一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种对人黑色素瘤抗原MAGE‑A3具有结合亲和力的多肽及其用途。首次揭示了一种对MAGE‑A3蛋白具有结合亲和力的多肽；本发明专利技术还提供了该多肽的在诊断检测中的应用，并作为靶向载体在药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽及其用途
本专利技术涉及生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白(MAGE-A3)具有结合亲和力的多肽及其应用。
技术介绍
肿瘤是全球的多发病和常见病，恶性肿瘤死亡率均位居全部疾病死亡之首，其中肺癌的发病率和死亡率在全球范围内均居首位，胃癌位居恶性肿瘤死亡的第二位，乳腺癌则是女性死亡的首位因素。目前，我国肺癌发病率已呈现爆发式增长的趋势，而胃癌每年的发病率持续上升，且呈现显著的年轻化趋势。MAGE基因首先在黑色素瘤细胞系中发现，是一个包括A、B、C、D、E和F六个亚家族组成的大家族，其中MAGE-A3基因不仅表达于以黑色素瘤为主的恶性肿瘤组织中，还以较大比例表达于多种组织类型的各种肿瘤,如肺癌、乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、骨肉瘤、白血病、膀胱癌、脑瘤和卵巢肿瘤等，尤其消化道肿瘤如胃癌、食道癌、结肠直肠癌等均可呈高表达。MAGE-A3在除睾丸和胎盘组织外的正常组织细胞均不表达，由于睾丸和胎盘组织的固有生理屏障可避免由MAGE-A3被识别产生的自身免疫损伤。因此，目前认为MAGE-A3是肿瘤特异性免疫治疗和诊断的理想靶抗原。靶向治疗是目前肿瘤治疗中最具希望的方法和策略，主要以表皮生长因子受体(EGFR)和肿瘤血管生成为靶点进行治疗，如EGFR单克隆抗体(HER2单抗)、小分子化合物酪氨酸激酶拮抗剂(赫赛汀，Herceptin和西妥昔单抗等)、贝伐单抗(rhuMAb-VEGF)及舒尼替尼等，通过特异性阻断肿瘤细胞的信号传导或是通过封闭受体阻止肿瘤血管生成，从而抑制肿瘤细胞生长或促使肿瘤细胞凋亡。但基于抗体分子的靶向治疗仍然存在其应用的局限性，如渗透性差、成本昂贵、具有较强的免疫原性和毒副反应严重等有待进一步研究改善。尤其毒副作用产生的毒性效应已经成为发展针对癌症治疗性抗体的主要障碍，产生肝、肾及神经系统毒性而使其功能降低。如与HER2靶向抗体trastuzumab(Herceptin)相关的心脏毒性效应。用同位素标记抗体进行放射性免疫治疗也会导致骨髓抑制等。基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗MAGE-A3表达阳性相关肿瘤疾病的新药物或新方法，以改善目前临床现状。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽及其用途。本专利技术的第一方面，提供一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽，该多肽相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，序列如SEQIDNO:1所示，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的：第9位氨基酸突变为P或T；第10位氨基酸突变为P或L；第11位氨基酸突变为C或I；第13位氨基酸突变为R或L；第14位氨基酸突变为W或F；第17位氨基酸突变为M或S；第18位氨基酸突变为A或F；第24位氨基酸突变为R或P；第25位氨基酸突变为Q或A；第27位氨基酸突变为H或V；第28位氨基酸突变为L或G；第32位氨基酸突变为P；第35位氨基酸突变为L或G；第43位氨基酸突变为E。在一优选例中，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2-3任一所示。在另一优选例中，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽与人黑色素瘤抗原A3蛋白相互作用的KD值为1.03×10-5M至3.28×10-6M。在本专利技术的另一方面，提供一种靶向人黑色素瘤抗原A3蛋白的靶向性分子，所述的靶向性分子包括前面任一所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物，偶联物优先的与多肽偶联，所述的偶联物包括但不限于：半胱氨酸残基，多肽标签，抑制人黑色素瘤的药物，或可检测标记物，可检测标记物包括但不限于如荧光标记，酶，生物素或放射性同位素。在一个优选例中，所述的偶联物是肽，所述的偶联物与所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽构成融合多肽。在另一优选例中，所述的多肽标签包括但不限于：His标签，优选为6×His，Myc标签，GST标签，Flag标签。在另一优选例中，所述的抑制人黑色素瘤的药物包括但不限于：毒素；较佳地，所述毒素是具有抑制人黑色素瘤抗原A3蛋白阳性肿瘤作用的毒素，如白喉毒素、蓖麻毒素、绿脓杆菌外毒素或所述毒素的功能性片段；且，所述的肿瘤是人黑色素瘤抗原A3蛋白阳性的肿瘤。在另一优选例中，所述的毒素是绿脓杆菌外毒素A，或所述毒素的功能性片段是绿脓杆菌外毒素A的活性片段PE38KDEL。较佳地，该绿脓杆菌外毒素A或其功能性片段连接于所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的羧基末端，优选连接在多肽的C末端。在另一优选例中，所述的偶联物与所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽以柔性肽连接，所述柔性肽包括但不限于：(Gly4Ser)3。在本专利技术的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，其编码前面任一所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽。在本专利技术的另一方面，提供一种多核苷酸，其编码所述的靶向人黑色素瘤抗原A3蛋白的靶向性分子，且其中所述的偶联物是肽。在本专利技术的另一方面，提供一种重组载体，该载体包含所述的多核苷酸。在本专利技术的另一方面，提供一种宿主细胞，该宿主细胞包含所述的重组载体，或其包含有或基因组中整合有所述的多核苷酸。在本专利技术的另一方面，提供一种制备前面任一所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的方法，所述方法包括：(1)培养所述的细胞，从而表达所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽；(2)分离纯化(1)获得的多肽。在本专利技术的另一方面，提供一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的用途，用于制备检测人黑色素瘤抗原A3蛋白的检测试剂中的应用，或者在制备诊断人黑色素瘤抗原A3蛋白表达阳性肿瘤的诊断试剂的应用，所述多肽是以葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列作为骨架，进行12-20个氨基酸变异后获得的多肽。在一个优选例中，相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列(SEQIDNO:1)，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽在第9-11，13-14，17-18，24-25，27-28，32，35，43位上发生氨基酸突变。在另一优选例中，相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，序列如SEQIDNO:1所示，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的：第9位氨基酸突变为P或T；第10位氨基酸突变为P或L；第11位氨基酸突变为C或I；第13位氨基酸突变为R或L；第14位氨基酸突变为W或F；第17位氨基酸突变为M或S；第18位氨基酸突变为A或F；第24位氨基酸突变为R或P；第25位氨基酸突变为Q或A；第27位氨基酸突变为H或V；第28位氨基酸突变为L或G；第32位氨基酸突变为P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于，相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，序列如SEQ ID NO:1所示，该多肽的：/n第9位氨基酸突变为P或T；/n第10位氨基酸突变为P或L；/n第11位氨基酸突变为C或I；/n第13位氨基酸突变为R或L；/n第14位氨基酸突变为W或F；/n第17位氨基酸突变为M或S；/n第18位氨基酸突变为A或F；/n第24位氨基酸突变为R或P；/n第25位氨基酸突变为Q或A；/n第27位氨基酸突变为H或V；/n第28位氨基酸突变为L或G；/n第32位氨基酸突变为P；/n第35位氨基酸突变为L或G；/n第43位氨基酸突变为E。/n

【技术特征摘要】
1.一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于，相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，序列如SEQIDNO:1所示，该多肽的：
第9位氨基酸突变为P或T；
第10位氨基酸突变为P或L；
第11位氨基酸突变为C或I；
第13位氨基酸突变为R或L；
第14位氨基酸突变为W或F；
第17位氨基酸突变为M或S；
第18位氨基酸突变为A或F；
第24位氨基酸突变为R或P；
第25位氨基酸突变为Q或A；
第27位氨基酸突变为H或V；
第28位氨基酸突变为L或G；
第32位氨基酸突变为P；
第35位氨基酸突变为L或G；
第43位氨基酸突变为E。


2.如权利要求1所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于，所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2-3任一所示。


3.如权利要求1或2所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于，该多肽与人黑色素瘤抗原A3蛋白相互作用的KD值为1.03×10-5M至3.28×10-6M。


4.一种靶向人黑色素瘤抗原A3蛋白的靶向性分子，其特征在于，所述的靶向性分子包括权利要求1-3任一所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物，所述的偶联物包括：半胱氨酸残基，多肽标签，抑制人黑色素瘤抗原A3蛋白表达阳性肿瘤的药物，或可检测标记物。


5.如权利要求4所述的靶向人黑色素瘤抗原A3蛋白的靶向性分子，其特征在于，所述的抑制人黑色素瘤抗原A3蛋白表达阳性肿瘤的药物包括：毒素；所述毒素是具有抑制肿瘤作用的毒素，如白喉毒素、蓖麻毒素、绿脓杆菌外毒素或所述毒素的功能性片段；且，所述的肿瘤是人黑色素瘤抗原A3蛋白表达阳性的肿瘤。


6.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-3任一所述的对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽。


7.一种重组载体，其特征在于，该载体包含权利要求6所述的多核苷酸。


8.一种宿...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽芳，朱珊丽，薛向阳，蒋朋飞，陈俊，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33