一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于农业微生物技术领域，具体提供了一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用，该组合由特定的凝结芽孢杆菌（

【技术实现步骤摘要】
一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用
本专利技术属于农业微生物
，具体涉及一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
烟草是我国一种重要的经济作物，主要集中在云南、贵州、重庆、湖北、湖南等省，在国民经济中占有重要地位。在烟草生产中，育苗是烟叶生产的重要环节。当前烟叶生产采用的是育苗移栽的生产方式，即集中培育烟苗，成苗后移栽于大田。这样做的优点主要有：经济利用土地，提高复种指数；将烟苗集中于光、温、水优越的环境中，快速成活且生长均匀一致；克服无霜期的限制，延长烟草大田生长期。培育壮苗是优质烟叶生产的基础，因此一直以来我国烟草行业非常重视烟草育苗技术的研发，目前主要以漂浮育苗、托盘育苗和常规育苗为主。培育壮苗是烟草优质高产的基础，国内外都十分重视烟草育苗工作。在苗期接种优良的微生物菌种，可改善烟苗营养状况，促进生理代谢、增强抗逆性、提高烟苗素质、培育壮苗进而有益于提高烟叶产量和质量。基质是烟苗根系生长的环境，烟苗的水分和营养是通过基质获得的，基质的成分直接影响烟苗菌根的形成与菌根苗的生长。因此，研制烟苗的专用基质配方及相应的微生物接种技术是我国烤烟育苗集约化生产的迫切需要植物根际促生菌(PGPR)是指生存于植物根表和根际，能间接或直接地促进、调节植物生长的微生物。研究表明，在植物根系中广泛存在着根际促生菌，包括芽孢杆菌属和假单胞杆菌属在内的20多个菌属都具有促生防病的潜能。将烟草根际促生菌制成生物有机肥应用到烟草育苗中，可以有效地提高烟草苗期的发芽率、烟苗成苗素质，对烟苗的农艺性状也有促进作用。吴小平等研究表明，烤烟漂浮育苗过程中叶面喷施光合细菌菌液，可明显提高烟苗的叶绿素含量和成苗素质。席淑雅等从烤烟根际筛选得到2株促生菌株A03和B04，制成PGPR菌肥，用于烤烟漂浮育苗可明显提高成苗素质、种子发芽率和对烟草病害的抗性。目前已有一些微生物肥料产品应用于烟草育苗，但存在产品活性低、保质期短、效果不稳定等问题。本专利技术分别筛选对烟草幼苗具有促长、抗病功能的微生物菌株，采用基质拌菌的方法，评价了不同微生物菌剂对烟草生长及根茎病害的防控效果，获得了有效的烟草育苗微生物菌剂组合，为推广育苗基质拌菌技术奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种烟草育苗专用复合微生物菌剂，所述的微生物菌剂包括：凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、特基拉芽孢杆菌(Bacillustequila)和多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)，所述的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)的保藏编号为CCTCCNO：M2020066，特基拉芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020385。本专利技术的另一个目的在于提供了上述复合微生物菌剂的制备方法。本专利技术的最后一个目的在于提供了上述微生物菌剂的应用，本专利技术的微生物菌剂具有抗病功能，促进烟草幼苗根系发育、提高烟草产量和质量。为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：一株凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)，通过以下方法筛选得到：1)从华中农业大学茶园采集多份茶树根部土壤，从土壤中挑选到一株IAA高产菌株，通过生理生化及16SrRNA基因序列鉴定为凝结芽孢杆菌。以此为出发菌株再经过常压室温等离子体诱变筛选获得一株IAA高产的凝结芽孢杆菌B06。2)该菌株于2020年4月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：BacilluscoagulansB06，保藏号为CCTCCNO：M2020066，地址：中国武汉武汉大学。菌株B06具有典型的凝结芽孢杆菌特征：该菌株在MRS培养基上生长良好，48h形成直径2-3mm大小的圆形菌落，白色而有光泽，表面湿润、平坦，边缘整齐。革兰氏染色，油镜观察，菌株B06菌体形态为杆状，革兰氏阳性，单个、成对或链状排列，芽孢端生。一株特基拉芽孢杆菌(Bacillustequila)，通过以下方法筛选得到：1)从湖北恩施州来凤县烟草种植地采集多份土壤，各取5g土样至300mlYPD液体培养基中37℃静置培养3d，之后将培养液置于80℃水浴15min，10倍梯度稀释并各取0.1ml稀释液涂布YPD固体平板，37℃培养。待菌落长出后随机挑取菌落进行划线分离，将纯化后的菌株编号并保存，同时将这些菌株转接YPD液体培养基并于37℃培养48h，利用发酵液进行抑菌圈实验，抑菌对象为烟草青枯病的病原菌青枯雷尔氏菌。通过测量抑菌圈大小挑选得到抑菌能力最高的菌株KQ22。2)通过生理生化及16SrRNA基因序列鉴定菌株KQ22，确定该菌株为特基拉芽孢杆菌。该菌株于2020年7月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：特基拉芽孢杆菌(Bacillustequila)KQ22，保藏号为CCTCCNO：M2020385，地址：中国武汉武汉大学。一种烟草育苗专用复合微生物菌剂，包括：凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)B06，特基拉芽孢杆菌(Bacillustequila)KQ22和多粘类芽孢杆菌；所述菌株在复合菌剂中的有效菌含量的比例为：(1-10):(1-10):(1-10)；所述的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)B06的保藏编号为CCTCCNO：M2020066，特基拉芽孢杆菌的保藏编号为：CCTCCNO：M2020385，所述的多粘类芽孢杆菌为购自商业渠道的的生防菌株。优先的，上述复合菌剂中三种菌活菌数的比例为1:1:1。所述组合物为粉剂，总有效活菌数为20-200亿/g。按本领域常规方式，将上述三种微生物单独发酵后按活菌比例复配，或将三种微生物按一定比例接种到培养基中混合培养，都能获得本专利技术的复合菌剂；优选的，所述复合菌剂的制备方法包括：凝结芽孢杆菌B06的培养基由红糖、酵母浸粉、麸皮、轻质碳酸钙与水按质量比(2～4)：(0.5～2)：(80～120)：(1～3)：(80～100)的比例组成，培养基混匀并灭菌后接种0.5-5％的种子液(MRS培养基)，于37-50℃静置培养48-60h，之后低温干燥并粉碎。特基拉芽孢杆菌KQ22的培养基由红糖、麸皮、豆粕、轻质碳酸钙与水按质量比(2～4)：(80～120)：(40～60)：(0.5～2)：(100～140)的比例组成，培养基混匀并灭菌后接种3-5％的种子液，于30-40℃静置培养48-60h，之后低温干燥并粉碎。将上述凝结芽孢杆菌及特拉基芽孢杆菌的麸皮培养物及多粘类芽孢杆菌的菌粉按活菌数比例(1-10):(1-10):(1-10)混配即可得到烟草专用复合微生物菌剂。或按照下述方法进行制备：培养基为红糖、酵母浸粉、麸皮、轻质碳酸钙与水按质量比(4～6)：(0.5～2)：(80～120)：(1～3)：(80～100)的比例组成，培养基混匀并灭菌后接种0.5-5％的混合种子液，于35-42℃静置培养48-60h，之后低本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草育苗专用复合微生物菌剂，包括：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)B06，特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequila)KQ22和多粘类芽孢杆菌；所述的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)B06的保藏编号为CCTCC NO：M2020066，特基拉芽孢杆菌KQ22的保藏编号为CCTCC NO：M 2020385。/n

【技术特征摘要】
1.一种烟草育苗专用复合微生物菌剂，包括：凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)B06，特基拉芽孢杆菌(Bacillustequila)KQ22和多粘类芽孢杆菌；所述的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)B06的保藏编号为CCTCCNO：M2020066，特基拉芽孢杆菌KQ22的保藏编号为CCTCCNO：M2020385。


2.根据权利要求1所述的微生物菌剂，所述菌株在复合菌剂中的有效菌含量的比例为：(1-10):(1-10):(1-10)。


3.根据权利要求1所述的微生物菌剂，菌剂的有效活菌数为20-200亿/g。


4.权利要求1所述的微生物菌剂的制备方法，包括：
凝结芽孢杆菌B06的培养基由红糖、酵母浸粉、麸皮、轻质碳酸钙与水按质量比(2～4)：(0.5～2)：(80～120)：(1～3)：(80～100)的比例组成，培养基混匀并灭菌后接种0.5-5％的种子液(MRS培养基)，于37-50℃静置培养48-60h，之后低温干燥并粉碎；
特基拉芽孢杆菌KQ22的培养基由红糖、麸皮、豆粕、轻质碳酸钙与水按质量比(2～4)：(80～120)：(40～60)：(0.5～2)：(100～140)的比例组成，培养基混匀并灭菌后接种3-5％的种子液，于30-40℃静...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺福平，何志群，
申请(专利权)人：北京恩格兰环境技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11