一种新型疫苗佐剂制造技术

本发明专利技术提供了一种新的疫苗佐剂，更具体而言，一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫反应的疫苗佐剂，所述疫苗佐剂包括作为活性成分的IL‑12蛋白和IL‑21蛋白，或包括作为活性成分的编码IL‑12蛋白的多核苷酸和编码IL‑21蛋白的多核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种新型疫苗佐剂相关申请本申请要求2018年2月2日提交的韩国专利申请10-2018-0013329的优先权。上述申请的说明书通过引用全文合并于此。
本专利技术涉及疫苗佐剂，更具体地，涉及通过选择性增强T细胞特异性免疫应答能使抗癌疫苗等的治疗效果最大化的新型疫苗佐剂。
技术介绍
疫苗是用于产生针对抗原的免疫应答以防御病原体感染的药物，并且最近开发的疫苗主要使用重组蛋白作为抗原。与灭活疫苗或减毒活疫苗相比，重组蛋白安全且毒性较低，但重组蛋白的免疫原性较低。因此，其与疫苗佐剂一起使用以提供足够的免疫力来抵抗感染。疫苗佐剂分为三种类型，即抗原的载体，免疫刺激剂和一种根据作用机理在刺激免疫应答的同时充当抗原基质的载体。有效使用疫苗佐剂可以带来多种效果，例如：(1)提高重组抗原的免疫原性，(2)降低抗原剂量或减少免疫接种的次数，(3)改善免疫力较弱的婴儿和老年人的免疫原性。但是，尽管这些疫苗佐剂有用，仍然很少有许可用于人类疫苗的疫苗佐剂，这是因为要选择疫苗佐剂需要考虑许多因素。疫苗佐剂的理想条件是它们应安全，耐药性优良，制造简单且生产成本低。另外，疫苗佐剂在体内应具有长的半衰期并且是可生物降解的，并且不应诱导针对免疫佐剂本身的任何免疫应答。特别地，其中疫苗佐剂的安全性问题最为重要。目前在欧洲和美国通过批准用于疫苗的疫苗佐剂包括铝盐、MF59、AS03、AS04等。铝盐主要以Al(OH)3或AlPO4的形式使用，其被认为是通过吸附并缓慢释放蛋白质抗原而表现出免疫刺激作用。然而，近来已表明铝盐能激活树突状细胞并促进细胞因子(例如，IL-1β和IL-18)的分泌。铝盐广泛用于几种疫苗中，被认为是非常安全的，但据推测铝盐可能引起过敏反应并具有神经毒性。另外，铝盐强烈地诱导抗体介导的体液免疫反应，但是铝盐的缺点是它们几乎不诱导细胞介导的免疫反应并且不能进行冷冻保存。Novartis(诺华)的MF59(Ottetal.,PharmBiotechnol.6:277-296,1995)和GSK的AS03(Lietal.,J.Virol.80(3):1414-1426,2006)都是以角鲨烯为基本成分的水包油(o/w)乳液形式的免疫佐剂。o/w乳剂免疫佐剂激活抗原呈递细胞从而刺激抗原摄取和细胞因子分泌，增加趋化因子受体的表达，从而增加抗原呈递细胞的迁移。MF59和AS03用于增强对抗2009年新型流感病毒大爆发的疫苗中抗原的免疫原性并减少抗原用量，通过临床试验证实MF59和AS03具有提高抗体产生率和交叉防御的作用。除了角鲨烯以外，各种乳剂免疫佐剂已经开发出来，其使用的是自然界中制备的可用于人类的乳剂，但是由于过度的免疫反应和毒性，这些乳剂免疫佐剂的商业化是困难的。诸如脂质体，免疫刺激复合物和病毒样颗粒之类的颗粒载体也正在被开发为免疫佐剂，并且它们通常通过封装抗原而被开发为疫苗载体和佐剂。特别地，脂质体已被积极研究。脂质体是构成脂质层的合成球体，脂质层可以封装抗原并同时发挥疫苗输送和免疫佐剂的作用，脂质体的活性随脂质层的数量，电荷，组成和制备方法而变化。脂质体可增强针对蛋白质和多糖抗原的体液免疫和细胞免疫。然而，由于制备、稳定性等方面的困难，脂质体的使用受到限制，并且必须添加免疫刺激成分达到强烈的免疫活性，尤其因为相比佐剂增强免疫反应，免疫刺激成分的作用更接近抗原载体。目前，GSK已开发出一种免疫佐剂AS01B，其中向脂质体中添加了单磷酰脂质A(MPL)，并且GSK目前正尝试发展该免疫佐剂作为结核病和疟疾患者的疫苗佐剂(WO96/33739A)。然而，尽管这些疫苗佐剂增强了细胞介导的免疫反应，但是这些疫苗佐剂大多已经开发用于增强疫苗组合物的免疫应答，以预防主要需要体液免疫的传染病(例如病毒等)，因此尚未确认疫苗在预防和治疗需要细胞介导的免疫反应的疾病(例如癌症等)中的作用。专利技术概述如上所述，仍然迫切需要开发通过增强T细胞特异性免疫反应的疫苗佐剂，该佐剂可有效预防和治疗需要增强细胞介导免疫反应的疾病(如癌症)，以及由病毒感染引起的常规传染病的预防和治疗等，就这一方面而言为了解决包括上述问题在内的各种问题，本专利技术的专利技术人提供了一种新型疫苗佐剂，其可以通过增强T细胞免疫应答特异性免疫来增强疫苗的作用。但本专利技术不受该目的的限制。一方面，本专利技术提供了一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫反应的疫苗佐剂，其中所述疫苗佐剂包括编码IL-12蛋白的多核苷酸和编码IL-21蛋白的多核苷酸作为活性成分。另一方面，本专利技术提供一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫反应的疫苗佐剂，其中所述疫苗佐剂包括作为活性成分的IL-12蛋白和IL-21蛋白。根据本专利技术的另一方面，提供了一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫反应的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物包括作为活性成分的疫苗佐剂和免疫抗原。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种通过疫苗组合物刺激T淋巴细胞特异性免疫应答的方法，其中所述方法包括在向个体施用疫苗组合物同时、或之前或之后施用疫苗佐剂。专利技术效果根据本专利技术一个实施方案中的疫苗佐剂通过选择性增加对抗原特异性反应的T细胞而显著增强T细胞特异性免疫应答，并且不影响抗体产生。因此，该疫苗佐剂可有效地用作治疗宫颈癌等癌症的免疫治疗剂，以及通过增强细胞免疫来治疗各种感染性病毒感染的传染病。附图说明结合附图，可以从以下描述中更详细地理解示例性实施方案，其中：图1a为显示BD-121的基因构建体的示意图，根据示例性实施方案，BD-121是一种疫苗佐剂；图1b为显示BD-121A的基因构建体的示意图，根据示例性实施方案，BD-121A是一种疫苗佐剂；图2为显示BD-14的基因构建体的示意图，BD-14是根据示例性实施方案制备的14价HPVDNA疫苗；图3为显示根据示例性实施方案制备的CMVDNA疫苗的基因构建体的示意图；图4a为显示BD-02B的基因构建体的示意图，BD-02B包含在根据示例性实施案制备的HSV-2DNA疫苗中；图4b为显示BD-02C的基因构建体的示意图，所述BD-02C包含在根据示例性实施方案制备的HSV-2DNA疫苗中；图5为显示根据示例性实施方案制备的SFTSDNA疫苗的基因构建体的示意图；图6显示根据示例性实施方案，当传统的2价HPVDNA疫苗单独或与疫苗佐剂BD-121组合施用时，抗原特异性T细胞免疫应答的ELISPOT分析结果；图7a显示转染hBD-121构建体的COS-7细胞培养上清液中IL-12和IL-21浓度的ELISA分析结果，根据示例性实施方案，hBD-121构建体是疫苗佐剂；图7b是示出用mBD-121构建体转染COS-7细胞培养上清液中IL-12和IL-21浓度的ELISA分析结果的图，根据示例性实施方案，mBD-121构体是疫苗佐剂；图7c显示分别转染hBD-121构建体和mBD-121构建体的COS-7细胞培养上清中IL-12和IL-21表达水平的蛋白印迹分析结果，根据示例性实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫应答的疫苗佐剂，其包括作为活性成分的编码IL-12蛋白的多核苷酸和编码IL-21蛋白的多核苷酸。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180202 KR 10-2018-00133291.一种用于刺激T淋巴细胞特异性免疫应答的疫苗佐剂，其包括作为活性成分的编码IL-12蛋白的多核苷酸和编码IL-21蛋白的多核苷酸。


2.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂包含选自由以下组成的组中的至少一种：
一至三个载体，每个载体包含：分别编码组成所述IL-12蛋白的p35链(IL-12p35)和p40链(IL-12p40)的多核苷酸；和编码所述IL-21蛋白质的多核苷酸；以及
mRNA分子，每个分子都编码所述IL-12p35、所述IL-12p40和所述IL-21蛋白。


3.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂促进T淋巴细胞特异性免疫反应而不诱导B淋巴细胞特异性免疫反应。


4.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述IL-12p35蛋白包含如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。


5.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述IL-12p40蛋白为人IL-12p40，所述IL-12p40由如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列组成。


6.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述IL-21蛋白为人IL-21，所述IL-21由如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列组成。


7.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂进一步包含以下中的至少一种：
一种MIP-1α基因构建体，其中编码MIP-1α蛋白的多核苷酸可操作地连接到启动子；
一种复合基因构建体，其中编码MIP-1α蛋白的多核苷酸通过编码内部核糖体进入位点(IRES)或连接肽的多核苷酸可操作地连接到所述IL-12p35、所述IL-12p40m和所述IL-21蛋白中的至少一种；和
一种编码MIP-1α蛋白的mRNA分子。


8.如权利要求7所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述MIP-1α蛋白由如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列组成。


9.如权利要求7所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述MIP-1α基因构建体包含在一种单独表达载体中或包含在所述一至三种载体中的任何一个或多个载体里，每个所述载体包括：分别编码组成所述IL-12蛋白的p35链(IL-12p35)和p40链(...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐龙福，崔永祐，沈湘禧，
申请(专利权)人：SL瓦西基因公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR