一种男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片及其试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于男性多肿瘤标志物检测的蛋白芯片及其试剂盒，该芯片包括上盖、基片和底座，基片上阵列式分布有检测肿瘤的蛋白标志物；上盖和底座两者相嵌，基片夹在两者中间，共同构成检测芯片。本实用新型专利技术还提供一种包含该芯片的试剂盒，包括１０瓶以上的试剂，其中包括：标准品（５－１０瓶），质控品（３－６瓶），样本稀释液（１瓶），酶标工作液（１瓶），浓缩洗涤液（１瓶）和检测液（２瓶）；各液体为瓶装，用纸质模板固定于包装盒内。利用本实用新型专利技术的蛋白芯片仅通过一次反应就可得到多种指标的反应结果，可以同时筛查多种肿瘤。本实用新型专利技术结构简单，制作成本低，便于运输，使用方便。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及蛋白芯片疾病检测产品，具体地说，涉及一种男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片及其试 剂盒。
技术介绍
恶性肿瘤的早期诊断可以提高患者的预后和生存率，男性恶性肿瘤(包括原发性肝癌、前列腺癌、胰 腺癌、肺癌、食管癌、胃癌、结肠直肠癌)的临床诊断方法一般包括影像学检查(如B超、X线钡餐、X线、 CT、 MRI)、血清肿瘤标志物检测(如tPSA、 AFP、 CA19-9等)、直肠指诊、内镜检査(食管内镜、纤维胃 镜、可折式乙状结肠镜、全结肠镜)和活组织病理检查。尽管影像学检査和内镜检査可以早期发现恶性肿 瘤，但由于价格昂贵或具有入侵性，不能应用于一般人群的体检筛查。然而，多数恶性肿瘤早期鲜有临床 症状，当出现症状去医院就诊时，己发展为恶性肿瘤中晚期，病人的预后和生存率较低。越来越多的研究显示血清肿瘤标志物检测有助于恶性肿瘤的早期发现、提示预后或监测病程，而且 血清肿瘤标志物联合检测可以提高恶性肿瘤检测的敏感性和特异性。目前用于血清标志物检测的方法可分 为三大类单指标单人份(如免疫胶体金、自动化免疫分析仪)、单指标多人份(ELISA)和多指标多人份 (蛋白芯片)。与单指标检测方法相比，蛋白芯片检测有样本用量少、所需时间短、价廉等优点，更适于 多肿瘤标志物的联合检测。男性，尤其是中年男性是社会的主要劳动力，同时也是最忙碌的群体，往往对身体过于自信，忽视检 査。需要一种简便，适应快节奏生活的检査方法用于男性的体检。目前市场上尚没有专门针对男性肿瘤进 行检测的多指标蛋白检测产品。另外肿瘤检测指标经报道已经不少，但指标选择不当会产生假阳性或假阴 性偏高的问题，从而使临床检测失去意义。所以我们需要一种指标选择合适，专门针对男性作肿瘤检测的 多指标蛋白检测产品。
技术实现思路
本技术要提供一种专门用于男性肿瘤检测，并且指标选择恰当的多肿瘤蛋白标志物检测芯片，以 及包含该芯片的试剂盒。本专利技术涉及的检测指标恰当，应用反应条件一致，避免了交叉反应和酶反应底物 的潜在危害和污染，大大提高了检测的效率，降低了假阳性率。本专利技术可以适用于男性无症状人群和高危 人群的恶性肿瘤普査。可同时筛査肿瘤包括原发性肝癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、食管癌、胃癌和结 肠直肠癌。辅助诊断原发性肝癌、前列腺癌和胰腺癌。指标与检测项目对应关系见下表。恶性肿瘤标志物原发性肝癌AFP前列腺癌tPSA胰腺癌CA19-9; CEA肺癌NSE; SCC-ag; CYFRA21-1; CEA结肠直肠癌CEA: CA19-9胃癌CEA; CA19-9食管癌CYFRA21-1; SCC-ag; CEA本技术目的是这样实现的，专利技术人根据已报道的肿瘤标志物的临床应用情况以及中国男性肿瘤的 流行病学特点，选取AFP、 CEA、 NSE、 CYFRA2H、 CA19-9、 tPSA和SCC-ag七个肿瘤标志物，与阳性指标， 阴性指标构成阵列式点样涂层，同时点阵于一张基片上，每个阵列可有多次重复。本技术涉及的用于男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指 标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括AFP、 CEA、 NSE、 CYFRA21-1、 CA19-9、 tPSA和 SCC-ag共7个肿瘤标志物，以共价键盘或非共价键固定在基片上面。所述的基片可以是玻璃片基，硝酸纤 维素膜或尼龙膜。上述基片的一个优选例是醛基化玻片。上述的对照检测指标涂层包括阳性对照和阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗体点样所 用的稀释液。上述涂层上的每个阵列中蛋白检测指标每个有2-10个重复，对照指标有l-5个重复。阵列的多少和 大小与待检样品的数目，基片大小，以及点样直径有关。上述蛋白检测指标与检测阵列的优选例是当蛋白检测指标点样直径为O. lnim时，点间距0.6mm，阵 列大小为6mmX5mm,可在硝酸纤维素膜蛋白芯片上设置24个阵列。本专利技术还提供了包含上述男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片的试剂盒，还包括标准品和质控品；标准品 与质控品为瓶装，用纸质模板固定于包装盒内。上述的试剂盒，还包括样本稀释液，酶标工作液，浓縮洗涤液，检测液；各液体为瓶装，与标准品和 质控品一起用纸质模板固定于包装盒内。各部分由纸质模具固定于一包装盒内，不限放置方式，检测时配 套使用。上述的标准品由5-10个不同浓度梯度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入一个容器，蛋白混合 液由7个多肿瘤标志物蛋白检测指标按不同浓度混合而成。标准品用于在每次标本检测结束后做标准曲线， 可以定量测定样品中的检测指标的蛋白浓度。上述的质控品由3-6个不同浓度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入一个容器，蛋白混合液由7 个多肿瘤标志物蛋白检测指标按不同浓度混合而成。质控品可以监测整个检测系统的CV值，保证每次检 测结果的有效性。上述的样本稀释液是一种蛋白稳定剂；可以是由3% BSA和0.05X防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐 缓冲液(PH 7.4)配制而成;上述的酶标工作液由含有HRP标记的相应抗原或单克隆抗体，以及检测抗体服P-羊抗兔IgG的前述样 本稀释液组成；上述的浓縮洗漆液是一种中性缓冲液；可以是磷酸盐缓冲液；上述的检测液指配套使用的两种试剂， 一种含有鲁米诺和化学发光增强剂，另一种含有过氧化氢。附图说明图1是男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片的外观图，l为反应区域，底部为点样涂层的基片。 图2是点样阵列示意图，第1行为阳性对照兔IgG抗体和阴性对照，各有3个重复点样；其余各行分 别为蛋白检测指标点样AFP、 CEA、 NSE、 CYFRA21-1、 CA19-9、 tPSA和SCOag，每行两个指标，第一行AFP、 CEA，第二行NSE、 CYFRA21-1，第三行CA19-9、 tPSA，第四行SCC-ag，各有5个重复点样。图3是男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片试剂盒示意图。2代表浓縮洗涤液；3代表1瓶样本稀释液和1瓶酶标工作液；4代表2瓶配套使用的检测试剂；5代表标准品；6代表质控品。图4为检测血清示意图，其中12个矩形表示所在加样区域加的是标准品,6个标准品每个重复2次；4 个多边形表示所在加样区域加的是质控品；其余圆形表示所在加样区域加的是样本。具体实施方式 实施例1:一种男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片的制备其步骤主要是(1)准备基质硝酸纤维素膜；(2)设计芯片，确定点阵的排列方式和点样位置；(3) 点样针从384孔板吸出抗体喷点于硝酸纤维素膜上；(4)装配硝酸纤维素膜，并且进行封闭、干燥、包装、 保存。上述用于检测男性多肿瘤标志物抗体的蛋白芯片的制备方法具体包括以下步骤1. 肿瘤标志物检测抗原抗体的确定 检测指标抗原的确定肿瘤标志物CEA是由六段相似度很高的肽段组合而成，因而选择了其中的A1+B1段进行基因工程表 达；PSA、 NSE、 SCC-ag和CYFRA21-l均为全长基因工程表达；而AFP和CA19-9则为纯化的肿瘤细胞 分泌抗原。检测指标抗体的确定所采用的检测抗体对均为小鼠杂交瘤单克隆抗体对，其检测精度和准确度明显优于多克隆抗体。2. 点样制备具检测指标涂层的膜芯片用Gesim点样仪喷点，点样针从384孔板吸出抗体喷点于硝酸纤维素膜上，点阵形式为10X本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种男性多肿瘤标志物检测蛋白芯片，其特征在于，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＮＳＥ、ＣＹＦＲＡ２１－１、ＣＡ１９－９、ｔＰＳＡ和ＳＣＣ－ａｇ共７个肿瘤标志物，以共价键或非共价键固定在基片上面。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，张璐，顾蓉，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：31[中国|上海]