一种刺五加的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种刺五加的检测方法，是通过高效、快速和灵敏的毛细管电泳电化学检测手段进行鉴别分析的方法。此方法结合了简单的甲醇超声萃取和毛细管电泳电化学检测分析方法，通过对比活性成分的含量及所获得的毛细管电泳电化学指纹图谱，基于峰数、峰高及峰高比值鉴别了草药刺五加的不同部位以及不同产地的刺五加。本法实现了对中草药刺五加内在质量的综合评价和整体性质的全面控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药刺五加的检测方法，具体涉及一种刺五加的毛细管电泳电化学检测方法。
技术介绍
刺五加是一种广泛种植在河北、吉林、辽宁和华北地区的草药。但是只有产于黑龙江省的刺五加被认为是道地药材。在中国药典中，中草药刺五加是五加科植物刺五加(Acanthopanax senticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms)的干燥根及根茎或茎。此外，植物刺五加的叶也可药用。刺五加的药物活性与人参相似，具有强身健体的作用。因此，关于刺五加的研究引起了研究者的广泛兴趣。异秦皮啶、绿原酸和芦丁是刺五加中的重要生物活性成分。其中，异秦皮啶的含量是制定刺五加类药物标准的重要指标。很多方法已被使用分析刺五加的成分，而且刺五加叶的质量检测已有专利文献报道(专利号01104005)。但是，不同产地的刺五加茎和刺五加的不同部位的鉴别，以及这些活性成分在不同部位中的分布迄今为止还没有分析以及专利报道。目前，用于中草药指纹分析的方法主要是高效液相色谱紫外检测法。毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)法用于中草药的分析与其相比具有许多优势①毛细管柱易清洗；②样品前处理简单③分析时间短；④由于柱效高，有可能使同一分离条件适合多种样品中多组分的分析；⑤超小的样品体积和低的溶剂消耗；⑥分离模式多，适合于中草药中各类化学成分的分析。紫外检测法具有好的通用性，但短的毛细管光路使得其灵敏度较低。相比之下，电化学检测法(electrochemical detection，ED)提供了高的灵敏度，且装置简单。因此，采用高效的CE和灵敏的ED指纹分析中草药可以更好地保证其真实、质量、安全和药效。
技术实现思路
本专利技术提供，是一种仪器廉价、操作简单及快速和灵敏的毛细管电泳电化学分析方法，是将指纹图谱分析与活性成分含量测定相结合从而控制及评价草药刺五加质量的方法。本专利技术的方法分以下几个步骤(1)缓冲溶液的配制直接混合NaH2PO4和Na2B4O7的水溶液，并用0.20mol L-1HCl或0.20molL-1NaOH调节其pH值为5.0-9.0。(2)草药刺五加中活性成分标准品溶液的制备及其循环伏安实验草药刺五加的主要活性成分是异秦皮啶、绿原酸和芦丁，它们分别用甲醇溶解成浓度为3-8mol L-1的溶液。活性成分标准品溶液的循环伏安实验过程是将33μm碳纤维微盘电极(CFE)在分别含有异秦皮啶、绿原酸和芦丁的NaH2PO4和Na2B4O7混合溶液中循环扫描，考察其循环伏安行为。(3)检测条件的优化，并在此优化条件下进行重现性、检测限和线性范围的考察在0.45-1.35V间变化检测电位、5.0×10-3-8.5×10-3mol L-1和5.0×10-3-9.0×10-3mol L-1间变化NaH2PO4和Na2B4O7的浓度、5.0-9.0间变化缓冲溶液pH值、8-35s间变化进样时间和5-17.5kV间变化分离电压考察对峰电流、迁移时间、分离度和分离效率的影响。(4)草药样品溶液的制备用带有20-80目筛子的植物粉碎机粉碎草药样品，称取0.3-0.8g的草药样品，用甲醇水浴超声15-30min，之后倾出上清夜，此萃取过程再重复1-3次。最后，萃取液减压蒸馏近干，用甲醇溶解残渣并定容于3-8mL的甲醇中。操作前，所有的样品溶液均用0.22μm的纤维素酯膜过滤并稀释到所需要的浓度直接进样分析。(5)刺五加CE-ED指纹图谱的获得刺五加CE-ED指纹图谱的获得是在步骤(3)中所获得的最佳条件下进行电泳分析得到的。(6)对比标准混合溶液和实际样品中活性成分的峰高确定实际样品中活性成分的含量；(7)对比所获得的CE-ED指纹图谱，分别从几个不同的指纹片段鉴别草药刺五加的不同部位以及不同产地的刺五加茎。本专利技术所阐述的草药刺五加质量控制与指纹鉴别方法的优点是 CE-ED法仪器简单只需一根廉价的毛细管、一个微盘工作电极、直流高压仪器(±30kV)、电化学分析仪；消耗试剂和溶液少采样体积通常只有几纳升，对环境影响很小；高效和快速通常CE完成一个检测过程只要几分钟到十几分钟，并且可以得到高达几十万/米的理论塔板数；由于其只对电活性组分有响应，所以其选择性好，且检测限低，通常可达到10-8mol L-1，线性范围达2-3个数量级。附图说明图1是不同产地刺五加茎(即a帽儿山；b五大连池；c五常；d牡丹江)的CE-ED指纹图谱对比；图中I、II、III、II’和III’分别是指纹片段I、II、III、II’和III’；峰1为异秦皮啶，峰3为绿原酸。图2是草药刺五加不同部位(即a根；b叶；c根茎；d茎)的CE-ED指纹图谱对比；图中I、II、III和III’分别是指纹片段I、II、III和III’；峰1为异秦皮啶，峰2为芦丁，峰3为绿原酸。具体实施例方式下面，结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1不同产地刺五加茎的定量检测及指纹鉴别分析(1)缓冲溶液的配制，其具体方法是直接混合NaH2PO4和Na2B4O7的水溶液，pH值分别为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0的溶液用0.20mol L-1HCl或0.20mol L-1NaOH调节。(2)活性成分标准品溶液的制备及其循环伏安实验，过程如下标准品溶液的制备浓度均为5.0×10-3mol L-1异秦皮啶、芦丁和绿原酸的溶液分别用甲醇溶解，并储备于4℃的冰箱中，使用前用二次水稀释到所需浓度。标准品溶液的循环伏安实验首先将33μm CFE电极在NaH2PO4和Na2B4O7混合溶液中循环扫描一周作为背景。然后将此电极分别在含有1.0×10-4mol L-1异秦皮啶、1.0×10-4molL-1芦丁和1.0×10-4mol L-1绿原酸的NaH2PO4和Na2B4O7混合溶液中循环扫描一周，考察它们的循环伏安行为。(3)检测条件的优化，并在此优化条件下进行重现性、检测限和线性范围的考察；检测条件优化的具体过程是 在0.45-1.35V间变化检测电位、5.0×10-3-8.5×10-3mol L-1和5.0×10-3-9.0×10-3mol L-1间变化NaH2PO4和Na2B4O7的浓度、5.0-9.0间变化缓冲溶液pH值、8-35s间变化进样时间和5-17.5kV间变化分离电压考察对峰电流、迁移时间、分离度和分离效率的影响。在最佳的分离和检测条件下检测电位为1.20V；缓冲溶液为7.0×10-3molL-1NaH2PO4+7.5×10-3mol L-1Na2B4O7(pH＝7.0)；17cm高度进样25s；分离电压为15kV，在6min内分析物异秦皮啶、芦丁和绿原酸达到基线分离并具有高的灵敏度。在上面所描述的最佳条件下，实验了一系列标准混合溶液，浓度范围从1.0×10-7到1.0×10-4mol L-1的异秦皮啶、2.0×10-7到1.0×10-4mol L-1的芦丁和1.5×10-6到5.0×10-5mol L-1的绿原酸。得到了跨越1-3个数量级的线性范围，相关系数超过0.99。采用此CE-ED方法实际检测到的异秦皮啶、芦丁和绿原酸的检测限分别为1.0×10-7mol L-1、2.0×10-7mol L-1和1.5×10-6mol L-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种刺五加的检测方法，其特征在于将毛细管电泳电化学法用于指纹鉴别不同产地的刺五加以及刺五加的不同部位，其步骤和条件如下：（１）缓冲溶液的配制直接混合ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］和Ｎａ↓［２］Ｂ↓［４］Ｏ↓［７］的水溶液，并用０ ．２０ｍｏｌＬ↑［－１］ＨＣｌ或０．２０ｍｏｌＬ↑［－１］ＮａＯＨ调节其ｐＨ值为５．０－９．０；（２）草药刺五加中活性成分标准品溶液的制备及其循环伏安实验草药刺五加的主要活性成分是异秦皮啶、绿原酸和芦丁，它们分别用甲醇溶解成 浓度为３－８ｍｏｌＬ↑［－１］的溶液；活性成分标准品溶液的循环伏安实验过程是：将３３μｍ碳纤维微盘电极（ＣＦＥ）在分别含有异秦皮啶、绿原酸和芦丁的ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］和Ｎａ↓［２］Ｂ↓［４］Ｏ↓［７］混合溶液中循环扫描 ，考察其循环伏安行为；（３）检测条件的优化，并在此优化条件下进行重现性、检测限和线性范围的考察在０．４５－１．３５Ｖ间变化检测电位、５．０×１０↑［－３］－８．５×１０↑［－３］ｍｏｌＬ↑［－１］和５．０×１０↑［－３］－９ ．０×１０↑［－３］ｍｏｌＬ↑［－１］间变化ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］和Ｎａ↓［２］Ｂ↓［４］Ｏ↓［７］的浓度、５．０－９．０间变化缓冲溶液ｐＨ值、８－３５ｓ间变化进样时间和５－１７．５ｋＶ间变化分离电压考察对峰电流、迁移时间、分离度和分离效率的影响；（４）草药样品溶液的制备用带有２０－８０目筛子的植物粉碎机粉碎草药样品，称取０．３－０．８ｇ的草药样品，用甲醇水浴超声１５－３０ｍｉｎ，之后倾出上清夜，此萃取过程再重复１－３次；最后，萃取液减压蒸馏近干，用甲醇溶 解残渣并定容于３－８ｍＬ的甲醇中，操作前，所有的样品溶液均用０．２２μｍ的纤维素酯膜过滤并稀释到所需要的浓度直接进样分析；（５）刺五加ＣＥ－ＥＤ指纹图谱的获得刺五加ＣＥ－ＥＤ指纹图谱的获得是在步骤（３）中所获得的最佳条件下进 行电泳分析得到的；（６）对比刺五加标准混合溶液和刺五加实际样品中活性成分的峰高确定刺五加实际样品中活性成分的含量；（７）对比所获得的ＣＥ－ＥＤ指纹图谱，分别从几个不同的指纹片段鉴别草药刺五加的不同部位以及不同产地的刺五加茎。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：由天艳，周晓光，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]