一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒，属于免疫检测技术领域。犬癌胚抗原免疫梳以梳子形的PVC板为底板，每个PVC板上带有8～12个梳齿；所述梳齿的宽度为2～4mm，所述梳齿的长度为10～12mm，每两个梳齿的间距为5～7mm；在每个梳齿的一面固定有包被着80～120μg/ml癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜。本发明专利技术还提供了包括所述免疫梳的犬癌胚抗原检测试剂盒。该试剂盒利用双抗夹心的免疫学原理进行犬癌胚抗原的检测，使检测过程保留了常规ELISA的敏感、特异的优点，同时又克服了许多繁琐的操作，节省了操作时间，达到快速诊断的目的，可在宠物医院就地进行诊断检测。

【技术实现步骤摘要】
一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒。
技术介绍
随着宠物犬数量的增多，以及饲养和医疗条件的不断改善，犬类的增生性疾病特别是各类良恶性肿瘤的发病率不断提高。宠物医院对肿瘤疾病的检测手段有一定的局限性。肿瘤标志物的存在或量变可以提示肿瘤的性质，癌胚抗原作为一种比较成熟的广谱肿瘤标记物已经运用在了常规体检中。当前检测癌胚抗原的技术手段主要依赖于ELISA和化学发光等检测方法，这些检测方法普遍存在检测操作繁琐，造成检测时间长，而且需借助于大型特殊仪器实现检测，需要去专门的检测机构才能得到检测结果，因此检测不方便。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒，具有快速、简便、经济、不需任何特殊仪器的特点，能够实现快速检测。本专利技术提供了一种犬癌胚抗原免疫梳，所述免疫梳以梳子形的PVC板为底板，每个PVC板上带有8～12个梳齿；所述梳齿的宽度为2～4mm，所述梳齿的长度为10～12mm，每两个梳齿的间距为5～7mm；在每个梳齿的一面固定有包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜；所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为80～120μg/ml。优选的，所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为100μg/ml。优选的，所述包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜是将癌胚抗原单克隆抗体溶解于包被液中，得到捕获抗体溶液包被在硝酸纤维素膜上，将晾干后的NC膜用封闭液封闭得到。优选的，所述包被液为pH值9.6的NBS缓冲液；所述包被的温度为37℃；所述包被的时间为1h。优选的，所述封闭液为含质量浓度3％的BSA的PBS缓冲液；所述封闭的温度为4℃，所述封闭的时间为12h。本专利技术提供了一种犬癌胚抗原检测试剂盒，包括所述犬癌胚抗原免疫梳。优选的，还包括酶标抗体、显色液、洗涤液、阳性参考品和96孔板。优选的，所述酶标抗体的工作稀释度为1:400；所述酶标抗体的母液浓度为1.92mg/ml。优选的，所述阳性参考品的工作浓度为5ng/ml。优选的，所述酶标抗体中酶为辣根过氧化物酶时，所述显色液为DAB显色液。本专利技术提供的犬癌胚抗原免疫梳和检测试剂盒，将捕获抗体包被在蛋白吸附力极强的硝酸纤维素膜上，再将硝酸纤维素膜固定在PVC板的梳齿上，检测时利用双抗夹心的免疫学原理进行犬癌胚抗原的检测。本专利技术提供的犬癌胚抗原免疫梳是基于检测试纸条检测和ELISA检测的结合，将捕获抗体包被在可移动的PVC板的NC膜上，使检测过程实现快速、简便、经济、不需任何特殊仪器，保留了常规ELISA的敏感、特异的优点，同时，又克服了许多繁琐的操作，节省了操作时间，缩短了实验周期，完全可在宠物医院就地进行诊断检测，达到快速诊断的目的。附图说明图1为本专利技术提供的犬癌胚抗原免疫梳实物图；图2为未固定硝酸纤维素膜的PVC板实物图；图3为不同浓度包被抗体与以及不同稀释度的酶标抗体的显色结果；图4为不同包被液的显色结果；图5为不同包被温度的显色结果；图6为不同封闭液的显色结果；图7为不同封闭条件的显色结果；图8为不同酶标抗体反应条件的显色结果；图9为检测灵敏度结果。具体实施方式本专利技术提供了一种犬癌胚抗原免疫梳，所述免疫梳以梳子形的PVC板为底板，每个PVC板上带有8～12个梳齿；所述梳齿的宽度为2～4mm，所述梳齿的长度为10～12mm，每两个梳齿的间距为5～7mm；在每个梳齿的一面固定有包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜；所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为80～120μg/ml。在本专利技术中，所述包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜优选是将癌胚抗原单克隆抗体溶解于包被液中，得到捕获抗体溶液包被在硝酸纤维素膜上，将晾干后的NC膜用封闭液封闭得到。所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度优选为100μg/ml。本专利技术对癌胚抗原单克隆抗体的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的癌胚抗原单克隆抗体即可。在本专利技术实施例中，所述癌胚抗原单克隆抗体购自上海领潮生物科技有限公司，批号L1C00202。所述包被液优选为pH值9.6的NBS缓冲液。与pH值7.4的PBS缓冲液相比，pH值9.6的NBS缓冲液作为包被液有利于提高免疫梳的检测灵敏度。所述包被的温度优选为37℃；所述包被的时间优选为1h。所述37℃包被温度比室温包被更有利于癌胚抗原单克隆抗体稳定的固定在NC膜上，从而提高检测灵敏度和稳定性。所述捕获抗体溶液包被在硝酸纤维素膜上优选点布在NC膜上，固定时将点布有捕获抗体的NC膜裁剪下来备用。在本专利技术中，所述封闭液优选为含质量浓度3％的BSA的PBS缓冲液；与脱脂牛奶作为封闭液相比，用BSA的PBS缓冲液封闭NC膜，有利于提高封闭效果；同时与含5％的BSA的PBS缓冲液相比，含3％的BSA的PBS缓冲液就能够实现较好的封闭效果。所述封闭的温度为4℃，所述封闭的时间为12h。37℃封闭2h后晾干、室温封闭2h后晾干与4℃过夜封闭后晾干相比，封闭效果差异不大，但是4℃过夜封闭后晾干对检测的连贯性以及便捷性最有利。本专利技术对所述硝酸纤维素膜固定在PVC板的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的固定方法即可。在本专利技术实施例中，所述硝酸纤维素膜的固定方法是粘贴在PVC板上。在本专利技术中，所述免疫的制备方法优选如下：将PVC板裁剪成梳齿状，将包被着癌胚抗原单克隆抗体的NC膜裁剪后依次固定梳齿状PVC板齿状部分，最后分装到自封袋中4℃保存备用，见图1。所述PVC板裁剪成梳齿状是指PVC板的梳齿可直接插入96孔检测板一列8孔或一行12孔中；所述梳齿的齿宽优选为3mm、齿长优选为11mm、每两齿的间距优选为6mm，具体如图2所示。在本专利技术中，所述免疫梳的使用方法为将待测样品溶液添加到96孔板中，将所述免疫梳同时插入反应孔中孵育，孵育结束后拔出免疫梳后洗涤，再插入添加有酶标抗体的反应孔中孵育，孵育结束后拔出免疫梳，再次洗涤，插入显色液中显色，根据检测阳性参考品的梳齿显示强弱来判断检测样品中是否含犬癌胚抗原。本专利技术对所述酶标抗体、洗涤用溶液以及显色液等试剂没有特殊限制，采用本领域所熟知的上述试剂的来源即可。本专利技术提供了一种犬癌胚抗原检测试剂盒，包括所述犬癌胚抗原免疫梳。在本专利技术中，所述试剂盒优选还包括酶标抗体、显色液、洗涤液、阳性参考品和96孔板。所述酶标抗体的工作稀释度优选为1:400；所述酶标抗体的母液浓度为1.92mg/ml。与酶标抗体用PBS溶液分别以1:1600、1:800、1:100的浓度梯度稀释相比，酶标抗体稀释倍数为1:400时，显色达到最深，检测灵敏度最高。本专利技术对所述酶标抗体的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的癌胚抗原的单克隆抗体即可。在本专利技术实施例中，所述癌胚抗原的单克隆抗体购自上海领潮生物科技有限公司，批号L1C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种犬癌胚抗原免疫梳，其特征在于，所述免疫梳以梳子形的PVC板为底板，每个PVC板上带有8～12个梳齿；所述梳齿的宽度为2～4mm，所述梳齿的长度为10～12mm，每两个梳齿的间距为5～7mm；/n在每个梳齿的一面固定有包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜；/n所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为80～120μg/ml。/n

【技术特征摘要】
1.一种犬癌胚抗原免疫梳，其特征在于，所述免疫梳以梳子形的PVC板为底板，每个PVC板上带有8～12个梳齿；所述梳齿的宽度为2～4mm，所述梳齿的长度为10～12mm，每两个梳齿的间距为5～7mm；
在每个梳齿的一面固定有包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜；
所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为80～120μg/ml。


2.根据权利要求1所述免疫梳，其特征在于，所述癌胚抗原单克隆抗体的包被浓度为100μg/ml。


3.根据权利要求1或2所述免疫梳，其特征在于，所述包被着癌胚抗原单克隆抗体的硝酸纤维素膜是将癌胚抗原单克隆抗体溶解于包被液中，得到捕获抗体溶液包被在硝酸纤维素膜上，将晾干后的NC膜用封闭液封闭得到。


4.根据权利要求3所述免疫梳，其特征在于，所述包被液为pH值9.6的NBS缓冲液；
所述包被的温度为37...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶田谷晟，杨显超，于讳茹，赵洪进，王建，李凯航，齐新永，鞠厚斌，李鑫，葛菲菲，杨德全，沈海潇，葛杰，
申请(专利权)人：上海市动物疫病预防控制中心上海市兽药饲料检测所，上海市畜牧技术推广中心，
类型：发明
国别省市：上海;31