透明质酸合成促进剂、促进透明质酸合成的方法和细胞评价方法技术

本发明专利技术提供利用透明质酸产生细胞促进透明质酸合成的技术、评价透明质酸产生细胞对化合物的响应性的方法、或评价说明书的式1所示的多糖衍生物或其盐对透明质酸产生细胞的响应性的方法。通过使说明书中的式1所示的多糖衍生物或其盐与透明质酸产生细胞接触，从而可实现促进该透明质酸产生细胞中透明质酸的合成。另外，通过对透明质酸产生细胞使用前述多糖衍生物或其盐，从而以透明质酸产生作为指标，能够评价透明质酸产生细胞的响应性。另外，通过使用透明质酸产生细胞，从而以透明质酸产生作为指标，能够评价前述多糖衍生物或其盐的响应性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】透明质酸合成促进剂、促进透明质酸合成的方法和细胞评价方法
本专利技术涉及利用透明质酸产生细胞促进透明质酸合成的技术。
技术介绍
透明质酸是以N-乙酰基-D-葡糖胺与D-葡萄糖醛酸通过β1,3键合而成的结构作为二糖单元(构成二糖单元)，由该构成二糖单元重复且通过β1,4键合而成的基本骨架所构成的糖胺聚糖的一种。透明质酸广泛地分布于生物体内软骨、关节腔的滑液(关节液)、脐带、血清、尿液、眼球的玻璃体等全身组织中，尤其富集地存在于关节液中。以细胞水平来看，几乎所有生物体内的细胞均具有合成透明质酸的功能，透明质酸被认为对生物而言是重要的物质。在关节中，无论是动态或静态的情况下，其均发挥维持关节液的润滑特性的作用。透明质酸还发挥通过在关节中降低促炎性细胞因子产生而缓解软骨变性、或通过抑制COX-2的产生而减轻疼痛等各种生理作用。非专利文献1中报道了如下内容：与健康的人的关节液中的透明质酸相比，骨关节炎患者(以下，本说明书中也称为“OA”。)、类风湿性关节炎患者(以下，本说明书中也称为“RA”。)的关节液中，有透明质酸含量少的情况、有透明质酸分子量降低的情况。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2005/066214号非专利文献非专利文献1：DahlLB，DahlIM，Engstrom-LaurentA，andGranathK.Concentrationandmolecularweightofsodiumhyaluronateinsynovialfluidfrompatientswithrheumatoidarthritisandotherarthropathies.Ann.Rheum.Dis.1985；44(12)：817-22.
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供利用透明质酸产生细胞促进透明质酸合成的技术。本专利技术的其它目的在于，提供评价透明质酸产生细胞对化合物的响应性的方法。本专利技术的其它目的在于，提供评价后述的式1所示的多糖衍生物或其盐对透明质酸产生细胞的响应性的方法。本专利技术人等发现：通过使后述的式1所示的多糖衍生物或其盐与透明质酸产生细胞接触，从而能够促进该透明质酸产生细胞中透明质酸的合成，以至完成了本专利技术。本专利技术的一个方面涉及用于促进透明质酸合成的、规定结构的多糖衍生物或其盐的应用。本专利技术的另一方面涉及使用后述的式1所示的多糖衍生物或其盐来评价透明质酸产生细胞的响应性的方法。附图说明图1A是评价式1的多糖衍生物(0.1％化合物1)对由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图1B是评价式1的多糖衍生物(0.01％化合物1)对由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图2是示出：在包含式1的多糖衍生物的培养基中培养滑膜细胞的过程中，在细胞内促进产生的高分子量物质为透明质酸的结果。图中，图示板A和B分别表示无透明质酸酶处理(●)和有透明质酸酶处理(○)时的结果。图3是示出：包含式1的多糖衍生物的培养基中的滑膜细胞的培养时间与在细胞产生的透明质酸分子量的关系的结果。图中，图示板A～C依次表示无处理、透明质酸(HA)处理和化合物1处理时的结果。图4A是评价各种化合物对由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图4B是评价培养基中的双氯芬酸钠(DF-Na)浓度对由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图5A是评价式1的多糖衍生物对源自关节炎患者的由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图5B是评价式1的多糖衍生物对源自骨关节炎患者的由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图5C是评价式1的多糖衍生物对源自骨关节炎患者的由滑膜细胞产生的透明质酸的分子量的影响的结果。图5D是评价式1的多糖衍生物对源自骨关节炎患者的滑膜细胞的细胞培养后的细胞数的影响的结果。图6示出评价式1的多糖衍生物对与透明质酸合成或透明质酸分解相关的基因表达量的影响的结果。分别地，图示板A表示与透明质酸合成相关的基因HAS1～HAS3的表达水平，图示板B表示与透明质酸分解相关的基因HYAL1～HYAL3的表达水平。图7表示评价式1的多糖衍生物对兔子关节内的透明质酸合成的影响的结果。具体实施方式根据本专利技术，可提供利用透明质酸产生细胞促进透明质酸合成的技术。根据本专利技术，还可提供评价透明质酸产生细胞对化合物的响应性的方法。以下，对本专利技术的实施方式进行说明，但本专利技术不仅限于以下的实施方式。本说明书中，也将“透明质酸或其盐”简称为“HA”。本说明书中“有效量”和“作为有效成分”是指：符合合理的风险/效益比且不会引起过度的不良事件的情况下充分地得到期望的响应所需的成分的量。只要作为本领域技术人员，则无需对就各要素的组合中的每一个进行独立的试验，基于一个或多个具体的试验例的结果和技术常识，也能够确定其它情况下的有效量。本专利技术的一个方面涉及透明质酸合成促进剂，其含有有效量的下述式1所示的多糖衍生物或其盐；式1中，X为源自具有羧基和羟基中的至少一者的多糖的残基；A为取代基；n为取代基A的导入率，其为1摩尔％以上且80摩尔％以下；X-A之间为前述羧基或羟基与前述取代基A的键，该键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；前述取代基A由下述式2表示：*-Y-Z式2式2中，Y为间隔基残基或酯键；Z为双氯芬酸残基；Y为间隔基残基时，Y-Z之间的键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；*是与X的结合位点。作为本专利技术的式1的多糖衍生物中的多糖残基所来源的多糖，可使用具有羧基和羟基中的至少一者的多糖。本专利技术的多糖衍生物中，多糖的羧基和/或羟基的至少一部分与取代基A形成共价键。本说明书中的多糖衍生物可以是盐的形态。作为盐，可列举出：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、钡盐之类的金属盐；铵盐；甲胺盐、二乙胺盐、亚乙基二胺盐、环己胺盐、乙醇胺盐之类的胺盐；盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐之类的无机酸盐；乙酸盐、苯二甲酸盐、富马酸盐、马来酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、甲烷磺酸盐、对甲苯磺酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、苹果酸盐之类的有机酸盐等，没有特别限定。多糖衍生物的盐优选碱金属盐(例如，钠盐、钾盐)，更优选钠盐。作为多糖，例如可以示例出透明质酸、软骨素、硫酸软骨素、肝素、硫酸乙酰肝素和羧基C1～4烷基葡聚糖(例如，羧基甲基葡聚糖)等，但不限定于这些。上述多糖优选为透明质酸。多糖可以使用动物来源或微生物来源的纯化物、化学合成等的合成物等利用任意的方法得到的多糖。多糖衍生物及其多糖残基所来源的多糖的平均分子量没有特别限定，可示例出10000以上且5000000以下，优选为500000以上且3000000以下，更优选为600000以上且3000000以下，进一步优选为600000以上且1200000以下。需要说明的是，本说明书中，多糖衍生物、及其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制剂，其特征在于，含有多糖衍生物或其盐，/n所述多糖衍生物由下述式1表示，/n且用于促进透明质酸合成，/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180327 JP 2018-0597721.一种制剂，其特征在于，含有多糖衍生物或其盐，
所述多糖衍生物由下述式1表示，
且用于促进透明质酸合成，



式1中，X为源自具有羧基和羟基中的至少一者的多糖的残基；A为取代基；n为取代基A的导入率，其为1摩尔％以上且80摩尔％以下；X-A之间为所述羧基或羟基与所述取代基A的键，该键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；所述取代基A由下述式2表示：
*-Y-Z式2
式2中，Y为间隔基残基或酯键；Z为双氯芬酸残基；Y为间隔基残基时，Y-Z之间的键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；*是与X的结合位点。


2.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述多糖选自由透明质酸、软骨素、硫酸软骨素、肝素、硫酸乙酰肝素和羧基C1～4烷基葡聚糖组成的组。


3.根据权利要求1或2所述的制剂，其中，所述间隔基残基选自由C1～6亚烷基、氨基酸残基和多肽链组成的组。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的制剂，其中，所述促进透明质酸合成是使用该制剂的对象中合成的透明质酸分子量的增加。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的制剂，其中，所述多糖的平均分子量为10000以上且5000000以下。


6.一种试剂盒，其至少包含下述(A)和(B)：
(A)下述式1所示的多糖衍生物或其盐；
(B)显示旨在用于促进透明质酸合成的使用说明书或标签，



式1中，X为源自具有羧基和羟基中的至少一者的多糖的残基；A为取代基；n为取代基A的导入率，其为1摩尔％以上且80摩尔％以下；X-A之间为所述羧基或羟基与所述取代基A的键，该键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；所述取代基A由下述式2表示：
*-Y-Z式2
式2中，Y为间隔基残基或酯键；Z为双氯芬酸残基；Y为间隔基残基时，Y-Z之间的键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；*是与X的结合位点。


7.一种促进透明质酸合成的方法，其包括如下工序：使下述式1所示的多糖衍生物或其盐与透明质酸产生细胞接触，



式1中，X为源自具有羧基和羟基中的至少一者的多糖的残基；A为取代基；n为取代基A的导入率，其为1摩尔％以上且80摩尔％以下；X-A之间为所述羧基或羟基与所述取代基A的键，该键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；所述取代基A由下述式2表示：
*-Y-Z式2
式2中，Y为间隔基残基或酯键；Z为双氯芬酸残基；Y为间隔基残基时，Y-Z之间的键选自由酯、硫酯和酰胺组成的组；*是与X的结合位点。


8.根据权利要求7所述的促进透明质酸合成的方法，其中，所述多糖选自由透明质酸、软骨素、硫酸软骨素、肝素、硫酸乙酰肝素和羧基C1～4烷基葡聚糖组成的组。


9.根据权利要求7或8所述的促进透明质酸合成的方法，其中，所述间隔基残基选自由C1～6亚烷基、氨基酸残基和多肽链组成的组。


10.根据权利要求7～9中任一项所述的促进透明质酸合成的方法，其中，所述促进透明质酸合成是所述透明质酸产生细胞中合成的透明质酸分子量的增加。


11.根据权利要求7～10中任一项所述的促进透明质酸合成的方法，其中，所述多糖的平均分子量为10000以上且5000000以下。


12.根据权利要求7～11中任一项所述的促进透明质酸合成的方法，其中，所述透明质酸产生细胞选自由滑膜细胞、软骨细胞、成纤...

【专利技术属性】
技术研发人员：喜助田知央，吉冈敬二，
申请(专利权)人：生化学工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP