而产生抗肿瘤活性，表明其具有显著的抗肿瘤作用。另外，苯乙醇苷类化合物具有较强的抗氧化活性及较强的自由基清除作用。从地黄中分离的得到的类叶升麻苷、异类叶升麻苷等苯乙醇苷类化合物具有较好的免疫抑制作用。PiaoJH等发现在东莨菪碱致小鼠记忆障碍模型中，类叶升麻苷可延长跳台实验的平台停留期，并减少错误次数；在水迷宫实验中，可提高正确反应百分率，并能拮抗东莨菪碱所引起的大脑皮层乙酰胆碱酯酶的增高及皮层、纹状体M受体最大结合力的降低，表明其有增强记忆力的作用。目前，学者们对中药活性成分在大孔树脂上的吸附行为、分离理论等的研究主要集中在其热力学与动力学两方面。大孔吸附树脂动力学研究主要涉及靶标分子在大孔吸附树脂表面吸附过程中的吸附机理、活化能、决速步及靶标分子在颗粒内的扩散行为模式等内容。通常采用准一级动力学方程，准二级动力学方程和颗粒内扩散方程对吸附过程进行拟合。大孔吸附树脂吸附热力学的研究主要通过考察靶标分子在树脂表面吸附的吸附等温线，结合Langmuir与Freundlich等模型判断靶标分子在大孔吸附树脂表面的吸附方式。董媛媛等以吸附率、洗脱率为综合评价指标，通过静态吸附-洗脱试验，从11种大孔吸附树脂中筛选适合纯化南五味子总三萜的大孔树脂类型，最终选择AB-8型大孔树脂，动力学研究表明：AB-8型大孔树脂对南五味子总三萜的吸附行为符合准二级动力学方程，吸附速率由液膜扩散和颗粒内扩散共同控制；平衡吸附数据符合Freundlich等温方程，属于多分子层吸附，且高温有利于吸附。孙磊等以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色剂，采用可见光分光光度法测定了不同温度时的吸附等温线和不同起始浓度下的吸附动力学曲线，结果表明吸附平衡数据符合Freundlich方程、Lagergren一级速率方程和Dumwald-Wagner颗粒内扩散方程，相关性均良好。证明该吸附过程为吸热过程，自发进行，高温有利于吸附，吸附速率主要由颗粒内扩散控制。由于苯乙醇苷类化合物具有多种药理活性，其应用前景非常广阔，其提取纯化技术越来越成为研究的热点。目前国内对裸花紫珠苯乙醇苷的研究大部分只停留在成分分析与含量测定，对其纯化工艺的研究较少。因此，提供一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，具体步骤如下：(1)制备裸花紫珠供试液称取裸花紫珠的干燥叶300g，剪碎，置于圆底烧瓶中，分别以20、15倍水加热回流提取两次，第一次2h，第二次1h，过滤后合并滤液，减压浓缩至约0.25g/mL，按12％加入1％壳聚糖澄清，3000r/min离心10min后取上清液，4℃冷藏备用；(2)大孔树脂预处理将SP-825型或SP-207型大孔树脂用95％乙醇浸泡过夜，湿法装柱，先用95％乙醇洗至流出液加数倍量水无白色浑浊，再加水洗至无醇味后备用；(3)以料液比1:12.5精密加入裸花紫珠供试液，32℃、120r/min，恒温振荡吸附6h，在332nm下采用紫外分光光度计测定吸光度值，计算总苯乙醇苷吸附量。进一步，步骤(2)所述SP-825型或SP-207型大孔树脂是以吸附率-解吸率为综合考察指标筛选获得的，并对其进行静态吸附动力学和静态吸附热力学研究。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，以毛蕊花糖苷含量等效代替裸花紫珠中总苯乙醇苷含量作为含量考察指标，以吸附率-解吸率为综合考察指标，筛选出纯化裸花紫珠苯乙醇苷最优类型的大孔树脂，考察大孔树脂纯化裸花紫珠苯乙醇苷的吸附动力学与热力学特征，为苯乙醇苷的提取纯化工艺研究提供参考。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术毛蕊花糖苷对照品的紫外吸收光谱扫描图；图2附图为本专利技术裸花紫珠供试液的紫外吸收光谱扫描图；图3附图为本专利技术不同振荡速率对苯乙醇苷类成分的吸附影响；图4附图为本专利技术SP-825、SP-207静态吸附动力学曲线。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。裸花紫珠药材(含叶、花、枝、茎)采自海南省白沙县，经海南医学院药学院曾念开教授鉴定为马鞭草科紫珠属植物裸花紫珠(CallicarpanudifloraHookEtArn.)的干燥地上部分。大孔吸附树脂：AB-8、X-5(杭州普修生物技术科技有限公司)，SP-207、SP-825、HP2MGL(上海摩速科学器材有限公司)，D101(国药集团化学试剂有限公司)，HP-20(四川百斯特化学本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)制备裸花紫珠供试液/n称取裸花紫珠的干燥叶300g，剪碎，置于圆底烧瓶中，分别以20、15倍水加热回流提取两次，第一次2h，第二次1h，过滤后合并滤液，减压浓缩至约0.25g/mL，按12％加入1％壳聚糖澄清，3000r/min离心10min后取上清液，4℃冷藏备用；/n(2)大孔树脂预处理/n将SP-825型或SP-207型大孔树脂用95％乙醇浸泡过夜，湿法装柱，先用95％乙醇洗至流出液加数倍量水无白色浑浊，再加水洗至无醇味后备用；/n(3)以料液比1:12.5精密加入裸花紫珠供试液，32℃、120r/min，恒温振荡吸附6h，在332nm下采用紫外分光光度计测定吸附前后溶液的吸光度值，计算总苯乙醇苷吸附量。/n

【技术特征摘要】
20200629 CN 20201061051631.一种裸花紫珠苯乙醇苷的分离纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)制备裸花紫珠供试液
称取裸花紫珠的干燥叶300g，剪碎，置于圆底烧瓶中，分别以20、15倍水加热回流提取两次，第一次2h，第二次1h，过滤后合并滤液，减压浓缩至约0.25g/mL，按12％加入1％壳聚糖澄清，3000r/min离心10min后取上清液，4℃冷藏备用；
(2)大孔树脂预处理
将SP-825型或SP-207型大孔树...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，邱军强，邹明明，秦贞苗，张玉卓，吴璐伶，谢惠菁，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：海南;46