一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL-6制造技术

本发明专利技术属于生物及水产品加工的技术领域，具体涉及一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL‑6，所述的解淀粉盐水球菌HL‑6的保藏编号为GDMCC No：60715。本发明专利技术首次筛选出一株可用于亚硝酸盐去除的解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)，该菌株具有耐盐性质，对于高浓度和低浓度的亚硝酸盐均有很好的去除效果，特别是在高盐情况下对亚硝酸盐的去除依然可以达到90%以上。

【技术实现步骤摘要】
一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL-6
本专利技术属于生物及水产品加工的
，具体涉及一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL-6。
技术介绍
亚硝酸盐是亚硝胺合成的的前体物质。大量的动物实验已确认亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。同时，亚硝胺还能导致畸型和突变。流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等与摄入亚硝胺有一定关联。因此，食品中的亚硝酸盐会带来很大的安全隐患。鱼露，又名鱼酱油，营养丰富，味道鲜美，是深受东南亚各国和中国沿海区域居民喜爱的传统水产发酵调味品。鱼露通常是将小海鱼捕捞后即刻加盐腌制而成，或者加冰保藏等待上岸后立即加盐腌制而成，这样未经清洗的原材料和海水盐中不可避免地带入亚硝酸盐，而且其开放式的发酵过程也会产生一部分亚硝酸盐。传统发酵生产的鱼露中存在亚硝酸盐，但含量不一，目前中国的鱼露产品标准(SB/T10324-1999)中并没有规定亚硝酸盐的限量。江津津等检测了广州市售16种商品鱼露(鱼露产地分别为越南、香港、泰国、汕头和福建)和某企业的鱼露发酵液，亚硝酸盐含量为0.72～18.97mg/kg，小于腌制蔬菜的亚硝酸盐标准限量值(20mg/kg)。然而，对于我国沿海区域以鱼露为调味品的人群来说，鱼露在其日常饮食中食用比例高，其由亚硝酸带来的安全隐患仍不可忽视。有报道指出，南方沿海地区因为长期食用鱼露，所以患鼻咽癌和胃癌的人较多。因此，对于鱼露来说，去除其中的亚硝酸盐有很重要的意义。目前，国内外已研发出多种方法消减亚硝酸盐含量，其中利用微生物发酵是研究得最多、消减亚硝酸盐效果最好且最安全的方法。目前，已报到的去除亚硝酸盐多为乳酸菌。然而，现有的乳酸菌耐盐能力较差，很难在鱼露这种高盐食品中去除其亚硝酸盐。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)，所述的解淀粉盐水球菌的保藏编号为：GDMCCNO：60715。为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：申请人自鱼露中筛选出一株可高效降解亚硝酸盐的细菌，通过生物形态和分子鉴定，该菌株鉴定为解淀粉盐水球菌，该菌株已于2019年7月5日送至广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为：GDMCCNO：60715，分类命名：SalinicoccusamylolyticusHL-6，地址：中国广州市广东省微生物研究所。菌株SalinicoccusamylolyticusHL-6在氯化钠含量为4％的营养琼脂培养基中，于25℃培养72小时的菌落形态如图1所示，菌落呈圆形，粉色至红色，边缘整齐，个体形态为球形。解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)HL-6在去除亚硝酸盐中的应用，包括利用该菌剂制备成水产发酵产品的亚硝酸盐去除剂，或者直接用于水体的亚硝酸盐的处理，特别是高盐环境下的亚硝酸盐处理；以上所述的应用中，优选的，所述应用中的去除对象的氯化钠的含量≤35％。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术首次筛选出一株可用于亚硝酸盐去除的解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)，该菌株具有耐盐性质，对于高浓度和低浓度的亚硝酸盐均有很好的去除效果，特别是在高盐情况下对亚硝酸盐的去除依然可以达到90％以上。附图说明图1为解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)HL-6的菌落形态与个体形态图。图2为氯化钠含量与温度对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响示意图；其中A为氯化钠含量对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响；B为温度对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响。具体实施方式本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。实施例1：解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)HL-6的分离与鉴定：本专利技术的解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)HL-6自鱼露中筛选分离，菌株HL-6的菌落形态如图1所示，菌落呈圆形，粉色至红色，边缘整齐，个体形态为球形。分离菌株HL-6的鉴定利用27F和1492R细菌通用引物作为正反向引物，利用MightyAmpDNAPolymerase进行细菌菌落聚合酶链式反应(polymerasechainreactionPCR)扩增。PCR扩增体系：27F1.5μL，1492R1.5μL，MightyAmpDNAPolymerase1.5μL，2×MightyAmpBuffer30μL，ddH2O25.5μL，反应条件：98℃(预变性)2min，98℃(变性)10s，55℃(复性)15s，68℃(延伸)90s，72℃延伸10min，从变性到第一次延伸这个过程循环40次，将PCR产物送至上海生工公司测序，将测序结果利用BLAST搜索程序从GenBank进行同源性检索，并下载相似性高的模式菌株的16SrDNA基因序列进行分析。将菌株HL-6的测序结果，通过NCBI进行16SrDNA数据库BLAST，菌株HL-6与标准菌株SalinicoccusamylolyticusJC304的相似性最高，高达99.58％。选取序列相似度达99％的部分菌种，采用软件Mega5.05，Maximumlikelihood法制作系统发育树，菌株HL-6与SalinicoccusamylolyticusJC304在系统发育树上属于同一支系，鉴定菌株HL-6为解淀粉盐水球菌。该菌株已于2019年7月5日送至广东省微生物菌种保藏中心保藏，分类命名：SalinicoccusamylolyticusHL-6，保藏编号为：GDMCCNO：60715，地址：中国广州市广东省微生物研究所。实施例2：氯化钠含量与温度对解淀粉盐水球菌的生长的影响：1)将解淀粉盐水球菌HL-6接种于营养肉汤中，于25℃、120r/min下培养24h作为解淀粉盐水球菌种子液。将种子培养液按5％的接种量分别接入不同盐度的液体营养肉汤培养基中，氯化钠含量设置梯度为4％(以4％为例，为1L培养基中含有40g氯化钠)、6％、9％、12％、15％、18％、21％、24％和27％，用96孔板于25℃培养48h，每隔4h于波长600nm测定吸光度。结果如图2中的A，由图中的结果可知，解淀粉盐水球菌有良好的耐盐特性，可以耐受27％的氯化钠含量，当氯化钠含量高达27％时，可以缓慢生长。2)将解淀粉盐水球菌HL-6种子培养液按5％的接种量接入含有4％氯化钠的营养肉汤中液体培养基中，用96孔板培养，分别置于不同温度培养48h，每隔4h于波长600nm处测定吸光度，温度设置梯度为20℃、25℃、30℃、37℃。结果如图2中的B，由图中的结果可知，解淀粉盐水球菌在37℃培养时，在16h出现稳定期，但达到稳定期时，活菌数小于25℃培养的活菌数，说明当温度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株分离的去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌（

【技术特征摘要】
1.一株分离的去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌（Salinicoccusamyl...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘唤明，邓楚津，洪鹏志，周春霞，伍斌，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44