一种花毛茛再生体系的方法技术

本发明专利技术提供了一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基及其在建立花毛茛再生体系中的应用，涉及植物组培快繁技术领域。本发明专利技术所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6‑BA 2.4‑2.8mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L和碳纳米管0.5～1.5mg/L。本发明专利技术所述培养基可以诱导花毛茛产生愈伤组织，由愈伤组织诱导出丛生芽，建立起花毛茛的再生体系，约需要3个月的时间；经由愈伤组织诱导出的丛生芽数量多，芽生长速度快，可大幅度的提高了其繁殖系数，同时加快了其繁殖的速度，极大的降低花毛茛组培苗的成本。

【技术实现步骤摘要】
一种花毛茛再生体系的方法
本专利技术属于植物组培快繁
，具体涉及一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基及其在建立花毛茛再生体系中的应用。
技术介绍
花毛茛(RanunculusasiaticusL.)，又称草牡丹、波斯毛茛、洋牡丹。毛茛科、毛茛属宿根草本花卉。原产于原产土耳其、叙利亚、伊朗以及欧洲东南部。花毛茛花色鲜艳丰富，有红、白、橙、粉等色，具较高的观赏价值，在欧美已广泛种植，现世界各国均有栽培，我国早在上世纪八十年代就开始引进种植。在新西兰、荷兰、日本、美国、以色列等国家已建立起完善的生产繁殖技术体系。在我花毛茛的引种栽培也越来越多，许多盆花和切花的生产者已初见成效。做为“世纪的花卉之星”花毛茛有着巨大的发展潜力和喜人的发展前景。目前尚未见到花毛茛组培报道。现有的花毛茛均以播种为主。由于播种过程中不产生愈伤组织，无法建立遗传转化体系，无法实现对其进行分子生物学水平的遗传改良。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基及其在建立花毛茛再生体系中的应用，经由愈伤组织诱导出的丛生芽数量多，芽生长速度快，可大幅度的提高了其繁殖系数，同时加快了其繁殖的速度，极大的有利于降低花毛茛组培苗的成本。而且利用愈伤组织，有望建立花毛茛高效的遗传转化体系，从而可以对花毛茛进行多种遗传操作或生物工程研究，从分子生物学水平对其进行遗传改良，培育新的花毛茛品种。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.4-2.8mg/L、NAA0.5～1.0mg/L。本专利技术还提供了所述培养基在建立花毛茛再生体系中的应用。本专利技术还提供了一种建立花毛茛再生体系的方法，包括以下步骤：(1)以消毒后的已萌芽花毛茛块茎为外植体，将所述外植体接种于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得分化不定芽；所述芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.5～3.5mg/L、NAA0.2～0.4mg/L；(2)将所述分化不定芽接种至芽壮芽培养基上进行第一壮芽培养，得带块茎的幼苗；所述壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA1.8-2.2mg/L、NAA0.2-0.3mg/L；(3)分离所述带块茎的幼苗上的块茎，将所述块茎接种于所述诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基上进行愈伤诱导培养，得愈伤组织；(4)将所诉愈伤组织接种至增殖培养基上进行增殖培养，获得大量愈伤组织；(5)将所述愈伤组织接种于所述芽诱导培养基上进行分化培养，得愈伤不定芽；(6)将所述愈伤不定芽接种于不定芽壮芽培养基上进行第二壮芽培养，得带块茎的愈伤分化苗；所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA1.5-2.0mg/L、NAA0.1-0.2mg/L；(7)将所述带块茎的愈伤分化苗接种于壮苗和生根共培养培养基上进行共培养，得花毛茛再生苗；所述壮苗和生根共培养培养基以MS为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA1.8-2.2mg/L、NAA0.4-0.8mg/L和IBA2.0-3.0mg/L。优选的，步骤(1)所述芽诱导培养的温度为21±1℃，光照强度为3000～4000lx，光照时间为12h/d，所述芽诱导培养的时间为30～40d。优选的，步骤(2)所述第一壮芽培养的温度为21±1℃，光照强度为300-400μmol·m-2·s-1，光照时间12h/d；所述第一壮芽培养的时间为60～90d。优选的，步骤(3)所述愈伤诱导培养的温度为21±1℃，暗培养。优选的，步骤(4)将所述愈伤组织接种于所述增殖培养基上进行增殖培养，获得大量愈伤组织；优选的，步骤(5)所述分化培养的温度为21±1℃，光照强度为300-400μmol·m-2·s-1，光照时间为12h/d；所述分化培养的时间为20-21d。优选的，步骤(6)所述第二壮芽培养的温度为21±1℃，光照强度为300-400μmol·m-2·s-1，光照时间12h/d；所述第一壮芽培养的时间为30～60d。优选的，步骤(7)所述共培养的温度为21±1℃，光照强度300-400μmol·m-2·s-1，光照时为16h/d；所述共培养的时间为29～35d。本专利技术提供了一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.4-2.8mg/L、NAA0.5～1.0mg/L。本专利技术所述培养基可以诱导花毛茛产生愈伤组织，可将其用于花毛茛再生体系的建立。本专利技术还提供了一种建立花毛茛再生体系的方法，以块茎为外植体诱导丛生芽长成无菌子球，再由无菌子球诱导出愈伤组织，由愈伤组织再次诱导出丛生芽，建立起花毛茛的再生体系，约需要9-10个月的时间；经由愈伤组织诱导出的丛生芽数量多，芽生长速度快，可大幅度的提高了其繁殖系数，同时加快了其繁殖的速度，极大的有利于降低花毛茛组培苗的成本。而且利用愈伤组织，有望建立花毛茛高效的遗传转化体系，从而可以对花毛茛进行多种遗传操作或生物工程研究，从分子生物学水平对其进行遗传改良，培育新的花毛茛品种。附图说明图1愈伤诱导；图2愈伤产生；图3：愈伤诱导芽；图4：芽形成及分芽扩繁；图5生根诱导及成苗。具体实施方式本专利技术提供了一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.4-2.8mg/L、NAA0.5～1.0mg/L。本专利技术所述培养基中包括6-BA，所述6-BA的浓度优选为2.4-2.8mg/L，更优选为2.5mg/L。本专利技术中所述6-BA发挥了促进细胞分裂进而形成愈伤组织作用。本专利技术对所述6-BA的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。本专利技术所述培养基中包括NAA，所述NAA的浓度优选为0.5-1.0mg/L，更优选为0.8mg/L。本专利技术中所述NAA发挥了促进细胞分裂和体积膨大的作用。本专利技术对所述NAA的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。在本专利技术所述培养基中，初代培养中使用了较高浓度的细胞分裂素6-BA，促进了块茎细胞的脱分化，从而诱导产生了愈伤组织。本专利技术还提供了所述培养基在建立花毛茛再生体系中的应用。本专利技术还提供了一种建立花毛茛再生体系的方法，包括以下步骤：(1)以消毒后的已萌芽花毛茛块茎为外植体，将所述外植体接种于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得分化不定芽；所述芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.5～3.5mg/L、NAA0.2～0.4mg/L；(2)将所述分化不定芽接种至芽增殖培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，其特征在于，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA 2.4-2.8mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，其特征在于，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.4-2.8mg/L、NAA0.5～1.0mg/L。


2.权利要求1所述培养基在建立花毛茛再生体系中的应用。


3.一种建立花毛茛再生体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以消毒后的花毛茛块茎为外植体，将所述外植体接种于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得分化不定芽；所述芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA2.5～3.5mg/L、NAA0.2～0.4mg/L；
(2)将所述分化不定芽接种至芽增殖培养基上进行第一壮芽培养，得带块茎的幼苗；所述壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA1.8-2.2mg/L、NAA0.2-0.3mg/L；
(3)分离幼苗后的块茎接种于所述诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基上进行愈伤诱导培养，得愈伤组织；
(4)将所述愈伤组织接种于所述增殖培养基上进行增殖培养，获得大量愈伤组织；
(5)将所述愈伤组织接种于所述芽诱导培养基上进行分化培养，得愈伤不定芽；
(6)将所述愈伤不定芽接种于不定芽壮芽培养基上进行第二壮芽培养，得带块茎的愈伤分化苗；所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA1.5-2.0mg/L、NAA0.1-0.2mg/L；
(7)将所述带块茎的愈伤分化苗接种于壮苗和生根共培养培养基上进行共培养，得花毛茛再生苗；所述壮苗和生根共培养培养基以MS为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾永华，陈梅香，郑玉红，宋正达，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32