本发明专利技术提供一种使用方法简便、一步操作、能够在短时间内测定、且能够对应各种抗原、准确而迅速地实现定量分析的免疫测定装置。本发明专利技术的免疫测定装置具有下述的四个部位：（１）使试样中的抗原与作为能够与上述抗原特异地结合的标记抗体的第一抗体反应的第一部位；（２）使未与抗原结合的第一抗体与作为结合有生物素或抗生物素蛋白的抗体的第二抗体反应的第二部位；（３）当第二抗体为生物素结合抗体时，以不能移动至第四部位的方式将抗生物素蛋白固定在固定单元上，当第二抗体为抗生物素蛋白结合抗体时，以不能移动至第四部位的方式将生物素固定在固定单元上，以上述被固定的抗生物素蛋白或生物素补足第二抗体的第三部位；以及（４）检测与抗原结合的第一抗体的标记物的第四部位。第一抗体是抗体部分为Ｆ（ａｂ’）片段或还原ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）片段或还原ＩｇＧ按特定的结合比与标记物结合的标记抗体；第二抗体是结合有生物素或抗生物素蛋白的抗体，是针对第一抗体的抗独特型抗体，并且是不能与抗原和第一抗体的结合物结合的种类的抗独特型抗体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种在临床检查等领域中利用的免疫测定装置，涉及 一种能够简便、迅速且高灵敏度地定量测定被检体中的测定对象物的 免疫测定装置。
技术介绍
作为测定血液、尿等生物试样中所含物质的方法，正在开发使用 方法简便、能够在短时间测定的简易型的免疫测定装置。近年，这种 装置被广泛地用于紧急检査、床旁等的检査等，其重要性和实用性正 在增大。作为简易型的免疫测定装置，已知以免疫色谱法、流室法、免疫 传感器法等为原理的测定装置。这些装置所采用的方法基于下述原理-在添加试样后，在进行抗原抗体反应的同时在载体上将溶液上下或左 右移动，最终获得相当于测定对象物量的信号，装置的构造也比较简 单。作为信号的检测法， 一般采用在抗体上标记以胶体金或着色胶乳 为代表的着色颗粒，读取检测线或检测面的呈色的方法。其它的方法 中，也利用测定操作复杂的由酶反应产生的呈色等。这些简易型的免疫测定装置基本上用作判定测定对象物有无的定 性用。但是，近年，为了进行更有益的诊断，尝试利用这些装置进行 定量化。这些尝试基于测定后的检测线的色调依赖于测定对象物的量 (浓度)而变化的原理。具体而言，作为译解检测线的色调的方法，开发了使用反射率计进行测定的方法、使用CCD图像传感器进行图像 分析的方法(日本专利特开平8-334511、日本专利特开2000-266751)、 根据电导率进行测定的方法(日本专利特开2001-337065)等。另外，现有技术还公开了涉及下述方法的装置，该方法是在同样 的免疫测定装置中，在全部的标记抗体中，捕捉未反应的标记抗体， 测定未被捕捉的标记抗体(即发生反应的标记抗体)。例如，美国专利 US5705338号、日本专利特开平4-16745号、日本专利特开2003-262636 号等。但是，这些装置不具有充分的定量性。再者，作为同样的现有 技术，日本专利特开平7-151757中公开了关于抗独特型抗体的使用。此外，近年，被称为Lab on Chip (芯片实验室)的技术受到瞩目。 该技术是一种根据分析对象的种类而在被称为临床分析芯片、环境分 析芯片、基因分析芯片(DNA芯片)、蛋白质分析芯片(蛋白质组芯 片)、糖链芯片、色谱芯片、细胞分析芯片、制药筛选芯片等的数平方 厘米大小的基板(生物芯片)上进行混合、反应、分离、测定和检测 等的技术。例如，在日本专利特开2001-4628中记载了在这种微芯片上 进行各种通过抗原一抗体反应的免疫分析的方法。
技术实现思路
上述的定量化的尝试，是一种意旨利用机器测定并定量化由定性 用的装置获得的检测结果的应用研究。因此，呈色的色调或强度差微 妙，定量范围狭窄，很难确保充分的定量性。虽然在检测方法中利用 酶反应的情况下，对定量化和高灵敏度化有效，但是需要洗净操作和 试液的添加等的操作，还存在背景升高等课题。另外，在使用上述微芯片时，需要洗净操作，或者需要向进行反 应的部位供给多种溶液而使其反应等的烦杂的工序，存在测定需要耗 费较长时间这样的问题。再者，还需要多个注入部和导入部，使芯片 的占有面积增大，存在不能制得小型且简易的微芯片的问题。本专利技术就是鉴于上述问题点而作出的专利技术，本专利技术的目的在于提 供一种在发挥简易型的免疫测定装置的优点的同时，即，在具有使用 方法简便、 一步操作、能够短时间测定等原有性质的同时，能够实现 能够对应各种抗原、准确而快速的定量分析的免疫测定装置。为此，本专利技术的专利技术人进行了深入的研究，结果想到，通过构成 在装置内具有四个不同部位的装置，能够进行能实现准确且迅速的定 量分析的免疫测定，从而完成本专利技术。艮口，本专利技术的免疫测定装置，其能够通过使试样中的作为测定对 象物的抗原与标记抗体特异地结合、测定其结合体的标记物而测定抗原量，在1个装置内，具有下述4个部位(1)使试样中的抗原与作为能够与上述抗原特异地结合的标记抗体的第一抗体反应的第一部位；(2)使未与抗原结合的第一抗体与作为结合有生物素或抗生物素 蛋白的抗体的第二抗体反应的第二部位；(3)当第二抗体为生物素结 合抗体时，以不能移动至第四部位的方式将抗生物素蛋白固定在固定 单元上，当第二抗体为抗生物素蛋白结合抗体时，以不能移动至第四 部位的方式将生物素固定在固定单元上，以上述被固定的抗生物素蛋 白或生物素补足第二抗体的第三部位；以及(4)检测与抗原结合的第 一抗体的标记物的第四部位。并且，以溶液能够依次移动经过各个部 位的方式构成。第一抗体是抗体部分为F(ab')片段或还原IgG、F(ab') 片段或还原IgG按特定的结合比与标记物结合的标记抗体，包含在第 一部位或其邻接部；第二抗体是结合有生物素或抗生物素蛋白的抗体， 是针对第一抗体的抗独特型抗体，并且是不能与抗原和第一抗体的结 合物结合的种类的抗独特型抗体，包含在第二部位或其邻接部。在本专利技术的免疫测定装置中，优选相对于测定对象物含有过量的 第一抗体，并优选相对于第一抗体也含有过量的第二抗体。第一抗体 能够利用例如酶标记。再者，还可以在第一部位的邻接部设置抗体保 持部，在那里保持第一抗体。在第四部位能够保持用于检测标记物的试剂。此外，也能够在第 四部位的邻接部设置底物保持部，在该部位预先保持该试剂。作为该 试剂，可以例示电子传递介质和/或显色底物等。所谓底物保持部， 意指预先或者其即将使用之前保持用于检测标记物的试剂的全部或部 分的部位。本专利技术的免疫测定装置，也能够制成生物芯片状的装置。此时， 四个部位分别由微小的空间构成，作为固定单元，能够使用例如微颗 粒，能够设定为通过不使作为固定单元的微颗粒流通的通道部隔离第 三部位和第四部位的形态。这样的生物芯片状的装置中，在第四部位 形成一对电极，能够采用电化学方法检测标记物。本专利技术还涉及一种免疫测定方法，该方法使试样中的作为测定对 象物的抗原与作为与上述抗原特异地结合的标记抗体的第一抗体反 应，接着使未反应的第一抗体与作为结合有生物素或抗生物素蛋白的 抗体的第二抗体反应，之后，当上述第二抗体为生物素结合抗体时，使用抗生物素蛋白捕捉上述第二抗体，当上述第二抗体为抗生物素蛋 白结合抗体时，使用生物素捕捉上述第二抗体，检测未被捕捉的抗原和第一抗体的结合物。上述第一抗体是抗体部分为F (ab')片段或还 原IgG、 F (ab')片段或还原IgG按特定的结合比与标记物结合的标记 抗体；上述第二抗体是针对第一抗体的抗独特型抗体，并且是不能与 抗原和第一抗体的结合物结合的种类的抗独特型抗体。在本专利技术的免疫测定方法中，同样优选相对于测定对象物含有过 量的第一抗体，并优选相对于第一抗体也含有过量的第二抗体。此外， 优选采用电化学方法或光学方法进行测定对象物的检测。专利技术的效果利用本专利技术的免疫测定装置，能够操作简便、迅速且高灵敏度地 进行定量测定。特别是通过利用生物素一抗生物素蛋白的结合性，能 够在更短的时间内完成测定。因此，能够用于紧急检査、床旁的诊察， 在医疗领域内的实用性极高。同时，能够容易地应用于对各种测定对 象抗原的检测，通用性高。附图说明图1为显示本专利技术的测试条状的装置的一个实施方式的平面图。 图2为显示本专利技术的测试条状的装置的另一个实施方式的平面图。 图3为显示本专利技术的生物芯片状的装置的一个实施方式的平面图 和剖面图。图4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫测定装置，其能够通过使试样中的作为测定对象物的抗原与标记抗体特异地结合、测定其结合体的标记物而测定抗原量，其特征在于： 在１个装置内，具有下述４个部位： （１）使试样中的抗原与作为能够与所述抗原特异地结合的标记抗体的第一抗体反应的第一部位； （２）使未与抗原结合的第一抗体与作为结合有生物素或抗生物素蛋白的抗体的第二抗体反应的第二部位； （３）当第二抗体为生物素结合抗体时，以不能移动至第四部位的方式将抗生物素蛋白固定在固定单元上，当第二抗体为抗生物素蛋白结合抗体时，以不能移动至第四部位的方式将生物素固定在固定单元上，以所述被固定的抗生物素蛋白或生物素补足第二抗体的第三部位；以及 （４）检测与抗原结合的第一抗体的标记物的第四部位， 并且，以溶液能够依次移动经过各个部位的方式构成， 第一抗体是抗体部分为Ｆ（ａｂ’）片段或还原ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）片段或还原ＩｇＧ按特定的结合比与标记物结合的标记抗体，包含在第一部位或其邻接部； 第二抗体是结合有生物素或抗生物素蛋白的抗体，是针对第一抗体的抗独特型抗体，并且是不能与抗原和第一抗体的结合物结合的种类的抗独特型抗体，包含在第二部位或其邻接部。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：林阳子，竹广敦，
申请(专利权)人：罗姆股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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