一种肠道微生物移植工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种肠道微生物移植工艺，包括如下步骤：1)粪便样本采集；2)肠道微生物的提取；3)肠道微生物制剂的制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊；4)肠道微生物的移植：通过灌肠或口服的方式将步骤3)得到的肠道微生物制剂进行移植。用于治疗肠道微生物失调导致的肠道疾病，以及由于肠道微生物失调导致的免疫系统和神经系统疾病。

【技术实现步骤摘要】
一种肠道微生物移植工艺
本专利技术涉及微生物医药
，具体涉及一种肠道微生物移植工艺。
技术介绍
目前，人们的生活环境越来越干净了，食物包装越来越精美，保证了符合卫生的要求，也就是绝对没有超标的细菌。然而现代的研究表明，现有环境的有益微生物越来越少，人们身体内有益微生物也越来越少，反之环境和身体内“有害”的微生物越来越多。现代科学研究表明，肠道菌群对人体的健康起着至关重要的作用。人体的肠道微生物与肠道内环境保持动态平衡状态，在某些情况下，这种平衡被打破，肠道微生物失调，引发疾病或者加重病情，引起并发症甚至发生多器官功能障碍综合症和多器官功能衰竭。假如一个人的体重有60kg，其体内的微生物大约有2kg，这些微生物可不是随来随走的那些“流动人口”，而是在体内长期定居，生存繁衍，辛勤工作，发挥功能的“常住人口”。科学家已经发现，人体微生物能够生产维生素、生产氨基酸、生产能量给我们使用；协助免疫系统追杀入侵的病原体；还能调控我们的情绪、欲望。如果把人体内的微生物清除，人类活不长，也活不好。就是说，我们不可能想象这个世界存在一个不和微生物合作的人类。借助基因的视角，我们能看清我们和微生物共处的真相：我们，包括其他大型动物，都没有所谓的一个一个“个体”，每一个都是和众多微生物一起，组成的一个“超级生物体”。肠道微生物移植又称粪菌移植(Fecalmicrobiotatransplantation，简称FMT)是将健康人粪便中的微生物分离出来，通过胃肠镜、肠镜、灌肠、口服等形式移植到患者肠道内，重建患者的肠道微生物，实现肠道及肠道外疾病治疗的技术。人与人体微生物群是一种共生关系。国际上已有用人体微生物做治疗，据自然杂志和科学杂志等报道，国内外有不少医院和科研机构开展了菌群移植FMT治疗研究，主要应用在四个方面：1、肠道方面：复发性艰难梭菌感染、慢传输型便秘、慢性腹泻、炎性肠病、放射性肠炎、肠易激综合征、溃疡性结肠炎、克罗恩病；2、小孩4A疾病：过敏、哮喘、多动症和自闭症；3、肥胖、Ⅱ型糖尿病等代谢综合征的临床应用研究；4、癌症的临床应用研究。此外，接受FMT患者临床研究时的一些意外发现：皮肤会变好，甚至一些人难治的皮肤病也好了；腹痛好了，甚至一些人的性功能获得了改善。目前已有肠道微生物移植的研究，例如中国专利申请CN201810612443一种基于粪便过滤及移植的肠道菌群研究方法，公开了一种基于粪便过滤及移植的药物与肠道菌群互作的研究方法，该方法包括如下步骤：1、粪菌移植受体实验动物的准备：粪菌移植受体实验动物选择伪无菌动物或无菌动物，造成一种肠道无菌或者少菌的环境，有利于外来微生物的定植；2、粪菌移植供体实验动物的准备，供体动物接受疾病模型造模及药物灌胃处理，设立药效的阳性及阴性实验对照；3、受体实验动物接受供体实验动物的过滤与非过滤粪菌移植。但该研究目前只限于动物实验，人体实验效果如何，还不好判断。又例如中国专利申请CN201810866487X一种粪菌定位移植方法，提供了一种粪菌定位移植的方法，以粪菌为主要内容物制备成胶囊进行口服，所述胶囊壳的溶解pH值与所述粪菌移植目标部位的pH值相适应，使所述胶囊在移植目标部位溶解，将所述粪菌定位移植于目标部位。但其每颗粪菌胶囊含2.88×1010个活性菌，活性菌数量偏少。综上所述，国内外的微生物移植治疗存在的一些缺陷：1)目前国内外的菌群库都是制备成液体，这样制作虽然简单，但是移植的时候必须使用肠镜，在麻醉的条件下把肠镜从肛门插入，从降结肠到横结肠再到升结肠，最后到达盲端，然后一边退出一边把菌液散布在整个盲肠，整个操作首先是麻醉风险，麻醉可能出现的意外。其次是肠镜可能会对肠道造成物理损害。2)菌液移植使用非常不方便，必须住院进行移植，这样大大增加了医疗成本。3)目前国内外都使用自愿捐赠者捐赠的肠道菌群，而据报道，家庭内特别是母亲与子女，兄弟姐妹间的菌群相容性是最好的，所以一昧地使用自愿捐赠者的肠道菌群，可能并不是一个太好的移植来源。因此，研发一种保存期限长，肠道微生物数量高的肠道微生物移植产品是一项有待解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术中肠道微生物移植产品的保存期限不长，肠道微生物数量不高的不足，本专利技术目的在于提出一种肠道微生物移植工艺，采用健康合格的志愿者捐赠的粪便，经过过滤、沉淀和浓缩，制备出高浓度肠道菌群的液体和胶囊(冻干)，用于治疗肠道微生物失调导致的肠道疾病，以及由于肠道微生物失调导致的免疫系统和神经系统疾病。本专利技术所述的一种肠道微生物移植工艺，包括如下步骤：1)粪便样本采集：①选取合格捐赠者捐赠的粪便样本，用一次性食品盒及朔料袋包装，在一小时内送到实验室，称重；②按1：(3-7)的重量比例加入生理盐水，匀浆，0.2-5.0μm过滤，去掉残渣；③对滤液进行检测，得到合格滤液；2)肠道微生物的提取：将合格滤液装入离心管，1000-2000rpm离心10-20分钟除去沉淀，上清液装入新的离心管中，3000-4000rpm离心5-10分钟，弃去上清，沉淀物用生理盐水洗涤，再次3000-4000rpm离心5-10分钟，反复三次，最后得到的液体用20-60μm的滤膜过滤，除去可能的寄生虫卵，得到沉淀，备用；3)肠道微生物制剂的制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊：①肠道微生物灌肠液：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:50的体积比混合，装入瓶中，置于-80℃冰柜保存备用；②肠道微生物胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，用移液器将混合液注入肠溶胶囊中，封装，将肠道微生物胶囊装入药瓶，药瓶中先放入1/4-1/3体积的干冰，冻结后，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；或者将肠道微生物胶囊先放置在速冻板上，冻结后，把胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；所述的速冻板是表面是纳米银离子表面处理的导热的高密度航空合金，平时放置在-80℃冰柜内，使用时取出，在其下面垫上冰袋；③肠道微生物冻干胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，放置到冻干机中冻干，将肠道微生物冻干粉装入肠溶胶囊，封装，将肠道微生物冻干胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；所述的冻存剂是将甘油、脱脂牛奶、乙酰化二淀粉磷酸酯，按照(9-11)mL:(88-92)mL:(0.01-0.02)g的比例混合均匀得到；4)肠道微生物的移植：通过灌肠或口服的方式将步骤3)得到的肠道微生物制剂进行移植。本专利技术步骤1)所述的合格捐赠者，是选择年龄在18-30岁之间，无不良嗜好，不吸烟、不嗜酒，饮食规律，睡眠规律，睡眠质量好无失眠；身体匀称，BMI值(身体质量指数)小于24，大于20，半年内无使用药物史，半年内无腹泻便秘等消化道症状的健康志愿者，每半年要抽血检测抗-HIV、HBsAg、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：包括如下步骤：/n1)粪便样本采集：/n①选取合格捐赠者捐赠的粪便样本，用一次性食品盒及朔料袋包装，在一小时内送到实验室，称重；/n②按1：(3-7)的重量比例加入生理盐水，匀浆，0.2-5.0μm过滤，去掉残渣；/n③对滤液进行检测，得到合格滤液；/n2)肠道微生物的提取：/n将合格滤液装入离心管，1000-2000rpm离心10-20分钟除去沉淀，上清液装入新的离心管中，3000-4000rpm离心5-10分钟，弃去上清，沉淀物用生理盐水洗涤，再次3000-4000rpm离心5-10分钟，反复三次，最后得到的液体用20-60μm的滤膜过滤，除去可能的寄生虫卵，得到沉淀，备用；/n3)肠道微生物制剂的制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊：/n①肠道微生物灌肠液：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:50的体积比混合，装入瓶中，置于-80℃冰柜保存备用；/n②肠道微生物胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，用移液器将混合液注入肠溶胶囊中，封装，将肠道微生物胶囊装入药瓶，药瓶中先放入1/4-1/3体积的干冰，冻结后，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；/n或者将肠道微生物胶囊先放置在速冻板上，冻结后，把胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；所述的速冻板是表面是纳米银离子表面处理的导热的高密度航空合金，平时放置在-80℃冰柜内，使用时取出，在其下面垫上冰袋；/n③肠道微生物冻干胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，放置到冻干机中冻干，将肠道微生物冻干粉装入肠溶胶囊，封装，将肠道微生物冻干胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；/n所述的冻存剂是将甘油、脱脂牛奶、乙酰化二淀粉磷酸酯，按照(9-11)mL:(88-92)mL:(0.01-0.02)g的比例混合均匀得到；/n4)肠道微生物的移植：通过灌肠或口服的方式将步骤3)得到的肠道微生物制剂进行移植。/n...

【技术特征摘要】
1.一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：包括如下步骤：
1)粪便样本采集：
①选取合格捐赠者捐赠的粪便样本，用一次性食品盒及朔料袋包装，在一小时内送到实验室，称重；
②按1：(3-7)的重量比例加入生理盐水，匀浆，0.2-5.0μm过滤，去掉残渣；
③对滤液进行检测，得到合格滤液；
2)肠道微生物的提取：
将合格滤液装入离心管，1000-2000rpm离心10-20分钟除去沉淀，上清液装入新的离心管中，3000-4000rpm离心5-10分钟，弃去上清，沉淀物用生理盐水洗涤，再次3000-4000rpm离心5-10分钟，反复三次，最后得到的液体用20-60μm的滤膜过滤，除去可能的寄生虫卵，得到沉淀，备用；
3)肠道微生物制剂的制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊：
①肠道微生物灌肠液：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:50的体积比混合，装入瓶中，置于-80℃冰柜保存备用；
②肠道微生物胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，用移液器将混合液注入肠溶胶囊中，封装，将肠道微生物胶囊装入药瓶，药瓶中先放入1/4-1/3体积的干冰，冻结后，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；
或者将肠道微生物胶囊先放置在速冻板上，冻结后，把胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；所述的速冻板是表面是纳米银离子表面处理的导热的高密度航空合金，平时放置在-80℃冰柜内，使用时取出，在其下面垫上冰袋；
③肠道微生物冻干胶囊：将步骤2)最后得到的沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1的体积比混合，放置到冻干机中冻干，将肠道微生物冻干粉装入肠溶胶囊，封装，将肠道微生物冻干胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；
所述的冻存剂是将甘油、脱脂牛奶、乙酰化二淀粉磷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄春松，兰云来，刘因强，
申请(专利权)人：广西细微生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广西;45