一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法。本发明专利技术公开的筛选方法通过将表达不同目的蛋白的重组质粒分别导入毛囊真皮乳头部干细胞中过表达，然后再与人表皮细胞进行共培养，当人表皮细胞内衰老基因下调明显时，检测各组毛囊真皮乳头部干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量，该相对表达量即为组合物中各种肽和/或蛋白质的质量比。本发明专利技术首次将组合物中的各成分在细胞中的相对表达量与其在组合物中的使用比例建立关联，通过相对表达量来确定使用比例，该筛选方法可以得到组合物中各成分最适宜的使用比例，从而高效利用组合物中各种成分，且不会对皮肤造成损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法。
技术介绍
当前化妆品中会使用多种小分子肽类作为活性成分，但小分子肽类的浓度并非越高越好，多种小分子肽类一起使用时适宜人面部皮肤细胞的浓度和比例难以得知，从而使得一些高浓度小分子肽类的使用容易造成皮肤细胞损伤，低浓度的使用难以起到较好的效果。
技术实现思路
本专利技术提供了一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法，解决了化妆品中多种小分子肽类组合使用时，使用比例不适宜会造成皮肤细胞损伤或难以起到较好的效果的问题。其具体技术方案如下：本专利技术提供了一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法，包括以下步骤：步骤1：将表达肽和/或蛋白质组合物中任意一种组分的重组质粒转染至毛囊真皮乳头部干细胞，得到表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞，再将表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞与人表皮细胞共培养12～24h，所述肽和/或蛋白质组合物中剩余的组分重复上述步骤；步骤2：检测所述共培养后的毛囊真皮乳头干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量，即为所述肽和/或蛋白质组合物中各种组分的质量比。本专利技术步骤1中，肽和/或蛋白质组合物可以包括两种以上的肽类，或两种以上的蛋白质，或蛋白质和肽类的混合物，优选为两种以上的肽；所述肽类为多肽或小分子肽；重组质粒转染过程中，每组重组质粒的转染量相同；本专利技术组合物中的每种肽或蛋白质需功能相似或一致，例如：为抗衰老的和/或抗衰老相关的肽类或蛋白质。本专利技术中，所述重组质粒包括：载体质粒和报告基因；所述载体质粒为载体质粒pLentilox3.7和包装质粒pRSV-REV；所述报告基因为增强型绿色荧光蛋白EGFP、增强型蓝色荧光蛋白EBFP或增强型青色荧光蛋白ECFP，优选为EGFP。本专利技术中，人表皮细胞能较好的模拟正常人体皮肤。由于表皮细胞无法分化和分裂，属于成熟的细胞，导入之后最多只能对本细胞产生影响，很难作用于其他细胞。而导入干细胞后，其表达对其它细胞的影响较大(此类干细胞对周围其他表皮细胞和真皮层细胞的影响主要用过旁分泌和分化两个方式，因此对此类干细胞进行导入能更好的模拟其在体内的情况。而且作用效果也更好。)所述共培养中，所述毛囊真皮乳头部干细胞与人表皮细胞的数量比为(1:3)-(1:6)，优选为1：5；所述共培养时间优选为18～24h，更优选为24h。将毛囊真皮乳头干细胞与人表皮细胞共培养，监测人表皮细胞衰老基因的表达情况，当共培养至12～24h时，人表皮细胞衰老基因下调明显，进行步骤2；基质金属蛋白酶(MMP)是一类锌依赖性内肽酶。虽然基质金属蛋白酶1(MMP-1)能切割I型胶原，但MMP-2能降解弹性蛋白以及包括IV型和VII型胶原的基底膜(BM)化合物。MMP-1主要负责老化过程中真皮胶原的降解，MMP-2和MMP-9降解影响皮肤厚度和皱纹形成的细胞外基质(ECM)蛋白。真皮细胞外基质中的化合物，包括胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白多糖，因为它们具有水结合能力，对皮肤的外观有重要影响。基质金属蛋白酶(MMPs)，一个结构相关的基质降解酶家族，降解和修饰各种真皮细胞外基质成分。紫外线辐射可提高MMP-1的产生，从而降解人体皮肤中的胶原分子。因此，本专利技术中所述衰老基因为MMP-1和/或MMP-2。I型胶原是真皮细胞外基质的主要结构蛋白，因此，本专利技术优选在检测人表皮细胞衰老基因的蛋白表达水平同时还检测了I型胶原的蛋白表达水平。本专利技术步骤2中检测每组所述毛囊真皮乳头干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量的相对表达量之后还包括：排除表达受抑制的目的基因，所述组合物中剩余肽和/或蛋白质在所述毛囊真皮乳头干细胞中的mRNA或蛋白的相对表达量即为组合物中剩余肽和/或蛋白质的质量比。本专利技术步骤2中所述相对表达量可以为平行实验中任意一组相对表达量，也可以为平均相对表达量。本专利技术将组合物中各组分的重组质粒分别导入不同毛囊真皮乳头部干细胞，使其在毛囊真皮乳头部干细胞中表达，再将该毛囊真皮乳头干细胞分别与人表皮细胞进行共培养，监测人表皮细胞衰老基因的表达情况，当共培养至12～24h时，衰老基因下调明显，此时检测毛囊真皮乳头干细胞的目的基因的mRNA或蛋白的表达水平，其相对表达量即为组合物中各组分的最适配比。本专利技术实施例中，组合物具体为五种小分子肽，将分别表达五种小分子肽的五组重组质粒分别导入五组毛囊真皮乳头部干细胞，再将五组毛囊真皮乳头部干细胞分别与五组人表皮细胞进行共培养，当共培养至24h时，人表皮细胞中的衰老基因下调明显，检测五组毛囊真皮乳头部干细胞中各小分子肽的基因和蛋白的表达水平，五种小分子肽的基因或蛋白的相对表达量即为五种小分子肽的质量比。使用该比例的肽类组合物应用皮肤上，可以有效修复皮肤损伤，美白抗皱效果好，且对皮肤不产生其它伤害。本专利技术还提供了一种肽类组合物，包括：至少两条肽，所述肽类组合物中的肽类为小分子肽和/或多肽；所述肽类组合物中每种肽的质量比由上述筛选方法筛选得到。本专利技术中，所述小分子肽由2～10个氨基酸组成，所述多肽由10～100个氨基酸组成。本专利技术中，所述肽类组合物优选由TetrapeptidePKEK、CopperTripeptide、Pentapeptide-18、Glycinemax和Hexapeptide-11组成。四肽PKEK(TetrapeptidePKEK，脯氨酸-赖氨酸-谷氨酸-赖氨酸)可降低紫外光胁迫角质形成细胞中白细胞介素-6、白细胞介素-8和肿瘤坏死因子以及环氧合酶基因的表达。PKEK对UVB诱导的IL-1、IL-6、IL-8、TNF及POMC、酪氨酸酶基因表达上调有明显抑制作用。PKEK与抗坏血酸磷酸酯钠联合使用6周后，面部色素斑明显消退。六胜肽-11(Hexapeptide-11)能够影响内在和外在老化的成纤维细胞、外在老化的毛乳头细胞的衰老开始。铜三肽(CopperTripeptide)它作为信号和载体肽，促进胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白多糖和糖胺聚糖的合成，并提供抗炎和抗氧化反应。刺激细胞调节分子和再生，愈合皮肤和其他组织，对老化过程有较好的抑制作用。五肽-18(Pentapeptide-18)模拟脑啡肽的自然机制，抑制神经元活动和儿茶酚胺释放。它的作用效果与肉毒杆菌样的效果相似；并且它可以有效的减少细纹和皱纹，滋润皮肤，提高硬度和肤色。大豆多肽(Glycinemax)具有抗氧化、降血压、降血脂等多种生物学活性。局部应用Glycinemax数据显示，UVB照射后包皮表皮中Bcl-2蛋白表达显著增加，环丁烷嘧啶二聚体阳性细胞、晒伤细胞、凋亡细胞、p53蛋白表达和Bax蛋白表达显著降低。局部使用的大豆多肽可以保护人类皮肤。本专利技术实施例在共培养至24h时，此时衰老基因下调明显，检测所述毛囊真皮乳头干细胞中肽的相对表达量，通过多组实验结果发现Hexa本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1：将表达肽和/或蛋白质组合物中任意一种组分的重组质粒转染至毛囊真皮乳头部干细胞，得到表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞，再将表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞与人表皮细胞共培养12～24h，所述肽和/或蛋白质组合物中剩余的组分重复上述步骤；/n步骤2：检测所述共培养后的毛囊真皮乳头干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量，即为所述肽和/或蛋白质组合物中各种组分的质量比。/n

【技术特征摘要】
1.一种肽和/或蛋白质组合物使用比例的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将表达肽和/或蛋白质组合物中任意一种组分的重组质粒转染至毛囊真皮乳头部干细胞，得到表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞，再将表达目的蛋白的毛囊真皮乳头部干细胞与人表皮细胞共培养12～24h，所述肽和/或蛋白质组合物中剩余的组分重复上述步骤；
步骤2：检测所述共培养后的毛囊真皮乳头干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量，即为所述肽和/或蛋白质组合物中各种组分的质量比。


2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤2中检测所述毛囊真皮乳头干细胞中目的基因的mRNA或蛋白的相对表达量之后还包括：
排除表达受抑制的目的基因，所述组合物中剩余肽和/或蛋白质在所述毛囊真皮乳头干细胞中的mRNA或蛋白的相对表达量即为所述组合物中剩余肽和/或蛋白质的质量比。


3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤1所述共培养的时间为18...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志乾，
申请(专利权)人：广州市乾相化妆品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44