一种眼贴刺激性的快速鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，取多个孵化10‑14天的受精鸡胚，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，取眼贴样品挤出药液40μL加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚内组织液蒸发，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟，借助光照观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。本发明专利技术眼贴刺激性的快速鉴定方法，模拟度高，依据血管损伤程度评分标准快速检测眼贴刺激性，操作简便，检测结果准确。

【技术实现步骤摘要】
一种眼贴刺激性的快速鉴定方法
本专利技术涉及医疗器械
，尤其是涉及一种眼贴刺激性的快速鉴定方法。
技术介绍
眼贴中含有黄柏等中药材，另外含有一些有机溶剂、矿物油、香精成分等化学物质，对于耐受度低的肌肤和敏感型肌肤来说有一定刺激性。每个人的皮肤敏感性和耐受度不同，面部和眼部神经和血管众多，对疼痛和刺激非常敏感，且眼贴成分会间接接触眼球表面，因此需要对眼贴接触皮肤的刺激性进行检测。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，采用受精鸡胚模拟人体血管，模拟度高，依据血管损伤程度评分标准快速检测眼贴刺激性，操作简便，检测结果准确。为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，包括如下步骤：S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；S4，取眼贴样品挤出药液作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养；S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。进一步地，步骤4中取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟。进一步地，步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。进一步地，根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值；当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；当观察到血管内无血流，血管清晰时，血管效应为鬼影血管，刺激度评分为1；当观察到充血，或CAM小血管血流增加时，血管效应为毛细血管损伤，刺激度评分为2；当观察到环内有可数的细小出血点1-10个时，血管效应为极轻微出血，刺激度评分为3；当观察到环内有可数的细小出血点＞10个或小出血点不可数且覆盖环内区域不足12.5％时，血管效应为轻微出血，刺激度评分为4；当观察到环内出血点覆盖面积12.5-25％，不包括25％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足25％时，血管效应为极轻度出血，刺激度评分为5；当观察到环内出血点覆盖面积25-50％，不包括50％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积为25-50％，不包括50％时，血管效应为轻度出血，刺激度评分为6；当观察到环内大量出血点或小区域出血范围达到50-75％，不包括75％时，血管效应为中度出血，刺激度评分为7；当观察到环内出血点区域大于等于75％或结痂形成时，血管效应为严重出血，刺激度评分为8。进一步地，取多个相同受试样品的刺激度评分计算出NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小的方法为：当0﹤NC≤2时，毛细血管未有出血损伤，确定为应激性刺激，即无损伤性刺激；当2﹤NC≤3时，毛细血管出现轻微性出血损伤，确定为轻微刺激，即此时已产生轻微损伤性刺激；当3﹤NC≤5时，毛细血管出现较为严重的出血损伤，确定为中度刺激，即此时已产生较为严重的损伤性刺激；当NC＞5时，毛细血管大面积出血，且出血量较大，为不可逆损伤，确定为严重刺激，即此时已产生极为严重的损伤性刺激。本专利技术的有益效果是：本专利技术眼贴刺激性的快速鉴定方法，使用鸡胚模拟人体血管对眼贴刺激性进行评价，利用孵化10-14天的受精鸡胚中期绒毛尿囊膜(CAM)血管与人眼结膜血管组成较为相似的特征，将一定量眼贴受试样品直接与鸡胚尿囊膜接触，通过将刺激物定向性的刺激CAM血管，通过作用一段时间之后观察鸡胚绒毛尿囊膜即CAM的血管损伤(如鬼影血管、毛细血管充血或出血)程度及周边组织变化，模拟待测刺激物对人眼结膜血管的刺激损伤，模拟度高。根据CAM上不同的血管损伤程度进行刺激度评分，从而判断受试样品的刺激性大小，操作简便，检测结果准确，可作为眼贴行业刺激性检测行业标准。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的描述，但本专利技术并不限于这些实施例。实施例1一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，包括如下步骤：S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；S4，取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚内组织液蒸发，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟；S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。实施例2本实施例与实施例1的不同之处在于：步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。实施例3本实施例与实施例2的不同之处在于：根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值。当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；当观察到血管内无血流，血管清晰时，血管效应为鬼影血管，刺激度评分为1；当观察到充血，或CAM小血管血流增加时，血管效应为毛细血管损伤，刺激度评分为2；当观察到环内有可数的细小出血点1-10个时，血管效应为极轻微出血，刺激度评分为3；当观察到环内有可数的细小出血点＞10个或小出血点不可数且覆盖环内区域不足12.5％时，血管效应为轻微出血，刺激度评分为4；当观察到环内出血点覆盖面积12.5-25％(不包括25％)，或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足25％时，血管效应为极轻度出血，刺激度评分为5；当观察到环内出血点覆盖面积25-50％(不包括50％)，或环内没有出血点但红晕覆盖面积为25-50％(不包括50％)时，血管效应为轻度出血，刺激度评分为6；当观察到环本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；/nS2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；/nS3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；/nS4，取眼贴样品挤出药液作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养；/nS5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。/n

【技术特征摘要】
1.一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；
S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；
S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；
S4，取眼贴样品挤出药液作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养；
S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。


2.根据权利要求1所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤4中取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟。


3.根据权利要求1或2所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。


4.根据权利要求3所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值；
当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；
当观察到血管内无血流，血...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡丛洁，段联珠，秦艳荣，
申请(专利权)人：郑州市新视明科技工程有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41