一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于分子生物领域，具体涉及一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组及试剂盒。所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物组的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组特异性好，可方便、快速的实现BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组及试剂盒
本专利技术属于分子生物领域，具体涉及一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组及试剂盒。
技术介绍
乳腺癌易感基因1(BRCA1)位于人类常染色体，定位于17q21，约100kb，具有22个有编码功能的外显子，编码1863个氨基酸，目前已鉴定出200多个突变位点与癌症的易感性有关。大量的研究表明BRCA1基因参与了许多关键的细胞过程，特别是有助于DNA修复和DNA损伤的转录调控的过程，其中许多功能是由大量与BRCA1蛋白相互作用的细胞蛋白介导的；BRCA1蛋白的功能也与特异的磷酸化有关，磷酸化激活的分子途径在很大程度上促进了肿瘤的抑制。BRCA1基因的突变对导致染色体的不稳定，进而会发生癌变，多数遗传性乳腺癌和部分散发性乳腺癌的发病与BRCA1基因的功能异常有关。乳腺癌在女性中发病率非常高，只有少部分男性患者，严重影响女性健康的恶行肿瘤之一。在全球，每年约有120万女性患有乳腺癌，其中约50万人会发生死亡，并且，乳腺癌的患病率呈逐年上升的趋势，增长速度达0.3％-8％。据统计，乳腺癌的发生和死亡存在一定的地域和种族差异，在发达国家的发病率较高。在我国，随着居民生活方式和生活习惯的不断改变，加之女性在社会中的压力不断的增加，使得女性乳腺癌的患病趋势也呈现显著上升的趋势，成为我国女性主要健康杀手，一线城市的发病率较高，上海居第一位，农村乳腺癌的发病率较低。BRCA1是乳腺癌一个重要的易感基因，突变能够增加8-10倍乳腺癌患病风险。大约5％的乳腺癌患者有家族性发生，家族性乳腺癌易感基因的发现及其功能机制的确定，将大大提高我们对乳腺癌病因和进展的认识。高分辨率熔解曲线分析HRM，是常规聚合酶链式反应过程中饱和荧光染料与DNA双链结合，通过实时监测升温过程中双链DNA饱和荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，SNP位点由于不能配对，其解链温度将比正常组低，在解链的过程中会出现先解链的现象，荧光染料将从局部解链的DNA分子上释放。由于扩增的DNA序列中存在碱基的差异，熔解曲线的形状和位置就会不同。因此，HRM能快速、有效的区分SNP扩增片段。
技术实现思路
本专利技术提供一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组，以便于实现对BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的检测。本专利技术的第二目的在于提供一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系。本专利技术的第三目的在于提供一种试剂盒。该试剂盒可用于检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型。本专利技术的目的还在于提供一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的方法。本专利技术的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组采用如下技术方案：一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述引物组的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系采用如下技术方案：一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系，所述反应体系包括2×MasterMix10μL、水6.8μL、如上所述的上游引物0.6μL、如上所述的下游引物0.6μL和模板2μL。作为进一步优选的技术方案，所述上游引物和下游引物的浓度分别为10μM，所述模板的浓度≥20ng/μL。作为进一步优选的技术方案，所述反应体系PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性10s；58℃退火30s，45个循环；60-90℃熔解，温度上升速率为0.08℃/s。本专利技术的试剂盒采用如下技术方案：一种试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组。作为进一步优选的技术方案，所述试剂盒还包括下述中的任意一种或几种的组合：2×MasterMix、水、具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列的野生型标准品、具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列的纯合突变标准品和杂合突变标准品，所述杂合突变标准品由等量的所述野生型标准品和纯合突变标准品混合得到。本专利技术的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的方法采用如下技术方案：一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的方法，采用如上述任意一项所述的试剂盒或如上所述的引物组或如上述任意一项所述的反应体系进行所述BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的检测；所述方法用于非疾病的诊断和治疗目的。作为进一步优选的技术方案，包括下述步骤：(1)合成野生型标准品、纯合突变标准品和杂合突变标准品；(2)提取待测样本基因组DNA，对野生型标准品、纯合突变标准品、杂合突变标准品和待测样本基因组DNA进行PCR扩增、扩增曲线熔解和HRM分析；(3)根据熔解曲线判断待测样本BRCA1基因SNP位点rs1799950的基因型。作为进一步优选的技术方案，使用Rotor-GeneQSeriesSoftware软件对检测样本的熔解曲线与所述野生型标准品、纯合突变标准品和杂合突变标准品的熔解曲线比对，进行分型。本专利技术的有益效果是：本专利技术的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组特异性好，可方便的实现BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的检测。本专利技术的方法能够准确的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因型，无需测序，无需序列特异性探针，操作简便、耗时短、特异性好、成本低。该专利技术可以用于乳腺癌易患性的辅助判断。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为PCR扩增后产物突变位点的熔解曲线型。图2为样本的检测结果(3个样本)。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术使用天根生化科技有限公司HRM分析试剂盒(EvaGreen)及Rotor-GeneQ仪器进行实验，但并不限制使用其他公司的试剂盒和仪器。实施例1本专利技术设计了一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因型的方法，该结果可以用于BRCA1基因SNP位点rs1799950相关的乳腺癌易感性的风险评估。...

【技术保护点】
1.一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组，其特征在于，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物组的下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组，其特征在于，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述引物组的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.一种检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括2×MasterMix10μL、水6.8μL、如权利要求1所述的上游引物0.6μL、如权利要求1所述的下游引物0.6μL和模板2μL。


3.根据权利要求2所述的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系，其特征在于，所述上游引物和下游引物的浓度分别为10μM，所述模板的浓度≥20ng/μL。


4.根据权利要求2或3所述的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的反应体系，所述反应体系PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性10s；58℃退火30s，45个循环；60-90℃熔解，温度上升速率为0.08℃/s。


5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的检测BRCA1基因SNP位点rs1799950基因分型的引物组和/或如权利要求2-4中任意一项所述的反应体系。


6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括下述中的任意一种或几种的组合：2×MasterMix、水、具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列的野生型标准品、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张珂，肖瑞霞，修贺明，郝京生，李华中，
申请(专利权)人：河南金泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41