一种可降解纤维素的真菌及其分离方法和应用技术

本发明专利技术适用于微生物工程技术领域，提供了一种可降解纤维素的真菌及其分离方法和应用，该真菌命名为里氏木霉LS‑1，其保藏号为CCTCC NO:M 2020220。另外，该真菌的ITS序列如序列表SEQ ID NO:1所示。该真菌具有较强的降解纤维素的能力，有望在纤维素类农业废弃物的降解中进一步发挥作用。尤其是，该真菌具有较强的降解小麦秸秆的能力，故有望在秸秆类农业废弃物的处理中发挥作用。

【技术实现步骤摘要】
一种可降解纤维素的真菌及其分离方法和应用
本专利技术属于微生物工程
，尤其涉及一种可降解纤维素的真菌及其分离方法和应用。
技术介绍
随着我国农业的蓬勃发展，给环境带来的压力也随之而来，大量的农业废弃物(如秸秆、麸皮等)没有得到正确的处理，此类农业废弃物中大多含有纤维素、半纤维素、木质素等，传统农业中对于纤维素类废弃物的处理方法即为焚烧或弃置不管，造成了极其严重的环境污染和资源浪费，也违背了我国可持续发展的发展理念，不利于建设资源节约型、环境友好型社会。因此，专利技术新型的、环保的处理农业废弃物的方法是我国农业继续蓬勃发展的重要保障。此时，可以降解纤维素的微生物进入了科学家的眼中，其降解纤维素效率高、污染少、来源广的特点使其迅速被接受并广泛应用。因此，新的、高效的纤维素降解微生物具有广阔的应用价值。微生物对于纤维素的降解主要是依赖产生纤维素酶发挥作用，而纤维素酶主要是由细菌和丝状真菌产生，但细菌产生的纤维素酶量较低，且主要是葡聚糖内切酶，多数无法分解结晶纤维素。相反的，真菌产的纤维素酶产量较大，且有多种酶活性。因此，筛选具有纤维素降解功能的真菌是一个有很大发展前途的选择。目前，已经发现的可降解纤维素的真菌大多来自于土壤或植物，而从昆虫共生菌角度发现的可降解纤维素的真菌还比较少。昆虫共生菌与其寄生的昆虫长期保持着互利共生的关系，是一类特殊生境的微生物。昆虫物种的多样性、栖息环境的复杂性、摄食对象的广泛性赋予了其复杂多样却又独特的肠道微生物菌群，昆虫肠道微生物在帮助昆虫消化食物和抵抗病原菌入侵等方面发挥着重要的作用，而此类特殊生境的微生物资源尚未得到充分的开发。因此，从昆虫肠道内分离可降解纤维素的真菌具有广阔的前景。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种可降解纤维素的真菌，旨在解决
技术介绍
中提出的问题。本专利技术实施例是这样实现的，一种可降解纤维素的真菌，其命名为里氏木霉LS-1(TrichodermareeseiLS-1)，其保藏号为CCTCCNO:M2020220，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2020年6月18日，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学。作为本专利技术实施例的一种优选方案，所述真菌的ITS序列如序列表SEQIDNO:1所示。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述真菌的分离方法，其包括以下步骤：取天牛幼虫的肠道部分；所述天牛幼虫来源于枯死的赤松的树干；将天牛幼虫的肠道部分置于含有无淀粉滤纸条的富集培养基中进行培养，得到富集培养液；从富集培养液中吸取上清液，并分别涂布于PDA培养基和MEA培养基上进行培养，然后挑取单菌落纯化，分离得到所述真菌。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，每升所述富集培养基包括以下组分：无淀粉滤纸条0.4～0.6g、NKNO30.4～0.6g、NaCl0.4～0.6g、K2HPO40.8～1.2g，MgSO4·7H2O0.4～0.6g。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，每升所述PDA培养基包括以下组分：马铃薯提取液600～800mL、葡萄糖15～25g、琼脂15～25g；所述马铃薯提取液是通过将去皮马铃薯与水进行混合后，再经煮沸和过滤制得。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，每升所述MEA培养基包括以下组分：麦芽15～25g、蔗糖15～25g、琼脂15～25g、蛋白胨0.8～1.2g。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述真菌在降解纤维素中的应用。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述真菌在降解秸秆中的应用。天牛是鞘翅目多食亚目天牛科昆虫的总称，是严重危害我国林业发展的杀手之一，给我国林业产业带来了巨大的经济损失。天牛在山东省的沿海地区广泛存在，是松属植物(如：黑松、赤松等)严重的蛀干害虫，天牛幼虫钻蛀黑松、赤松等寄主根部、树皮、树干，大量的幼虫造成松树腐烂，最终导致了松树的死亡，目前在山东多个地区引发广泛的病虫害，对森林资源存在着严重的威胁。松属植物树皮、树干中，40％～50％的成分为纤维素，因而，天牛幼虫在蛀食树干后摄入的主要是纤维素，但纤维素并无法在肠道中被吸收直接用于其生长发育，而是在肠道中将纤维素转变为可利用的物质(如：葡萄糖等)才能进行进一步利用，故猜测，天牛幼虫肠道中存在着可以降解纤维素的共生的微生物，将天牛幼虫摄入的纤维素转化为葡萄糖等可以被吸收利用的营养物质，供其生长发育。本专利技术实施例提供的一种可降解纤维素的真菌，该真菌命名为里氏木霉LS-1(TrichodermareeseiLS-1)，其具有较强的降解纤维素的能力，有望在纤维素类农业废弃物的降解中进一步发挥作用。尤其是，该真菌具有较强的降解小麦秸秆的能力，故有望在秸秆类农业废弃物的处理中发挥作用。附图说明图1为本专利技术实施例分离得到的真菌LS-1在PDA培养基上的生长情况。图2～3为本专利技术实施例分离得到的真菌LS-1的菌丝及孢子显微镜照片(40倍)。图4为本专利技术实施例分离得到的真菌LS-1在rDNA内转录间隔区(ITS)系统发育树中的位置图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1该实施例提供了一种可降解纤维素的真菌的分离方法，其包括以下步骤：S1、样品的采集与处理：在本专利技术实施例中，样品为天牛幼虫，采集于山东省威海市山东大学(威海)校园内的枯死的赤松树干内。对于天牛幼虫样品的处理如下：1、将采集到的天牛幼虫用10mL无菌水清洗两次，洗去幼虫体表的木屑及其它附着物杂质，用高温灭菌的滤纸吸去幼虫体表残留的水渍。2、用10mL的70％的乙醇再次清洗幼虫，将幼虫浸泡于70％的乙醇中，并用玻璃棒缓慢搅拌，洗涤1.5min后将幼虫取出，用高温灭菌的滤纸吸去其表面残留的乙醇。3、用10mL的3.0％的新鲜次氯酸钠溶液洗涤幼虫30s，用高温灭菌的滤纸吸去幼虫体表残余水分。4、用10mL的无菌水清洗幼虫3次，用高温灭菌的滤纸吸去幼虫体表残余水分。将洗净后的幼虫放置于无菌的培养皿中。5、将灭菌的解剖刀在酒精灯火焰上反复灼烧3次，冷却后，将天牛幼虫解剖，取其肠道部分至灭菌的研钵内，备用。S2、真菌的富集、分离、纯化与初筛：1、向上述含有天牛幼虫肠道部分的研钵中加入3mL已灭菌的生理盐水，用研磨棒充分研磨，使之混匀，静置、沉淀，备用。2、从上述研钵中取上清液1mL接入盛有100mL富集培养基(配制方法：将无淀粉滤纸条0.5g，NKNO30.5g，NaCl0.5g，K2HPO41.0g，MgSO4·7H2O0.5g，加水定容至1000mL，控制其pH为7.0)的锥形瓶中，放置于恒温摇床中，28℃，160r/min培养，每间隔24小时观察培养基中滤纸条崩解情况。3、样品富集培养7天后，选择滤纸条崩解程度较高、崩解速本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可降解纤维素的真菌，其特征在于，所述真菌命名为里氏木霉LS-1，其保藏号为CCTCC NO:M 2020220。/n

【技术特征摘要】
1.一种可降解纤维素的真菌，其特征在于，所述真菌命名为里氏木霉LS-1，其保藏号为CCTCCNO:M2020220。


2.根据权利要求1所述的一种可降解纤维素的真菌，其特征在于，所述真菌的ITS序列如序列表SEQIDNO:1所示。


3.一种如权利要求1或2所述真菌的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
取天牛幼虫的肠道部分；所述天牛幼虫来源于枯死的赤松的树干；
将天牛幼虫的肠道部分置于含有无淀粉滤纸条的富集培养基中进行培养，得到富集培养液；
从富集培养液中吸取上清液，并分别涂布于PDA培养基和MEA培养基上进行培养，然后挑取单菌落纯化，分离得到所述真菌。


4.根据权利要求3所述的一种真菌的分离方法，其特征在于，每升所述富集培养基包括以下组分：无淀粉滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：周涛，贺文俪，贺亮，周韵娴，张馨予，
申请(专利权)人：深圳市顺盛农业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44