青稞益生菌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种青稞益生菌制剂及其制备方法，利用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，按青稞：水质量百分比1:10—1:20的比例溶解青稞粉，调节pH至7.0，接种地衣芽孢杆菌，35℃—38℃下发酵，离心收集发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊。本发明专利技术选用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，优化发酵条件，获得了青稞发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊，是一种稳定性较好、利于健康的青稞益生菌产品。

【技术实现步骤摘要】
青稞益生菌制剂及其制备方法
本专利技术涉及益生菌产品领域，更具体地，涉及一种青稞益生菌制剂及其制备方法。
技术介绍
益生菌制剂在食品、药品方面都可以有广泛应用，可以起到调理肠胃等等的作用。随着对肠胃菌研究的深入，会发现益生菌与健康之间更多的联系。这样一来，益生菌产品势必会越来越多，市场也更大。除去食品、药品上的应用，益生菌制剂也已经应用于农业、畜牧业等。青稞在西藏作为人民的主要经济作物，被种植在环境污染较少，气候比较寒冷和海拔较高的地方，使青稞拥有独特的营养和特色，属于真正的绿色健康食品，这几年来有着非常好的发展趋势，越来越多的青稞类产品的上市，体现出青稞极具未来的发展前景。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于，提供一种稳定性好的青稞益生菌制剂制备方法。本专利技术的第二个目的在于，提供一种稳定性好的青稞益生菌微囊。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种青稞益生菌制剂制备方法，利用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，按青稞：水质量百分比1:10—1:20的比例溶解青稞粉，调节pH至7.0，接种地衣芽孢杆菌，35℃—38℃下发酵，离心收集发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊。作为一个优选方案，溶解青稞粉时青稞与水质量百分比为1:15。作为一个优选方案，发酵时间为72h。本专利技术提供了利用上述青稞益生菌制剂制备方法制备获得的青稞益生菌微囊。发酵过程中优化发酵条件，分别对料水比、起始pH、地衣芽胞杆菌接种量、发酵时间进行单因素实验，研究对发酵液内活菌数、发酵液形态、还原糖含量的影响。最终确定最佳的发酵条件，为制备益生菌微囊做准备。本专利技术人选择利用挤压法制备微囊。本专利技术中微囊和微球是相同的概念。将制备的微囊分为两批，一批直接在氯化钙里固定，另一批浸入壳聚糖中再包上一层壳聚糖。后续实验主要对两种微囊进行各种指标的评价，分别对微囊的表观形态、存活率、耐酸碱性进行实验，最终选择最优的配方制备益生菌制剂。所述方法包括了制备胶体溶液，加入微生物和通过针或喷嘴挤出细胞悬液，液滴滴入硬化溶液，固定等过程；所述的微囊大小取决于液滴落下的距离、针孔的直径与亲水性胶体的浓度与组成。微囊大小平均粒径均在3mm左右，干燥后，发生皱缩，粒径变小，为2.0mm左右。微囊在45℃烘箱干燥两小时，海藻酸钠微囊的包埋率为82.26％，海藻酸钠-壳聚糖微囊为86.84％。本专利技术的优点在于，本专利技术选用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，优化发酵条件，获得了青稞发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊，是一种稳定性较好、利于健康的青稞益生菌产品。附图说明图1、实验流程图。图2、地衣芽孢杆菌生长曲线。图3、葡萄糖标准曲线。图4、海藻酸钠微球制备流程示意图。图5、料水比对还原糖含量的影响。图6、起始pH对还原糖的影响。图7、干燥前微囊形态。图8、游标卡尺测量微囊粒径大小(左-干燥前；右干燥后)。图9、包封地衣芽孢杆菌的湿态与干态微胶囊。图10、两种微囊的释放情况。具体实施方式以下，结合具体实施方式对本专利技术的技术进行详细描述。应当知道的是，以下具体实施方式仅用于帮助本领域技术人员理解本专利技术，而非对本专利技术的限制。本专利技术人筛选到合适的发酵菌种，提供一种以地衣芽孢杆菌作为发酵菌种进行对青稞粉发酵。本专利技术的实验流程如图1所示。发酵过程中优化发酵条件，分别对料水比、起始pH、地衣芽胞杆菌接种量、发酵时间进行单因素实验，研究对发酵液内活菌数、发酵液形态、还原糖含量的影响。最终确定最佳的发酵条件，为制备益生菌微囊做准备。本专利技术人选择利用挤压法制备微囊。将制备的微囊分为两批，一批直接在氯化钙里固定，另一批浸入壳聚糖中再包上一层壳聚糖。后续实验主要对两种微囊进行各种指标的评价，分别对微囊的表观形态、存活率、耐酸碱性进行实验，最终选择最优的配方制备益生菌制剂。一、试验材料1、主要原材料青稞粉(市购，产自西藏—日喀则)。2、实验菌种CGMCC1.0813地衣芽孢杆菌，由中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)提供，培养温度为37℃。3、主要溶液0.5mol/L氯化钙溶液：55.5g无水氯化钙加超纯水定容至1000mL，121℃高压蒸汽灭菌20min。0.4％壳聚糖溶液：4g壳聚糖+200mL0.5mol/LCaCl2+10mL冰醋酸，定溶至1000mL，5mol/L的NaOH调pH至5.0；2％海藻酸钠溶液：10g海藻酸钠溶于500mL超纯水，60℃加热搅拌充分溶解后，超声除去气泡，使溶液均匀，121℃高压蒸汽灭菌20min；模拟胃液(SGF)：将2.0gNaCl和3.2g纯化猪源蛋白酶加入7mL浓盐酸，溶解，向溶液中加入蒸馏水定容至1000mL，pH约为1.2；模拟肠液(SIF)：将6.8gKH2PO4和10g胰酶加入800mL蒸馏水，混合均匀，再用蒸馏水定容至1000mL，最后用0.2NNaOH将pH调至7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min。微球裂解液：0.06M柠檬酸三钠溶液加0.2M碳酸氢钠溶液，pH调至8.0。4、主要培养基LB液体培养基——酵母提取物0.5％；氯化钠1％；胰蛋白胨1％；LB固体培养基——在液体基础上加入1.5％琼脂。在锥形瓶中按比例称量所需试剂，加水溶解完全后，盖上封口膜高压灭菌。每一瓶液体培养基的装量是瓶子容量的五分之一，例如250ml的锥形瓶装50ml培养基。而固体培养基一般250ml瓶中装100ml。LB培养基灭菌温度用121℃，时间为25到30分钟。固体培养基灭菌后，在超净台倒平板。培养皿也要事先经过灭菌、干燥。100ml的培养基约可以倒6块平板。操作时，培养基以50℃左右为宜，琼脂未凝固也不烫手的条件下。平板可以用封口膜包好置于4℃冰箱保存。5、主要试剂胰蛋白胨(英国OXOID公司)，酵母提取物(英国OXOID公司)，氯化钠(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，葡萄糖(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，琼脂(AR上海天莲化工科技有限公司)，菊粉(南京中浩生物工程有限公司)，海藻糖(南京中浩生物工程有限公司)，乳糖(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，β-环糊精(国药集团化学试剂有限公司)，可溶性淀粉(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，结晶紫染料(BR上海阿拉丁试剂有限公司)，海藻酸钠(国药集团化学试剂有限公司)，壳聚糖(上海伯奥生物科技有限公司)，乙醇(泰坦科技有限公司)，柠檬酸(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，磷酸氢二钠(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，盐酸(AR上海凌峰化学试剂有限公司)，羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)。6、主要仪器设备烧杯，试管，锥形瓶，玻璃棒，培养皿，离心管，量筒，比色皿，酒精灯，称量纸自封袋，涂布棒，接种环，盖玻片，载玻片，血球计数板电子天平(BSA223S-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青稞益生菌制剂制备方法，其特征在于，利用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，按青稞：水质量百分比1:10—1:20的比例溶解青稞粉，调节pH至7.0，接种地衣芽孢杆菌，35℃—38℃下发酵，离心收集发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊。/n

【技术特征摘要】
1.一种青稞益生菌制剂制备方法，其特征在于，利用地衣芽孢杆菌发酵青稞粉，按青稞：水质量百分比1:10—1:20的比例溶解青稞粉，调节pH至7.0，接种地衣芽孢杆菌，35℃—38℃下发酵，离心收集发酵液，将发酵产物与海藻酸钠溶液混合后滴入氯化钙中固化成微粒制备微囊。


2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：马兴元，仁青旺姆，韩明勋，郑文云，倪旎，刘畅，刘地，胡发彪，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31